各类成分分析生物碱

第五章 各类成分分析中药分析教研室 王术玲 Tel: 35622505生物碱 *皂苷 *黄酮 *蒽醌挥发油第五章第五章 各类成分分析各类成分分析一、概述二、理化性质*三、供试品溶液制备（提取、净化）*四、鉴别：理化鉴别、 TLC*五、含量测定：总成分、单体成分第五章第五章 各类成分分析各类成分分析春花秋月何时了，往事知多少！小楼昨夜又东风， 故国不堪回首月明中。雕栏玉砌应犹在， 只是朱颜改。问君能有几多愁？ 恰似一江春水向东流！ 虞 美 人 李煜马钱子腰直不起，头足相就，状如牵机而死 强直性惊厥1988年奥运会 ， 卡尔 刘易斯 ， 麻黄碱 1992年奥运会， 巫丹， 士的宁1992年奥运会 ， 玛丽 乔 费尔南德斯 ， 伪麻黄碱 1994年世界杯， 马拉多纳， 麻黄碱 2000年奥运会 ， 拉杜坎， 麻黄碱 生物碱与兴奋剂生物碱与毒品伪麻黄碱麻黄碱 冰毒一、概 述黄连： 小檗碱、巴马汀、药根碱、表小檗碱苦参 ： 苦参碱、氧化苦化碱益母草、 延胡索、黄柏、贝母麻黄： 麻黄碱、伪麻黄碱马钱子： 马钱子碱、士的宁第一节第一节 生物碱生物碱麻黄碱 小檗碱1、结构： C、 H、 O、 N， 碱 性二、理化性质2、溶解性亲脂性：大多数，氯仿中溶解度最大亲水性：少，季铵型二、理化性质一般都易溶于酸水3、沉淀反应：1）碘化铋钾 （ BiI3KI）2）雷氏盐 NH4Cr(NH3)2(SCN)4 3）苦味酸干扰： 蛋白质、多肽、鞣质沉淀特点： 酸性水溶液 （苦味酸在中性）中沉淀常易溶于 有机溶剂沉淀 有颜色二、理化性质4、光谱特征小檗碱： 225 、 270 、 331nm366nm下 有荧光麻黄碱： 210nm二、理化性质1、有机溶剂提取法：碱化 + CHCl3士的宁的含量测定： P127碱化 + CHCl3提取 酸水提 碱化 CHCl3萃取三、供试品溶液的制备2、氧化铝柱色谱法：益母草（药典 P203）水苏碱的薄层鉴别：取本品 3g 乙醇回流提取 上活性炭 -氧化铝柱 乙醇洗脱 收集三、供试品溶液的制备3、离子交换树脂法：益母草流浸膏（药典 P280）水苏碱的含量测定：取本品 5g 盐酸调 pH12 加置强酸型阳离子树脂柱 水洗脱（弃去） 氨水洗脱 收集三、供试品溶液的制备（一）理化鉴别 马钱子散：马钱子、地龙取马钱子散 加 浓氨 试液 三氯甲烷浸泡 滤过 滤液蒸干 加 稀盐酸 加碘化铋钾试液 黄棕色沉淀四、定性鉴别（二）薄层鉴别1、展开系统： 乙二胺、氨水 P122正丁醇 -盐酸 -水（ 4:1:0.5）生物碱盐四、定性鉴别2、对薄层板改性： 12%NaOH 溶液例：黄连中生物碱苯 -EtOAc-MeOH-异丙醇 -水（ 6:3:1.5:1.5:0.3）置氨水饱和的展开槽2）显色剂：例：苦参：氧化苦参碱（药典 P141）3、检视：1） 365nm下看荧光例：黄连：小檗碱 改良碘化铋钾 稀碘化铋钾 +亚硝酸钠乙醇液四、定性鉴别（一）总生物碱1、酸碱滴定法： 返滴法2、分光光度法直接测定法： 小檗碱比色法： 苦味酸、雷氏盐 P125排除干扰： 化学分离、柱色谱五、含量测定例：雷氏盐比色法B + NH4Cr(NH3)2(SCN)4 = BHCr(NH3)2(SCN)4 1、在酸性介质中定量反应2、反应物有颜色，其吸光度取决于硫氰酸铬铵部分3、反应物不溶于水，易溶于丙酮例：雷氏盐比色法 P71益母草口服液中生物碱的含量测定测定方法：1、沉淀过滤，溶于丙酮，直接测定 A2、滤除沉淀后，测定残存的过量雷氏盐，间接计算又如：产妇康颗粒1、 HPLC： 离子抑制色谱：二乙胺、三乙胺例：浙贝母 药典 P205 离子对色谱： SDS、辛烷基磺酸钠常加入缓冲盐例： HPLC测小檗碱（二）单体成分五、含量测定乙腈 -水（ 50： 50）每 100ml含 0.34g KH2PO4和 0.17g SDS牛黄千金散中盐酸小檗碱乙腈 -水 -二乙胺（ 70： 30： 0.03）浙贝母中贝母甲素和贝母乙素小儿清热止咳口服液中盐酸麻黄碱乙腈 -0.1% 磷酸溶液（含 0.1% 三乙胺）（ 3:97）流动相缓冲盐的 pH值对药物的保留行为有影响，甚至会显著改变某些碱性药物的保留行为如图所示。流动相 pH值对保留时间的影响色谱柱： NucleodurC18 15cm4mm流动相：乙腈 -10mM 碳酸氢铵 50： 50, A： pH=3.0 B： pH=10.0检测波长： 240nmpH=3.0 pH=10.0流动相 pH值对保留时间的影响色谱柱： NucleodurC18 15cm4mm流动相：梯度洗脱程序 A 乙腈 -20mM 磷酸氢二铵 , pH=2.5B 乙腈 -20mM磷酸氢二铵 , pH=10.0检测波长： 254nmpH=2.5 pH=10.0流动相组成对药物保留行为的影响组成：生物碱 1、 2、 3、 4 检测波长： 280nm色谱柱： Kromasil 15cm4.6mm流动相： A PiCB6流动相 -PICB7流动相 1： 1B PiCB6流动相 -PICB7流动相 4： 6PICB6流动相：己烷磺酸钠 1.88g 甲醇 260ml置 1000ml量瓶中，用水稀释至刻度PICB7流动相：庚烷磺酸钠 0.28g 甲醇 260ml置 1000ml量瓶中，用水稀释至刻度流动相组成对药物保留行为的影响色谱柱： Kromasil 15cm4.6mm检测波长： 280nmPICB6： 己烷磺酸钠 1.88g 甲醇 260ml置 1000ml量瓶中，用 1% 的醋酸稀释至刻度。PICB7： 庚烷磺酸钠 0.28g 甲醇 260ml置 1000ml量瓶中，用 1% 的醋酸稀释至刻度。C PiCB6流动相 -PICB7流动相 1： 1D PiCB6流动相 -PICB7流动相 9： 1 封尾技术：消除或屏蔽残留 Si-OH技术 1：小分子键合 技术 2： 较大空间位阻的较大空间位阻的异丙基或异丁基（异丙基或异丁基（ R基团基团）2、 TLCS：五、含量测