[医药卫生]病理学与病理生理学 3硕士生-病理与病生04

抗体技术研究及产业化抗体技术研究及产业化冯振卿 Ph.D南京医科大学病理学系卫生部抗体技术重点实验室2008年 10月 9日细胞表面抗原血型抗原组织相容性抗原白细胞分化抗原 CD2CD3CD25CD10CD20CD38CD45CD71CD41CD42CD8.肿瘤相关抗原胃癌 肺癌肝癌鼻咽癌大肠癌宫颈癌乳腺癌结肠癌卵巢癌胰腺癌喉癌脑胶质瘤骨肉瘤病毒HFRSV 新城疫甲肝轮状登革乙肝RSV乙脑流感 马雅罗Mayaro基孔贡亚ChikungunyaRoss River罗斯河 盖塔Getah柯萨奇 狂犬新培斯Sindbis细菌大肠杆菌 沙门氏菌痢疾杆菌军团杆菌结核杆菌 绿脓杆菌麻风杆菌霍乱弧菌寄生虫血吸虫 疟原虫 弓形虫旋毛虫丝虫毛滴虫绦虫利什曼原虫可溶性抗原酶血浆蛋白毒素细胞因子补体激素小分子化合物 抗体技术的研究和抗体的研发，是生抗体技术的研究和抗体的研发，是生物技术发展的永恒主题物技术发展的永恒主题 抗体广泛用于临床疾病的诊断和研究抗体广泛用于临床疾病的诊断和研究 目前在美国单克隆抗体类药物已占目前在美国单克隆抗体类药物已占FDA所批生物药的所批生物药的 3/4 第一章抗体类型和抗体技术发展 第一代 多克隆抗体 第二代 单克隆抗体 第三代 基因工程抗体 第四代 全人抗体 ？鼠源单抗临床应用的障碍 血清半衰期短， 20h 抗原抗体结合力、亲和力不够 募集效应细胞产生副作用 HAMA反应： 8 10天出现， 20 30天高峰， anti-id封闭与抗原结合位点，抗鼠抗体加速单抗清除 过敏性休克 影响单抗与靶细胞或抗原结合引起变态反应和器官损害HAMA反应示意图 第一代 多克隆抗体 第二代 单克隆抗体 第三代 基因工程抗体 第四代 全人抗体 ？小鼠抗体 嵌合抗体 重构抗体 人源抗体鼠 100% 33% 10% 0人 0 67% 90% 100% 第一代 多克隆抗体 第二代 单克隆抗体 第三代 基因工程抗体 第四代 全人抗体 ？小鼠抗体 嵌合抗体 重构抗体 人源抗体鼠 100% 33% 10% 0人 0 67% 90% 100% 人 鼠嵌合抗体 改型抗体（又称人源化抗体） 小分子抗体 双特异抗体 抗体融合蛋白基因工程抗体的类型1、嵌合抗体 将人 Ig C区 与鼠 Ig V区 相连接，从而在同一抗体分子中含有不同属来源的抗体。 构建嵌合抗体的基本原理，从杂交瘤细胞基因组中分离和鉴别出功能性可变区基因，与人 Ig恒定区基因相连接，插入适当的载体中，构建成人 鼠嵌合的重链和轻链基因，然后共转染骨髓瘤细胞，使之表达嵌合抗体。表 1 FDA批准上市的 单 克隆抗体 药 物产 品 研究者 适 应 症 目 标抗原批准年份抗体类 型Reopro Centocor心血管疾病 IIIIII1994 嵌合抗体Rituxan IDEC 非霍奇金氏淋巴癌CD20 1997 嵌合抗体RemicadeCentocor类风 湿关 节炎TNF- 1999 嵌合抗体SimulectNovartis肾脏 移植 CD25 1998 嵌合抗体2、改型抗体应用 CDR移植技术，即将鼠单抗 V区 中互补决定区 （CDR） 序列取代人源抗体相应CDR序列，重构成既具有鼠源性单抗特异性，又保持人抗体亲和力的 CDR移植抗体（CDR-grafted Ab），也称为改型抗体或人源化抗体。 表 1 FDA批准上市的 单 克隆抗体 药 物产 品 研究者 适 应 症 目 标抗原批准年份抗体类 型Synagis Medimmune 呼吸道感染 F protein 1998 人源化抗体Zenapax PDL 肾脏 移植 CD25 1997 人源化抗体Herceptin Genentech 乳腺癌 HER2/neu1998 人源化抗体Mylotarg Celltech 白血病 CD33 2000 人源化抗体Campath Millennium 淋巴瘤 CD52 2001 人源化抗体Xolair Genentech 中度至 严 重的因敏感引起的哮喘IgE 2003 人源化抗体Herceptin Genentech 乳腺癌 HER2 2006 人源化抗体3、小分子抗体 利用细菌表达决定抗体特异性的结构域，所获抗体片段大小仅为 IgG分子的 1/3-1/12，因此称之为小分子抗体。小分子抗体包括：Fab 1/3Fv 1/6ScFv 1/6 单域抗体 1/12MRU Fab片段 Fab片段由重链 VH加 CH1及完整的轻链构成，在细菌的启动子控制下，在大肠杆菌中表达而合成 Fab，大小为完整抗体的 1/3，其结构与木瓜蛋白酶消化完整抗体后所产生的 Fab片段一致。用 DNA重组技术制备的嵌合 Fab片段，其 V区为鼠源