微生物8细菌感染的检查方法与防治原则

海南医学院海南医学院 病原生物学教研室病原生物学教研室 饶朗毓饶朗毓2011本科1目的要求掌握： 病原菌的常规分离与鉴定方法原则；疫苗的概念；死疫苗和活疫苗的概念及区别；类毒素的概念和特点；人工主动免疫和人工被动免疫的比较。熟悉： 细菌形态学检查的方法；血清学诊断的方法。了解： 细菌的免疫学诊断技术；亚单位疫苗和 DNA疫苗。2感染性疾病的诊断3微生物学诊断微生物学诊断样本采集与送检原则样本采集与送检原则检验程序检验程序血清学诊断血清学诊断原则：采取急性期和原则：采取急性期和恢复期双份血清，后恢复期双份血清，后者的抗体效价比前者者的抗体效价比前者升高升高 4倍者有意义。倍者有意义。检测病原菌及其抗原、产物或核酸检测患者血清中的特异性抗体4一一 .细菌标本采集与送检原则细菌标本采集与送检原则1. 采集合适的标本采集合适的标本2. 严格无菌操作严格无菌操作3. 正确采集标本正确采集标本4. 正确标记及包装正确标记及包装5. 正确运输及保存正确运输及保存5二、致病菌的检验程序二、致病菌的检验程序形态学检查分离培养生化试验 血清学试验动物实验药敏试验快速检测方法初步诊断明确诊断6（一）细菌的形态学检查（一）细菌的形态学检查几种常用的显微镜：普通光学显微镜暗视野显微镜相差显微镜荧光显微镜电子显微镜7直接涂片染色镜检直接涂片染色镜检菌体形态、排列、大小、染色性、特殊结构 初步鉴定8单 染 法 只显示细菌的形态与排列复 染 法 可观察细菌的形态、排列及其染色性革兰 染色（ Gram stain)抗酸 染色（ Acid-fast stain)特殊染色法 荚膜染色、芽胞染色、鞭毛染色、异染颗粒染色法9步骤： 结果 :阳性菌 紫色 阴性菌 红色结晶紫初染碘液媒染乙醇脱色复红复染涂片固定由丹麦医生 Hans Christian Gram于 1884年 创立 。革兰染色法（ Gram Stain）10步骤：涂片固定5%石炭酸复红初染3%盐酸酒精脱色美蓝复染镜检抗酸染色法 结果 :抗酸菌 红色 ； 非抗酸菌 蓝色 。11特殊染色法l 细胞壁染色法l 荚膜染色法l 芽胞染色法l 鞭毛染色法l 异染颗粒染色法12（二）分离培养与鉴定（二）分离培养与鉴定液体培养基： 增菌培养半固体培养基： 查动力或保存菌种固体培养基： 平板用于分离培养斜面用于纯培养或保存菌种13菌落colony大小、形状、色泽、边缘、透明度、凹凸、湿润度、溶血现象 14细菌的生长现象细菌的生长现象 固体培养基固体培养基光滑型粘液型粗糙型15细菌的生长现象细菌的生长现象 固体培养基固体培养基与鉴定细菌有关的菌落特征： （ 1）溶血（ 2）色素（ 3）气味16（三）生化试验（三）生化试验（ biological tests）糖类代谢糖类代谢糖发酵试验VP试验（ Vi）甲基红试验（ M）枸橼酸盐利用试验（ C）蛋白质代谢蛋白质代谢靛基质（吲哚）试验（ I）硫化氢试验尿素分解试验17糖发酵试验糖发酵试验产酸产酸 产酸产气产酸产气不产酸不产酸不产气不产气原理：不同细菌因酶系统不同，原理：不同细菌因酶系统不同，能分解不同的糖；细菌分解糖后能分解不同的糖；细菌分解糖后能产酸；如某些细菌因具有特殊能产酸；如某些细菌因具有特殊的解氢酶则进一步分解酸产气。的解氢酶则进一步分解酸产气。用途：用途：肠杆菌科细菌的鉴定肠杆菌科细菌的鉴定如：大肠埃希菌如：大肠埃希菌伤寒沙门菌伤寒沙门菌 +痢疾志贺菌痢疾志贺菌 碳水化合物代谢试验18吲哚试验吲哚试验原理：分解细菌（含色氨酸酶）色氨酸 吲哚（靛基质）对二甲基氨基苯甲醛玫瑰吲哚应用：肠道杆菌鉴定如： 大肠埃希菌 +沙门菌属 蛋白质和氨基酸代谢试验19（四）血清学鉴定（四）血清学鉴定（ serological tests） 已知抗体（抗血清） 待检抗原 （未知菌）直接法 玻片凝集试验（ 定性试验 ）20（五）动物试验（五）动物试验 主要用于分离、鉴定致病菌，测定菌株产毒性等2122（六）药物敏感试验（六）药物敏感试验 纸片琼脂法纸片琼脂法 测量抑菌环直径测量抑菌环直径 2324（ 1）沉淀反应（）沉淀反应（ precipitation）可溶性抗原 （细菌可溶性抗原、免疫球蛋白、细胞裂解物、组织浸液等）与相应抗体结合， 形成不溶性免疫复合物，出现 不透明的沉淀物 。多在半固体琼脂凝胶上进行，形成白色的沉淀。可分为单向免疫扩散试验、双向免疫扩散试验、免疫电泳、免疫比浊法等。（七）病原菌的抗原检测（七）病原菌的抗原检测25沉淀环环的直径与抗原含量成正相关抗体混于琼脂凝胶中制板对流免疫电泳 26（ 2）协同凝集 ：用 SPA测脑膜炎奈瑟菌、痢疾杆菌、伤寒杆菌可溶性抗原作早期诊断。（ 3）免疫荧光法 ：痢疾杆菌荧光 Ab 培养基 +粪便标本 荧光菌球（ 5）免疫印迹技术： 对细菌蛋白的检测（ 4）酶免疫测定 ： ELISA测淋球菌、肠道菌抗原检测。27协同凝