微生物技术部分

（二）无菌技术无菌操作泛指在培养微生物的操作中，所有防止杂菌污染的方法。1、目的：防止外来杂菌入侵，获得纯净培养物p152、方面： p15*实验操作空间、操作者衣着和手，进行清洁和 消毒*微生物培养的器皿、接种工具和培养基 灭菌*实验操作在酒精灯火焰附近进行*避免已经经过灭菌处理的材料与周围物品接触比较 含 义 常用方法消毒使用 较为 温和的物理或化学方法 仅杀 死物体表面或内部一部分 对 人体有害的微生物， 不包括芽 孢 和 孢 子 。 p15灭菌使用 强 烈的理化因素 杀死物体内外所有微生物， 包括芽 孢 和 孢 子。p15高压蒸汽灭菌灼烧灭菌干热灭菌煮沸消毒法；巴氏消毒法；化学药剂消毒；定 义 常用方法 处 理 对 象消毒使用 较为 温和的物理或化学方法 杀 死物体表面或内部的部分微生物煮沸 玻璃 仪 器巴氏消毒法 不耐高温的液体紫外 线 实验 室、操作台化学 药剂 消毒：如酒精溶液 手，操作台等灭菌使用 强 烈的 理化因素 杀 死物体内外 所有 的微生物， 包括芽 孢 和 孢 子培养基、棉塞、玻璃 仪 器等接种 环 、涂布器玻璃 仪 器3、灭菌与消毒：高压蒸汽灼烧干热定义 常用方法 微生物培养和组培中的应用消毒使用较为温和的物理或化学方法杀死物体表面或内部的部分微生物煮沸 玻璃仪器紫外线 实验室、操作台、衣物等酒精溶液 手、外植体等次氯酸钠溶液等 外植体灭菌使用强烈的理化因素杀死物体内外所有的微生物，包括芽孢和孢子高压蒸汽 培养基 、玻璃仪器、棉塞、牛皮纸等灼烧 接种环、涂布器干热 玻璃仪器121 ， 100kPa， 1530min接种用具、试管口、瓶口放在酒精灯火焰的充分燃烧层中进行灼烧灭菌将玻璃器皿、金属用具等能耐高温并需要保持干燥的物品放到干热灭菌箱内， 160-170 下加热1-2h。二、基本操作程序（以大肠杆菌的纯化为例）配制培养基 包装器材灭菌菌种扩增倒平板接种倒置培养观察、记录、分析保存菌种配制培养基称量计算 溶化物质 牛肉膏 蛋白胨 NaCl 琼脂 水重量 5g 10g 5g 20g 定溶至 1000mL电子天平和称量纸调节 PH溶化营养 琼脂（搅拌） 加水定容 调节 PH高压蒸汽灭菌二、基本操作程序（以大肠杆菌的纯化为例）配制培养基 包装器材灭菌菌种扩增倒平板接种倒置培养观察、记录、分析保存菌种高压蒸汽倒平板60 左右，酒精棉球擦手，点酒精灯；操作过程倒平板微生物的接种（纯化）单菌落二、基本操作程序（以大肠杆菌的纯化为例）配制培养基 包装器材灭菌菌种扩增倒平板接种倒置培养观察、记录、分析保存菌种高压蒸汽平板划线法稀释涂布平板法平板划线法随着划线的进行，接种环上的微生物细胞的数量将逐渐减少，并分散开。经培养后，可在平板表面得到单菌落。接种：划线 灼烧接种环 取菌液 划线分离 烧至暗红接种：划线划线分离平板划线的操作方法交叉划线法连续划线法 划线方法稀释涂布平板法 A.系列稀释操作 P19101 102 103 104 105 106(1)将分别盛有 9mL水的试管灭菌 并编号。(2)用移液管吸取 1mL培养的菌液，注入第二支试管中