临床基因扩增检验实验的设置、质量管理体系的建立

临床基因扩增检验实验室的设置、质量管理体系的建立及其技术验收山东省临床检验中心 邵 松80年代以来，以核酸为基础的分子诊断技术发展很快，特别随着 DNA序列分析、分子合成自动化技术的出现，基因检测技术已应用到生命科学工农业生产领域，极大的推动了人类社会的发展，基因扩增技术在医学领域已广泛应用于微生物学、遗传学、法医学等多个学科。临床基因扩增检验实验室的设置卫生部颁发的 临床基因扩增检验实验室管理暂行办法 （卫医发 200210号）。卫生部临床检验中心 临床基因扩增检验实验室工作规范 临床标本的接收 w 地点w 原始容器w 防止泄露和污染w 唯一性编号w 保存条件基因扩增检验实验室设置的一般要求及工作流程w 临床基因扩增检验实验室设立在二级以上医院。w 四个单独的工作区域：试剂贮存和准备区；标本制备区；扩增反应混合物配制和扩增区；扩增产物分析区，如使用全自动封闭分析仪器检测，此区域可不设。基因扩增检验实验室设置的一般要求及工作流程w 各工作区域必须有明确的标记，避免不同工作区域内的设备、物品混用。 w 进入各工作区域必须严格按照单一流向进行，即试剂贮存和准备区 标本制备区 扩增反应混合物配制和扩增区 扩增产物分析区。临床基因实验室的设置基本要求w 四个区域必须是相互独立的w 各区的仪器设备及各种物品必须是专用的w 各区间间不能直通，应有缓冲间，供换工作服及鞋帽用 w 产物分析区应安装排风扇或其它抽风装置试剂准备区仪器设备配置标准：2 8 和 -15 冰箱；混匀器；微量加样器（覆盖 1 1000l）；移动紫外灯（近工作台面）；消耗品：一次性手套、一次性吸水纸、耐高压处理的离心管和加样器吸头（带滤心）；专用工作服和工作鞋；专用办公用品等。 超净台。试剂准备 区 w 试剂分装应在 超净台 中进行w 扩增反应混合液应使用分子生物学级的，试剂制备好后应有质检： 一是否有污染（是否有假阳性存在）、二是使用弱阳性质控物检测试剂的扩增效果。标本制备区仪器设备配置标准：生物安全柜 ， 2 8 冰箱， -20 或-80 冰箱；高速台式冷冻离心机；混匀器；水浴箱或加热模块；微量加样器（覆盖 1 1000l）；可移动紫外灯（近工作台面）；超净工作台，消耗品；一次性手套、一次性吸水纸、耐高压处理的离心管和加样器吸头（带滤心）；专用工作服和工作鞋；专用办公用品等。标本制备 区标本的制备应在 生物安全柜 内进行，可防止气溶胶的扩散。标本制备全过程都应戴一次性手套，并经常更换，手套污染很容易导致标本间的交叉污染。处理具有传染危险性的标本时，最好戴双层手套，当手套与标本有接触时即可弃掉外层手套。标本制备区实验时所用的加样吸头必须带滤塞，并注意滤塞不能是后插入的而是结合在吸头内壁上疏水性膜滤塞，这样才能有效防止气溶胶对加样器的污染。标本制备区 温育既可在加热模块也可在水浴中进行。加热模块和水浴应在每次使用时，都要对所设置的温度使用 已经校准的温度计 进行校准。 标本制备区内设备都应使用 10%次氯酸钠溶液消毒，然后用水或 70%乙醇去除残留的次氯酸纳 .扩增区仪器设备配置标准：核酸扩增仪；微量加样器（覆盖 11000l）；可移动紫外灯（近工作台面）；消耗品：一次性手套、一次性吸水纸、耐高压处理的离心管和加样器吸头（带滤心）；专用工作服和工作鞋；专用办公用品等。 超净台。 配备 UPS电源。扩增区加样时，先加提取的核酸模板样本，然后加阳性质控核酸模板，再就是标本制备阴性质控和仅含按样本一样稀释的主反应混合液的扩增阴性质控。这样做的目的是最大可能地测出以前扩增产物的交叉污染。 产物分析区视检测方法不同而定。基本仪器设备如下：微量加样器（覆盖 1 200l）；可移动紫外灯（近工作台面）；消耗品：一次性手套、一次性吸水纸、耐高压处理的离心管和加样器吸头（带滤心）；专用工作服和工作鞋；专用办公用品等。产物分析区 w 本区是唯一能打开扩增后反应管的地方。由于本工作区应设置为负压状态， 空气流向为由外向内 ，以防止扩增产物气溶胶流出，故本区可无缓冲间。w 本区所使用的仪器设备有酶标仪、洗板机、加样器和水浴箱等，酶标仪应定期校准，洗板机每次使用完都应进行清洗，其它如加样器和水浴箱可按有关方法进行校准。质量管理体系的建立w 质量手册w 程序文件w 标准操作程序（ SOP）质量手册定义：阐明一个实验室的质量方针，质量体系与质量工作的文件。主要内容包括目录、批准页、前言、质量方针、组织结构、人员职责、实验室设施环境、仪器设备、溯源性、检验方法、标本管理、记录、报告等，是对上述各方面质量管理的一般性描述。程序文件程序文件则是对通用于整个实验室的某些方面工作的文件化描述。主要包括实验室文件和档案等的管理、内审、管理评审、人员培训、投诉处理、保密、计算机管理、新项目开展、量值溯源、仪器设备及实验用品购买、标本管理、废物处理等方面标准操作程序SOP最为具体，最具有可操作性，也是使用频率最高的文件，与实验室的日常工作密切相关。如某个具体的项目临床标本的收集、处理、保存、检测等，具体仪器的操作使用、校准及维护等。SOP文件与程序文件之间的区别在于后者的原则性要强一些，针对的是一个系列或一个方面的工作。质量管理的内涵w 写 你应做的。w 做你所写的。w 记录 你已 做的。怎样编写 SOP？临床基因扩增检验实验室技术验收意义w 开创临床检验技术准入的先河w 推动临床实验室标准化建设w 规范检验市场w 建立医疗事故预防机制临床基因扩增检验实验室技术验收依据 ：w 临床检验扩增检验实验室管理暂行办法 卫医发 200210号w 临床基因扩增检验实验室工作规范 卫检字 2002第 8号 临床基因扩增检验实验室管理暂行办法卫医发 200210号第二章 实验室设置和验收第七条 卫生部临检中心和省临检中心共同组织相关专业的专家组（以下简称专家组），按照 临床基因扩增检验实验室基本设置标准 对提出申请的临床基因扩增检验实验室进行技术验收。验收完成后，在20日内将验收报告寄送至申请机构。第八条 经专家组技术验收合格的医疗机构将本办法第六条规定的材料及专家组验收报告送至省级行政部备案。在将符合规定的全部材料送达省级卫生行政部门后 15日内未收到省级卫生行政部门不同意的意见，方可开展专家组技术验收合格的临床基因扩增检验项目。第九条 未经专家组验收合格并报省级卫生行政部门备案的医疗机构不得擅自开展临床基因扩增检验项目。 临床基因扩增检验实验室管理暂行办法卫医发 200210号第二章 实验室设置和验收第六条 拟设置临床基因扩增检验实验室的医疗机构按照 临床基因扩增检验实验室基本设置标准 （见附件）筹建实验室；筹建完成后，由法定代表人向卫生部临检中心提出技术验收申请。申请时需提交以下材料：（ 一） 医疗机构执业许可证 复印