乙型病毒性肝炎的实验室检查

乙型病毒性肝炎的实验室检查报告人：付红伟天津医大总医院检验中心2011.1.21我国 HBV感染概况 一般人群 HBsAg携带率高达 7.18%； 现有慢性 HBV感染者约 9 300万人 ，占全世界的 1/4； 其中慢性乙型病毒性肝炎患者超过 2 000万例，占全世界慢性乙肝患者的 1/3； 15岁以下儿童 HBsAg携带率下降显著， 1-4岁组仅为0.96%； 1 4岁组 HBsAb阳性率由 1992年 15.75%升至 72.25%; 抗 HBcAb阳性率由 1992年 30.08%降至3.76%；2HBV基因组HBV DNA是由 长链 L (负链 ) 和 短链S (正链 ) 组成的不完全双链环状DNA，短链的长度相当于长链的 50% 85%。 HBV DNA长链载有病毒蛋白质的全部密码，有 4个开放读码框架 (ORF)，分别称为 S、 C、 P和 X区 。编码 7个蛋白质。HBV DNA易发生变异，特别是前 S或S区基因较易突变。嗜肝 DNA病毒的共同特点：内含 33.3kb松散环状、部分双链 DNA基因组及 DNA聚合酶；病毒的复制需逆转录过程。 3HBV抗抗 原 和抗体系统和抗体系统表面抗原 (HBsAg)： HBV外膜糖蛋白 =S+L+M蛋白S蛋白：狭义的 HBsAg指 S蛋白。HBsAg阳性说明机体有 HBV感染。中分子蛋白： preS2+S大分子蛋白： preS1+preS2+SS蛋白 中分子蛋白大分子蛋白PreS1 PreS2 S1.HBsAg和抗 -HBse抗原 (HBeAg)：是可溶性蛋白质只存在于血液中是病毒复制和传染性的标志e抗体 (抗 -HBe)：对 HBV感染有一定的保护作用其出现标志着病毒复制减少、传染性降低前 C区 C区前 C / C 蛋白HBeAg HBcAg表达切割、加工HBeAg只存在于血清中HBV C基因分泌到细胞外2. HBeAg 和抗 -HBe5HBV 的三种形态1,Hepatitis B virion(Dane particle)2,secreted filament3,secreted sphere67HBV 自然复制周期8生物化学检测1HBV血清标志物的检测2HBV 分子生物学诊断3HBV临床药物疗效检测4HBV感染的实验室检查1.乙型肝炎的生物化学检测主要指标 ： ALT, AST, ASTm， 血清白蛋白， 血清胆红素， 胆碱酯酶 , 甲胎蛋白 , 凝血酶原时间 (PT)及部分凝血因子 ；9 方法学的发展 ELISA： 灵敏性高，成本低，适用于普通病人筛查； 胶体金免疫层析法 (金标法 )： 简便易行，可用于急诊病人快速检测； 化学发光法定量检测： 价格昂贵，可用于 HBVMs为临界值的病人的确证； 可间接反映宿主 HBV的复制水平，在评价抗病毒治疗的病毒学应答、疗效和判断预后方面有重要意义。 新增检测指标 PreS1、 PreS2及其相应抗体 对乙肝两对半的新认识102. HBV 血清标志物检测11HBV血清标志物检测方法的成本效果分析 (1)12HBV血清标志物检测方法的成本效果分析 (2)Back13Terminal protein Spacer Reverse Transcriptase (RT) RNaseHrt1 rt344preS1 preS2 Ss1 s266HBsAgXMutation of S HBeAg 阴性， HBV DNA 载量 104 copies/ml, ALT 2 ULN; HBV DNA持续阳性，年龄 40岁， ALT大于正常上限，也可给予抗病毒治疗； HBV DNA持续阳性，年龄 40岁， ALT持续正常，应密切随访，动态观察疾病进展，必要时行肝组织检测，有病变证据时，可以给予抗病毒治疗； 23HBV 感染抗病毒治疗的疗效评估 治疗终点： HBV DNA 明显下降或低于检测下限，并伴有 ALT正常； HBV DNA 水平治疗开始后 3个月内持续下降 1 log以上才说明治疗有效； 每日 0.5mg恩替卡韦治疗 1年时 , HBeAg 阳性和阴性慢性乙型肝炎患者 HBV DNA 检测不到率分别为 67% 和 90%, 恩替卡韦的 HBeAg转换率为 21% , 与其他口服抗病毒药相似。 并不以 HBeAg转阴或 HBsAg转阴为治疗终点或目标。24HBV DNA 定量检测试剂盒的性能对比2526同时可以实现对 HCV,HIV-1,衣原体，及淋病的一体化检测 Back病毒基因突变 疾病进展 临床表现 对干扰素应答耐药变异生化学改善HBeAg血清学转换HBV DNA清除急性乙型肝炎 慢性乙型肝炎 肝硬化(LC)肝细胞癌(HCC)27HBV基因型 /基因亚型分型方法 优缺点序列测定法 最直接，最可信，是 HBV基因分型的金标准，但繁琐费时而且价格昂贵，混合型检测能力差，不适于大样本检测。 聚合酶链反应 -限制性片段长度多态性分析法 (PCR-RFLP)较测序法简便，适于大样本检测，但由于需要进行酶切，所以操作仍较为繁琐，成本较高，并存在酶切不彻底等问题。 pre-S2单克隆抗体酶联免疫测定 (mAbs EIA法 )简单、快速，已商品化，适于大样本检测，但检测费用较高并不能有效鉴别有些混合型感染和 HBsAg低表达及某些表位表达不充分的标本。分子探针杂交法 简单、快速，对混合型检测非常敏感，已商品化，适于大样本检测，但检测费用较高而且灵敏度和特异度还有待提高。型特异性引物 PCR法 简单、快速，成本低，具有较高的灵敏度，适于流行病学研究和临床大样本检测。但特异度还有待提高。常用 HBV基因分型方法比较28B型 特异性 “ 引物对 ” 的特异度分析B型 特异性引物 HB（正义链）： 5-ACC GTG AAC GCC CAC MGG AA-329Back4.HBV 临床药物治疗监测 乙肝病毒的耐药性检测，是 精准治疗乙肝 的关键！ 目前由于治疗不够规范，造成我国目前超过 95%的乙肝患者发生耐药