HLA-B27检测及其临床应用ppt课件 - 副本

HLA-B27与强直性脊柱炎1强制性脊柱炎 ASl 强制性脊柱炎 （ AS）是一种主要累及脊柱，中轴骨和四肢大关节，以椎间盘纤维环及其附近结缔组织纤维化和骨化及关节强直为病变特点的 慢性炎症 。其特征是病变从 骶髂关节 开始，逐步上升蔓延至脊柱关节，造成骨性强直。23病理变化l 本病早期病理变化为肌腱，韧带 骨附着点炎 ，也可发生一定程度的滑膜炎症，常以 骶髂关节发病最早 ，以后可发生关节粘连，纤维性和骨性强直，组织学改变为关节囊，肌腱，韧带的慢性炎症，伴有淋巴细胞，浆细胞浸润，这些炎性细胞成团分布于较小的滑膜血管周围。4l 骶髂关节炎 是强直性脊柱炎的病理标志，也常是其最早的病理表现之一，骶髂关节炎的早期病理变化包括软骨下肉芽组织形成，组织学上可见滑膜增生和淋巴样细胞及浆细胞聚集 ，淋巴样滤泡形成以及含有 IgG， IgA和 IgM的浆细胞， 骨骼的侵蚀和软骨的破坏 随之发生，然后逐渐被退变的纤维软骨替代，最终发生 骨性强直 ，脊柱的最初损害是椎间盘纤维环和椎骨边缘连接处的肉芽组织形成，纤维环外层可能最终被骨替代，形成韧带骨赘，进一步发展将形成 X线所见的竹节样脊柱。5AS的检查l 体格检查l 影像学检查早期表现为骶髂关节炎，可根据疾病不同时期选择 X线，CT,MRI检查 。l 实验室检查活动期可有 ESR,CRP,PLT和血清 IGA升高，类风湿因子阴性90%患者 HLA-B27阳性6HLA-B27检测及其临床应用 什么是 HLA及 HLA-B27MHC、 HLA， HLA-B27 HLA-B27与哪些疾病相关血清阴性脊柱关节病 类型及特点强直性脊柱炎 特点及其与 B27关联机制 HLA-B27 怎么检测MLCT、 FCM、 PCR-SSP7HLA相关概念 主要组织相容性抗原 主要组织相容性复合体（ MHC 类 )： H-2 SLA HLAMHC、 HLA复合体 基因MHC分子、 HLA分子 抗原 HLA：人类白细胞抗原（ Human Leukocyte Antigen）8l HLA抗原 是 人类主要组织相容性复合体 （ Major Histocompatibity Complex， MHC）的 表达产物 ，在免疫系统中主要负责细胞之间的相互识别和诱导免疫反应，调节免疫应答的功能。根据 HLA抗原结构，功能与组织分布的不同，可分为三类： 类分子为 HLA-A、 -B、 -C系列抗原，广泛分布于各组织有核细胞表面，包括血小板和网织红细胞，成熟的红细胞一般不含 HLA抗原； 类分子为 HLA-D/DR、 -DP、 -DQ系列抗原，主要在 B细胞和抗原提呈细胞上表达，这两类抗原都与 移植 有关，其中 类抗原更为重要； 类分子为补体成分。9l HLA-B27基因属于 型 MHC基因，基本上表达在机体中所有含核的细胞上，尤其是淋巴细胞的表面有丰富的含量l 早在二十多年前，人们就已发现 HLA-B27抗原的表达与强直性脊椎炎有着高度相关性，超过 90%的强直性脊椎炎患者其 HLA-B27抗原表达为阳性，普通人群中仅 5-10%的为阳性，而强直性脊椎炎由于其症状与许多疾病相似而难以确诊，因此 HLA-B27的检测在病情的诊断中有着重要意义。 10HLA-B27相关疾病 11疾病 HLA-B27阳性率 (%)强直性脊椎炎 90银屑病性关节炎 55Reiters综合症 37反应性关节炎沙门氏菌感染 29.7志贺氏菌感染 20.7耶尔森氏菌感染 17.6淋病双球菌感染 14.0正常人群 2 7HLA-B27相关疾病：强直性脊柱炎患病率： 0.3%， 20-30岁，男女比例 10:1，有家族倾向；主要侵犯：中轴关节（骶髂关节、脊柱骨突、脊柱旁软组织）可伴发外周关节及关节外表现，严重者发生脊柱畸形和关节强直B27检测可作为有相关症状或高危人群 AS早期的筛选方法！AS不是 RA的一种特殊类型！12强直性脊柱炎 类风湿性关节炎地区分布 种族差异大 世界性性别分布 男女 女男年龄 20-30 30-50家族史 明显 不明显类风湿因子 （） （ ）HLA-B27阴性的 AS约 5-10%的 AS患者为 HLA-B27阴性AS患者的 HLA-B27阳性率达 90-95%我国汉族人群 HLA-B27阳性率 2-7%（ 3千万 -1亿）， AS患病率为 0.3%（ 4百万），大部分 HLA-B27阳性者并不发生 AS。HLA-B27与 AS13HLA-B27与 AS14 健康人群 HLA-B27阳性率及 AS患病率各地区、种族有显著的差异 HLAB27 与强直性脊柱炎的发病有很强的相关性 两种错误认识需纠正： HLA-B27阳性 AS！HLA-B27阳性不会转阴！HLA-B27与 AS的关联机制 连锁不平衡学说 分子模拟学说 关节源性肽假说 其他：T细胞受体库假说超抗原假说B27修饰因子假说Cys67模型15张谷香医学综述， 2012,18(4):498-501HLA基因座位的等位基因和真正的疾病易感基因处于紧密连锁不平衡，而 HLA基因本身并不是引起疾病的真正基因，仅仅是遗传标志。B27抗原与某些 G（ -）菌之间存在类似的分子结构，能发生分子模拟或交叉反应，机体免疫系统把 B27当作病原体抗原产生免疫应答，对机体产生免疫损害。认为关节源性肽只存在于关节组织中，特异性地由 HLAB27 提呈，正常情况下递呈水平低，反应 T细胞处于耐受状态；当某些具有同源结构蛋白的病毒或细菌感染时，则可致敏耐受的 T细胞，从而识别以低水平递呈的关节源性肽，引起自身免疫反应而损伤组织。l AS发病原因机制目前尚未完全阐明，大多数学者认为其与遗传，感染，免疫，环境因素等有关。 16HLA-B27检测方法 抗原水平微量细胞毒法 流式细胞术法 基因水平PCR-SSP 17微量细胞毒法（ MLCT） 原理：如果受试者淋巴细胞表面表达有相应的 HLA-B27抗原，就可以与B27抗体结合，形成 Ag-Ab复合物激活补体，发生对细胞膜的破坏及细胞杀伤作用，通过染色法观察，死细胞的细胞膜通透性改变，染料能够进入使之着色，而活细胞细胞膜完整不被染色。根据 死细胞占全部细胞的百分比 ，可以判断受试者淋巴细胞表面是否存在 HLA-B27抗原及其与抗体的反应强度。 优点：不需特殊仪器设备，易于操作，一般的实验室都可开展。 缺点：标本存放不能超过 8小时；感染可以使细胞膜表面的 B27分子的数量或结构改变，影响 MLCT的结果，易出现假阴性。18J.Kirveskari, et al. British Journal of Rheumatology, 1997,36:185-189流式细胞术法 利用荧光标记的 HLA-B27单克隆抗体，与细胞表面的 B27抗原结合，使结合后的淋巴细胞具有一定的荧光强度，这种荧光强度可由流式细胞仪测得的通道值来反映，以其值的高低判断 HLA-B27抗原表达百分比，从而判断 HLA-B27是否阳性。 优点：全自动仪器检测，减少了人为因素的影响，重复性高，结果判断准确，为目前较为理想的方法，目前已将 FCM法检测 HLA-B27作为 AS 诊断的常规检测方法。 缺点：仪器昂贵，目前只在较大医院应用，且荧光易淬灭。19Levering WH， et al. J Cytometry B Clin Cytom， 2003,54(1):28-38PCR-SSP 通过设计基因序列特异的引物 SSP，特异性的扩增出标本中的 HLA-B27基因片段，以琼脂糖凝胶电泳分析 PCR扩增产物，若出现目的条带则表示 HLA-B27为阳性。 优点：基因水平的检测直接对 HLA-B27原基因进行扩增分型，灵敏度高，特异性强。 缺点：耗时长，需要跑电泳，需要特定的实验仪器及严格的实验条件，在临床上普遍开展此项检查有一定的难处。20Olerup O Tissue Antigens， 1994,43(4):253