EB病毒检测技术进展及临床应用ppt课件

EB病毒检测技术及临床应用1概述Epstein-Barr病毒（ EBV） 疱疹病毒科， 亚科，嗜淋巴细胞病毒属， 1964年由 Epstein、 Barr等人首次在非洲儿童的恶性淋巴瘤组织培养中发现。 EBV是是传染性单核细胞增多症的病原体，也是一种重要的肿瘤相关病毒，与鼻咽癌、淋巴瘤、胃癌、移植后淋巴增殖症等多种肿瘤的发生密切相关，被列为致癌性病毒之一。2概述 传播途径： EBV感染 主要 通过唾液接触传播 ，也可通过血液传播； 人感染 EBV后建立终身潜伏感染，人群感染率超过 90%。 1-6岁儿童、 14-20岁青少年及年轻成年人高度易感，发展中国家 EBV感染多发生在儿童早期 。3病原学p 疱疹病毒科， 疱疹病毒亚科，淋巴隐病毒属，人疱疹病毒 4型p 球形 双链 DNA病毒 ，基因组 平均大小约为 172 kb456EBV致病机制 原发 EBV感染时， EBV先是在 口咽部上皮细胞内增殖，然后感染附近的 B淋巴细胞 ，受到感染的 B淋巴细胞进入血液循环可以造成全身性感染。EBV原发感染后，大多数无临床症状，尤其是 6岁以下幼儿大多表现为隐性或轻型发病，但在儿童期、青春期和青年期 ，约 50% 的原发性感染均表现为 IM。7EBV在人体 B细胞建立潜伏感染， EBV只表达潜伏抗原（包括 EBNA-1、 EBNA-2、 EBNA-3A、 EBNA-3B、 EBNA-3C、 EBNA-LP、 LMP-1、 LMP-2及 EBER），受感染者将成为终身带毒者。 在机体免疫功能下降和某些因素触发下，潜伏的 EBV可以被再激活，引起病毒复制及临床疾病。EBV致病机制8EBV常见相关疾病 传染性单核细胞增多症（ Infectious mononucleosis,IM) 慢性活动性 EB病毒感染（ Chronic active EBVinfection， CAEBV） EB病毒相关性嗜血细胞综合征（ EBV-associated hemophagocytic syndrome, EBVAHS) Burkitts淋巴瘤 何奇金淋巴瘤9EBV感染的抗原表达pEBV溶解性感染期溶解性感染期 ， 可可 表达：表达：n 早期抗原（早期抗原（ EA）：）： EA/R和和 EA/D（具（具 DNA多聚酶活性）；多聚酶活性）； EA出现表明出现表明 EBV活跃增殖，活跃增殖， EA抗体出现在感染早期抗体出现在感染早期 ；n 衣壳蛋白（衣壳蛋白（ VCA） 晚期表达的结构蛋白晚期表达的结构蛋白 VCA-IgM出现在急性感染早期，出现在急性感染早期， VCA-IgG出现在急性感染期并持出现在急性感染期并持续存在续存在n 膜抗原（膜抗原（ MA）：）： 细胞表面包膜糖蛋白（细胞表面包膜糖蛋白（ MA gp350/220,gp85)， 是 EBV的中和性抗原 抗抗 MA-IgM可用于早期诊断可用于早期诊断10p EBV潜伏感染期，潜伏感染期， 选择性表达早期抗原以及选择性表达早期抗原以及 ：n 核抗原（核抗原（ EBNA-1,-2,-LP,-3A,-3B,-3C）：）： 为为 DNA结合蛋白，在感染的结合蛋白，在感染的 B细胞核内；细胞核内； EBNA-1与感染有关，与感染有关， EBNA-2与细胞转化和永生化有关；与细胞转化和永生化有关； EBNA抗体出现在感染晚期。抗体出现在感染晚期。n 潜伏膜蛋白潜伏膜蛋白 （ LMP-1,-2A,-2B）：）： 在感染在感染 B细胞表面，与细胞恶化有关，细胞表面，与细胞恶化有关，n 未翻译的转录物未翻译的转录物 BARF0和和 EBERn EBNA-3、 EBNA-2、 LMP-1是是 EBV-CTL CD8+的主要目标的主要目标EBV感染的抗原表达11原发性 EBV感染过程中首先产生针对衣壳抗原（ capsid antigen, VCA）IgG和 IgM，在急性感染的晚期，抗早期抗原（ early antigen, EA）抗体出现在恢复期晚期，抗核抗原（nuclear antigen, NA）抗体产生，抗 VCA-IgG和抗 NA-IgG可持续终身12EBV感染的血清学诊断13传统检测策略的问题5% 新近 EBV感染不出现 CA-IgM抗体在罕见的病例中抗 CA-IgM会持续存在约 20-30%的新近感染不出现 EA-IgG抗体抗 EBNA-IgG抗体可能呈现阴性，由于：- 慢性活动性 EBV感染- 细胞免疫被抑制14EBV感染的血清学诊断p 抗 VCA-IgM和 IgG可以同时出现，通常 IgG出现较 IgM晚，但偶尔较 IgM出现早 12周，抗 VCA-IgM几周后检测不到p 抗 EA-IgG在发病后 3-4周后升高，34月后检测不到p 抗 EBNA-1-IgG在发病后 34周被检测到，持续终身，部分慢性 EBV感染者检测不到p 抗 VCA-IgG和抗 EBNA-1-IgG终生持续阳性15EBV常见相关疾病16传染性单核细胞增多症 (IM)infectious mononucleosis 特指由 EBV感染引起的发热、咽炎和淋巴结肿大的综合征 1889年被首次描述为 “glandular fever” 1920年正式定义为 IM 1932年发现嗜异性凝集实验 1968年实验室工作人员感染 EBV，出现 IM临床症状和嗜异性凝集抗体，明确 EBV是 IM的病原17IM临床表现p 25-30%的青少年和 102.5copies/g n 原位杂交 ：检测出 EBER-1阳性细胞n Southern杂交 ：受累组织或外周血中检测出EBV DNAn 免疫荧光 ：检测到抗原（ EBNA、 LMP）n 感染的 B、 T、 NK细胞、单核 /巨噬 /组织细胞检测到 EBNA、 EBER、 EBV-DNA25EBV相关的噬血细胞性淋巴组织细胞增生症EBV-associated hemophagocytic lymphohistocytosis EBV-HLH p 是一种与 EBV感染有关的淋巴增殖伴随吞噬血细胞现象的一类疾病p EBV感染所致 CD8+T细胞的异常增殖及其激活巨噬细胞，导致炎症细胞因子大量释放产生高细胞因子血症（细胞因子风暴）是 EBV-HLH的主要病例生理特征p 临床表现发热、肝脾肿大、黄疸、全血细胞减少、 DIC，骨髓和其他组织见嗜血细胞、 LDH、铁蛋白、 微球蛋白p EBV-HLH常见于儿童和青少年26抗 EBV病毒药物p 无环核苷拟似剂n acyclovir（阿昔洛韦）， ED50 0.3n ganciclovir（更昔洛韦）， ED50 0.05n valaciclovir（缬昔洛韦 ）p 无环核苷酸n cidofovir， adefovirp 焦磷酸盐 拟似剂 n foscarnet（磷甲酸钠）p 作用机制n 作用病毒 DNA多聚酶，抑制病毒复制27EBV感染的实验室诊断p外周血分类n 淋巴细胞 50% WBCn 不典型淋巴细胞 10% WBC（系激活的 CD8+ CTL）p血清学检查n 嗜异性凝集实验（ heterophile test/spot test）n VCA-IgM、 IgG， EA-IgG， EBNA-IgGp病毒学标志n 在 PBMC、血清、全血或感染组织检测 EBV-DNA、 EBER、 EBNA、 LMP28EBV感染