微生物检验项目性能验证ppt课件

1 Com.30550： Instrument/Equipment Performance Verification The performance of all instruments and equipment is verified upon installation and after major maintenance or service to ensure that they run according to expectations.2015/07/28 仪器 /设备性能验证所有仪器和设备在安装后以及重要维护保养服务后应进行性能验证，以确保其可以按照预期运行。NOTE： Performance verification is necessary after repairs or replacement of critical components of an instrument or item of equipment. 维修或更换仪器，或者更换仪器关键部件后必须进行性能验证2 CNAS-CL042： 5.5.1.2:新的鉴定系统使用前，应查阅已发表的完整、科学的系统评估文献作为性能验证 的初级证据，再按优先顺序依次选择标准菌株、质控菌株或其它已知菌株对商业鉴定 系统（包括自动、半自动、手工）每种板（条 /卡 /管）的鉴定 /药敏结果的符合性进行 验证。 CNAS-CL042： 5.3.1.5如果设备故障影响了方法学性能，在设备修复、校准后，实验室可通过检测质控 菌株或已知结果的样品的方式进行性能验证。 3 CNAS-GL41： 临床微生物检验程序验证指南 ，在常规应用前，应由实验室对未加修改而使用的已确认的检验程序进行独立验证。实验室应从制造商或方法开发者获得相关信息，以确定检验程序的性能特征。 2016/5/304 微生物检验程序包括：显微镜检查、分离培养和鉴定、药物敏感试验，血清学检查，抗原检查等各项检验活动，5 实验室应根据分析类型和用途进行验证程序的设计、验证结果的统计学分析、建立新检验程序的可接受性能标准。 验证结果应证明该检验程序可用于检测或准确分析待测物的特点，通常验证计划和可接受标准应在验证开始前确定。CNAS-GL41:4.26 验证计划和可接受标 准应与该分析物相关的国家 /行业标准 /权威出版物等保持一致。 定义可接受标准的方法之一是根据医学和临床要求确定总允许误差，但通常应用于定量检测。定性检测的可接受标准可以用 一致性（符合率） 表达。CNAS-GL41:4.27 检验程序验证所使用的标本应为合格的临床标本或从回顾性 /前瞻性临床标本中分离的菌株。 标本的采集应符合国家、地区法规要求。 已通过一种或多种方式确定性能的标准菌株或质控品（如国家或地方临床检验中心使用过的质控菌株）也适用。CNAS-GL41:4.28CNAS-GL41:4.3 9 涂片制备 染色镜检染色方法包括手工染片和自动化仪器染片 结果报告 应在检验项目开展前进行性能验证，并由有经验的实验人员操作 所有样品及容器应当作具有传染性的物质，应按照实验室生物安全要求进行操作 。CNAS-GL41:4.310包括能力验证 /实验室间比对，实验室内人员比对 ,实验室如果开展手工染片和自动化染片，应该对两种方法进行实验室内比对。 CNAS-GL41:4.311 样品数量1.每项检查至少 5份样本2.需覆盖全部样本类型3.无菌样本类型应包含阳性和阴性结果4.应优先选择使用已知结果的留样 样本，不可获取时采用模拟样本CNAS-GL41:4.312 按照临床标本常用检验方式处理，由工作人员进行操作 进行手工染片和自动化仪器染片时涂片需同时制备两份 进行实验室间比对和能力验证时，需由当日在岗人员进行涂片，染色，镜检，结果报告 进行实验室内人员比对时，由本岗位人员负责制片，染色，所有从事显微镜检查的人员 进行镜检，结果报告，由专人进行结果统计。CNAS-GL41:4.313 结果报告根据实验室程序文件规定进行结果报告。抗酸染色按照要求进行分级报告。 可接受标准 每项检查结果符合率 80%。CNAS-GL41:4.314菌株或标本 手工染色结果 机染结果 试验符合情况标准菌株大肠埃希菌 ATCC25922 红色 红色 符合流感嗜血杆菌 CMCC 58534 红色 红色 符合金黄色葡萄球菌 ATCC25923 紫色 紫色 符合肺炎链球菌 CMCC 31533 紫色 紫色 符合白色念珠菌 ATCC14053 紫色 紫色 符合混合菌 明显区分 明显区分 符合临床菌株粪肠球菌 紫色 紫色 符合屎肠球菌 紫色 紫色 符合金黄色葡萄球菌 紫色 紫色 符合表皮葡萄球菌 紫色 紫色 符合无乳链球菌 紫色 紫色 符合阴沟肠杆菌 红色 红色 符合鲍曼不动杆菌 红色 红色 符合肺炎克雷伯菌 红色 红色 符合铜绿假单胞菌 红色 红色 符合嗜麦芽窄食单胞菌 红色 红色 符合光滑念珠菌 紫色 紫色 符合近平滑念珠菌 紫色 紫色 符合热带念珠菌 紫色 紫色 符合新型隐球菌 紫色 紫色 符合白色念珠菌 紫色 紫色 符合临床标本痰 1 明显区分 明显区分 符合痰 2 明显区分 明显区分 符合痰 3 明显区分 明显区分 符合痰 4 明显区分 明显区分 符合痰 5 明显区分 明显区分 符合血及无菌体液 1 明显区分 明显区分 符合血及无菌体液 2 明显区分 明显区分 符合血及无菌体液 3 明显区分 明显区分 符合血及无菌体液 4 明显区分 明显区分 符合血及无菌体液 5 明显区分 明显区分 符合分泌物 1 明显区分 明显区分 符合分泌物 2 明显区分 明显区分 符合分泌物 3 明显区分 明显区分 符合分泌物 4 明显区分 明显区分 符合分泌物 5 明显区分 明显区分 符合粪便 1 明显区分 明显区分 符合粪便 2 明显区分 明显区分 符合粪便 3 明显区分 明显区分 符合粪便 4 明显区分 明显区分 符合粪便 5 明显区分 明显区分 符合15CNAS-GL41:4.4.2 16 一般培养包括各类标本的细菌、真菌、支原体的培养。 标本类型包括痰液、尿液、粪便、分泌物、组织等 细菌包括厌氧菌和分枝杆菌等 培养程序包括标本处理、接种、培养基选择、培养条件选择等CNAS-GL41:4.4.217 每项检查，每种样本至少 1份标本 无论商品化培养基还是自配培养基，都需要在使用前对培养基性能进行验证，验证菌株可选择质控菌株或临床菌株。 标准菌株、能力验证 /室间质评活动使用的菌株、从临床病人标本分离的具有稳定表型的菌株均可用做验证菌株，实验室对其生化特征及鉴定结果应做好相关记录。CNAS-GL41:4.4.218 直接接种法按照实验室细菌分离培养的 SOP，将待测标本接种到相应的培养基上，观察菌落生长情况。注意：在直接接种法验证不合格的情况下要采用标准化菌悬液进行验证。CNAS-GL41:4.4.219标准化菌悬液法1.菌悬液制备1）直接菌落法：挑取培养 18-24h的菌落，在生理盐水中制备成 0.5Mcf的菌悬液2）生长法：从培养 24h的培养物中挑取 3-5个菌落至无菌肉汤中，孵育数小时使其达到 0.5McfCNAS-GL41:4.4.220 标准化菌悬液法2.接种1）验证非选择培养基用无菌肉汤或生理盐水将配置好的菌悬液进行 1:100稀释，每个平板接种 10uL，均匀涂布接种。如生长过密则进行1:1000稀释2）验证选择性培养基用无菌肉汤或生理盐水将配置好的菌悬液进行 1:10稀释，每个平板接种 10uL，均匀涂布接种。如生长过密则进行 1:100稀释3）验证培养管用 10uL未经稀释的菌悬液进行接种。CNAS-GL41:4.4.221 在选择性培养基上验证菌株 长势良好 、菌落大小与预期相符、 菌落形态典 型 ，并且能够 抑制 特定微生物的生长，可判定性能符合要求，验证合格。 在非选择性培养基上验证菌株 长势良好 、菌落大小与预期相符、 菌落形态典 型 ，血培养基上的 溶血类型符合 ，可判定非选择性培养基验证合格。CNAS-GL41:4.4.222CNAS-GL41:4.4.1 23 临床微生物室血培养系统验证的目的是评估系统使用的培养基能否用于培养临床常见微生物，以及仪器是否能及时检测出血液中大部分的微生物。CNAS-GL41:4.4.124 血培养性能验证常用留样验证和血培养系统平行比对两种方法。 本实验室采用的是留样验证的方法，操作过程参照 XJ-SOP-006细菌室检验项目性能验证 CNAS-GL41:4.4.125 验证应覆盖临床常见微生物 需氧成人 /儿童血培养瓶验证菌株应包括 :需氧 /兼性 厌氧革兰阳性菌、需氧 /兼性厌氧革兰阴性菌、苛养菌（如：流感嗜血杆菌、肺炎链球 菌等）和真菌， 厌氧血培养瓶验证菌株应包括兼性厌氧革兰阳性菌、兼性厌氧革兰阴 性菌、专性厌氧菌， 其他特殊用途血培养瓶参照厂家要求选择合适类型菌株进行验 证。CNAS-GL41:4.4.126 每种类型至少株，总体不少于 15 株。应尽可能使用真实患者的临床分离菌株 （性能验证用临床留样菌株宜经质谱或 DNA 序列分析确认）。对于特殊、苛养菌可使 用标准菌株或质控菌株。 某些特殊菌株需要在培养瓶中加入无菌、未使用抗生素的厂 家推荐血液标本，如不加可能不生长，如流感嗜血杆菌。CNAS-GL41:4.4.127 模拟临床血流感染患者的细菌含量。 若苛养菌需添加适量的新鲜无菌血液（成人瓶 5-10ml，儿童瓶 1-3ml）后置于血培养系统上进行培养、检测。 CNAS-GL41:4.4.128 挑取培养 18-24h的新鲜培养物，