分子杂交技术

* * * * 分 子 杂 交 * * * *分子生物学中用于检测生物样本中是否含有特定的生物分子（探针）的一门技术。分 子 杂 交 原 理 及 流 程 图样品制备电泳杂交转膜结果显示探 针 制 备* * * 分 子 杂 交 分 类 * * * Southern Blot-DNA杂交 Northern Blot-RNA杂交 Western Blot-蛋白质杂交 原 位 杂 交* * * * 样 品 制 备 * * * * DNA 纯 化 RNA 纯 化* * * * 探 针 制 备 * * * *随机引物法合成高特异活性的 DNA探针 NEBLotKit特 点：* 活性高： 109 dpm / ug* 标记效率高：可用于 5 ng-2 ug的模板 DNA量模板量用 途基因文库筛选Southern 杂交Northern 杂交原位杂交随机引物法双链 DNA探针合成标记优化技术 DECAprimeTMII Random Priming DNA Labeling Kit优化技术：* 高纯度无外切酶活性的 Klenow酶提高了标记效率10分钟完成反应* 改进的标记动力学增加了探针产量对低纯度及低浓度模板也能通过延长反应时间达到目的* 独特的 Decamer溶液提高引物 -模板复合物稳定性减少引物双体形成，提高了灵敏度* 标记灵活：提供 dATP和 dCTP 两 种标记缓冲液特异性单链 DNA探针合成标记优化技术 Prime-A-ProbeTM Strand Specific DNA Probe Synthesis Kit活性大于4 cpm / ug109合成高特异性全长 RNA探针的最佳选择 MAXIscriptTM 体外转录试剂盒特 点：* 可合成长达 2kb的 RNA* 产量可达 2-4ug/ ul同位素标记可达 109 cpm/ug* 对应不同的启动子有不同的试剂盒可供选择* 同位素或非放标记均可多次洗脱反复杂交探针制备技术 Strip-EZTM System专门为需要在同一张膜上反复标记检测不同信号的用户设计，提供非常温和的杂交信号洗脱条件，提高膜的使用寿命达通常的三倍左右。工 作 原 理合成探针的同时掺入经过修饰的 dNTP(修饰不影响杂交特性）杂交检测后将膜浸入探针降解缓冲液中将探针降解68 温和洗脱适用于： NorthernSoutherndot/slot及相关杂交Strip-EZTMRNA探针合成Strip-EZTMRNA Probe Synthesis & Removal Kit特 点：* 灵敏度高比随机引物法 DNA探针灵敏 10倍以上* 温和洗脱，提高膜寿命* 不同启动子有不同试剂盒* 同位素和非放标记均可效 果 比 较PCR 法 Strip-EZTMDNA探针的合成Strip-EZTM PCR Stripable DNA Probe Synthesis & Removal Kit特 点：* 模板多样：克隆序列、 cDNA、 PCR产物*不对称 PCR技术，产物大多为单链 DNA探针*灵敏度高，比随机引物法高 3-5倍*提供除模板、标记物、 Taq 酶外所有合成探针及洗膜试剂，包括 M13正反向及 T7引物cDNAdsDNAssDNAssRNAOligonucleotidessRNAssDNAdsDNAOligonucleotideProbe Type* * * * 标 记 类 型 * * * * 放射性同位素标记：灵敏度高，成本低但操作不便，标记效率不太稳定，寿命受半衰 期限制 非放射性标记（地高辛、生物素、荧光素等）：安全，标记稳定，探针寿命较长但灵敏度较低，背景较高，成本高非 放 射 性 杂 交 系 统BrightStarTMPsoralen-Biotin Nonisotopic labeling Kit & BioDetectTM Nonisotopic Detection Kit 灵敏度最高的非放检测系统之一 BioDetectTM Nonisotopic Detection Kit采用的化学发光剂 CDP-Star为 发光最强、发光时间最长的化学发光底物之一，灵敏度与同位素相当。* 曝光 10-30分钟相当于 32P压片 1-2天* 发光时间稳定持续 2天，发光峰值无明显下降允许反复多次压片* 背景很低Phototope 化 学 发 光 系 统NEBlot Phototope Kit & Phototope -Star Chemiluminescent Detection KitNorthern 杂交Southern 杂交Phage文库筛选菌落及质粒文库筛选用 途原位杂交及检测试剂盒mRNAlocator-HybTM In Situ Hybridization KitmRNAlocator-BiotinTM mRNA In Situ Detection Kit6小时完成杂交RNasecure 保证无 RNase污染高效灵敏的NBT/BCIP-生物素探针显色检测提供对照改良的 Northern杂交技术 Ambion 公司的 Northern杂交系列完整的 Northern杂交试剂盒包括从琼脂糖、上样、配胶、电泳、转移缓冲液到杂交、洗膜液，除 RNase、 膜、 Marker的全套试剂。简便、无污染、背景低、分辨率高；同位素、非放标记均可杂交用琼脂糖及聚丙烯酰氨凝胶 电泳胶专业厂家： BMA公司Agarose & PAGE 预制胶Reliant gel systemReliant RNA gel systemPAGEr Precast gels NEB公司各种规格的优质DNA / RNA / Protein MW M