吲哚乙酸氧化酶活性的测定

P144熟悉运用比色法测定吲哚乙酸熟悉运用比色法测定吲哚乙酸氧化酶活力的方法，并掌握测定酶氧化酶活力的方法，并掌握测定酶活力的基本要求。活力的基本要求。实验目的实验原理吲哚乙酸在吲哚乙酸氧化酶的作用下，被氧化破坏失去活力。植物体内吲哚乙酸氧化酶活力的大小，对调节体内吲哚乙酸的水平起着重要的作用，从而影响植物的生长。酶活力的大小可以其破坏吲哚乙酸的速度表示。吲哚乙酸的含量可用比色法测定。IAA +FeCl3 红色螯合物绿豆芽的下胚轴绿豆芽的下胚轴 。实验材料上胚轴 :子叶到第 1片真叶之间的部分下胚轴 :子叶与根之间的一部分下下胚胚轴轴取材部位 处理： 在试管中加入： MnCl2 1ml +2， 4-二氯酚 1ml + IAA 2 ml+酶液 1 ml+磷酸缓冲液 5ml对照： 在试管中加入： MnCl2 1 ml +2,4-二氯酚 1ml + IAA 2 ml+ 磷酸缓冲液 6ml 称取 1g下胚轴，置于研钵中，加入预冷的磷酸缓冲液 (pH=6.1)1ml， 研磨成匀浆，再用 9ml分 2次冲洗，总体积为 10ml。离心 4000rpm 10min，所得的上清夜即为粗酶液。 IAA含量的测定方法步骤标准曲线的绘制。IAA氧化酶需要两个辅助因子：一元酚和二价离子 Mnq计算时间 (h)IAA氧化酶活力 = (gIAA/hml)对照 处理 (g/ml) 10q保温： 30 温箱中 30min； q显色：三支试管中分别加入处理液、对照液、蒸馏水各 2ml后，再分别加入试剂 A8ml，摇匀，40 黑暗处 30min(15-20min)；q用分光光度计在 530nm波长处测 A值；q查标准曲线；v 简述简述 IAA 氧化酶活力测定的原理。氧化酶活力测定的原理。v 制备酶液时，为何加入制备酶液时，为何加入 pH 6.1 的磷酸缓冲液。的磷酸缓冲液。v 酶促反应时，为何要加入酶促反应时，为何要加入 MnCl2和和 2， 4-二氯酚。二氯酚。v 比色时，为何要选在比色时，为何要选在 530nm波长处？波长处？v 现有黄豆芽、绿豆芽两种材料，测定黄豆芽的吸现有黄豆芽、绿豆芽两种材料，测定黄豆芽的吸光度值为光度值为 A1， 绿豆芽的吸光度值为绿豆芽的吸光度值为 A2， 且且 A1A2， 试比较这两种材料下胚轴中哪个试比较这两种材料下胚轴中哪个 IAA氧化酶活氧化酶活力大，为什么？力大，为什么？实 验实 验（设计性实验）结果总结培养基 接种数(瓶 *片）最早出愈时间（ d）出愈率（% ）污 染率（ % ）愈 伤 生 长情况MS+2,4-D1.0 13*3 18 97.43 7.69 切口 处较 多出愈，黄色 颗 粒状，偶 见 灰白色愈 伤 MS+2,4-D1.0+6-BA0.412*3 17 100 0 切口及与培养基接触 处 生 长愈 伤 ，黄色透明， 较 湿 润 MS+2,4-D1.0+6-BA1.012*3 16 100 0 切口及与培养基接触 处 生 长愈 伤 ，黄白色，湿 润 不同培养基 对怀地黄愈伤组织生长情况的影响结果总结I型愈伤组织 型愈伤组织 型愈伤组织培养基（ mg/L)接种数（瓶 *株）出芽 时间(d)平均叶片数（个 /株）增 值 系数MS+NAA 0.02 13*3 20 2 2MS+NAA