病毒性疾病标本采集、保存与检测

Institute for Viral Disease Control and Prevention (IVDC), China CDC病毒性疾病标本采集、保存与检测中国疾控中心病毒病所王世文Institute for Viral Disease Control and Prevention (IVDC), China CDC 2 采样前准备l 包括各种采样现场需要的器械、耗材，无菌标本容器，采样后处理试剂，低温保存设备和个人防护装备，以及各种采样表格等Institute for Viral Disease Control and Prevention (IVDC), China CDC 3 明确采样要求l 针对不同事件的处置，采样目的、对象、标本种类各不相同，采样人员需要根据事件 或疫情的特点，制定出详细的、有针对性的采样工作程序。内容主要包括：采样目的、对象、时间、部位、标本量、无菌要求 （ 一般不需要 ） 、标本保存与运输条件等，并需根据现场实际情况进行必要的调整Institute for Viral Disease Control and Prevention (IVDC), China CDC 4现场采样 标本采集应严格按照相关生物安全规定进行l 保护医务和疾控人员Institute for Viral Disease Control and Prevention (IVDC), China CDC 5现场采样 血标本 -血清l 需采集多份血清标本l 至少u 急性期（发病 7d内或发现时）u 恢复期（ 与急性期间隔 2-3周 ）l 分别采集外周静脉血各 5ml 6ml，分离后的血清分装于 3个 塑料螺口血清管 中u 一份 0.5ml左右，用于即将开始的检测u 一份检测备份u 一份留存监测病种Institute for Viral Disease Control and Prevention (IVDC), China CDC 6现场采样 呼吸道标本l 上呼吸道标本：包括咽拭子、鼻拭子、鼻咽抽取物、咽漱液、痰液l 下呼吸道标本：包括呼吸道抽取物、支气管灌洗液、胸水、肺组织活检标本 消化道标本l 患者的粪便和肛拭子 要求： 发病早期即开始采集，根据病程决定采集的频次，采好的标本分装于 3个螺口塑料试管中Institute for Viral Disease Control and Prevention (IVDC), China CDC现场采样培训Institute for Viral Disease Control and Prevention (IVDC), China CDC 8现场采样 其它人体标本l 包括脑脊液、疱疹液、淋巴结穿刺液等l 采集好的标本分装于 3个螺口塑料试管中Institute for Viral Disease Control and Prevention (IVDC), China CDC 9 尸体解剖l 不明原因疾病的死亡病例l 尽可能采集死亡病例的所有组织器官l 应根据疾病的临床表现，采集与疾病有关的重点组织器官标本（如肺、肝穿刺）l 做病原学研究的组织标本采集得越早越好，疑似病毒性疾病的标本采集时间最好不超过死后 6hl 病理检查的标本不超过 24hl 同种组织每一部位至少采集 3份标本， 1份用于病原学研究（无菌采集）， 1份用于病理学研究（固定于福尔马林中）， 1份用于电镜检查（固定于电镜标本保存液中）l 重要的组织器官应多部位同时采集标本现场采样Institute for Viral Disease Control and Prevention (IVDC), China CDC 10 媒介和动物标本l 疑似 虫媒传染病或动物源性传染病现场采样Institute for Viral Disease Control and Prevention (IVDC), China CDC 11现场采样 做好样品标记l 样品标记非常关键，是所有标本辨识的唯一标志，绝对不能出现任何错误l 标本采集过程中，应保证采样记录表登记、采样日志记录与样品标记同时进行，并确保编号一一对应l 样品编号需要在标本容器表面与容器盖顶上同时进行标记，避免容器与盖子错配，造成标本的交叉污染Institute for Viral Disease Control and Prevention (IVDC), China CDC 12发热伴血小板减少综合征监测 采集标本l 血清l 血凝块l 血浆l 白细胞Institute for Viral Disease Control and Prevention (IVDC), China CDC 13背景 2004年以来，浙江、安徽、江苏、山东、河南、湖北等省相继报告一些以发热伴血小板减少为主要表现的感染性疾病病例，其中少数重症患者可因多脏器衰竭损害，救治无效死亡l 2004年，浙江、安徽等省局部地区发现发热、血小板减少散发病例，实际发病数不详，病因不明l 2005年 5月，江苏报告发热、血小板减少散发病例，实际发病数不详，病因不明l 2005年 9月，湖北省咸宁市报告 6例聚集性不明原因发热病例，首发病例死亡， 5为续发病例为首发病例的亲属，发病前均有在护理首发病例过程中接触首发病例呕出血液史。该起疫情也未能明确病原Institute for Viral Disease Control and Prevention (IVDC), China CDC 14背景l 2006年 11月，安徽省广德县报告 10例聚集性发热伴血小板减少的病例，首发病例死亡，诊断为 “疑似流行性出血热 ”在其诊疗和护理的医务人员和家属接触者中出现 9例病例，其中医务人员 4例，家属 5例。续发病例具有首发患者呕出血液和其他分泌物暴露史Institute for Viral Disease Control and Prevention (IVDC), China CDC 15l 经检测确诊为嗜吞噬细胞无形体病。这是我国首次确认 人粒细胞无形体病l 此后山东、安徽、河南等省也相继有疑似无形体病报告Zhang Lijuan, et al. JAMA 2008, 300(19): 2263-2270Institute for Viral Disease Control and Prevention (IVDC), China CDC 16背景l 2007年 3-9月，河南省信阳市及其周边地区共报告 79例疑似无形体病病例，死亡 10例。针对该起疫情的病原学检测未能做出明确结论l 2009年 3-10月，湖北随州、黄冈等 6个市共报告疑似无形体病病例 93例， 6例死亡（其中随州 58例、黄冈 18例）。经实验室检测，嗜吞噬细胞无形体均为阴性， 1例病例查菲埃里克体阳性Institute for Viral Disease Control and Prevention (IVDC), China CDC 17背景 疾病特点l 多为急性起病，多数患者伴有乏力、纳差、恶心、呕吐、腹痛、腹泻等症状，部分患者出现黑便、牙龈出血、皮肤瘀点或瘀斑、眼结膜充血等出血症状。绝大多数患者白血病不高或降低、血小板减少，部分患者谷丙 /谷草转氨酶升高、尿蛋白阳性。l 病例均发生在丘陵地区，发病时间集中在 5-10月。男性多于女性，且多为农民。 20岁以下及80岁以上人群未见发病。 Institute for Viral Disease Control and Prevention (IVDC), China CDC 18背景 病毒 细菌 立克次体 埃里克体 无形体Institute for Viral Disease Control and Prevention (IVDC), China CDC 19发热伴血小板减少综合征监测 采集标本l 血清l 血凝块l 血浆l 白细胞Institute for Viral Disease Control and Prevention (IVDC), China CDC 20标本保存 血清可在 4 存放 3d、 -20 以下长期保存。用于病毒等病原分离和核酸检测的标本应尽快进行检测 24h内能检测的标本可置于 4 保存， 24h内无法检测的标本则应置于 -70 或以下保存Institute for Viral Disease Control and Prevention (IVDC), China CDC 21标本运送 要严格做到生物安全 依据病因分析的病原体分类，如果为高致病性病原微生物，应严格按照病原微生物实验室生物安全管理条例（国务院 424号令）和可感染人类的高致病性病原微生物菌（毒）种或样本运输管理规定（中华人民共和国卫生部第 45号令） 、 人间传染的病原微生物名录 等有关规定执行Institute for Viral Disease Control and Prevention (IVDC), China CDC 22标本检测 与解释 标本的预处理l 血清灭活 病毒性疾病的实验室检测方法可分为三类，即直接检测、间接检测和血清学检测Institute for Viral Disease Control and Prevention (IVDC), China CDC 23标本检测 与解释 直接检测l 直接检测临床标本中病毒颗粒、病毒抗原或病毒核酸l 方法u电镜 /免疫电镜检测、组织中包涵体检查、 IFA/ELISA检测抗原、病毒核酸 /基因组检测等l 特点u一般在标本采集、送达的当天或次日就可得到结果，这对于需要根据实验室检测结果进行临床处置和尽早采取防控措施极为重要，但对标本的要求也较高，病变部位标本的阳性结果比其它部位的阳性结果诊断意义大得多Institute for Viral Disease Control and Prevention (IVDC), China CDC 24标本检测 与解释Institute for Viral Disease Control and Prevention (IVDC), China CDC 25标本检测 与解释 抗原检测 常用方法l 免疫荧光试验（ IF）、双抗体夹心 ELISA法等l IFu优点 ： 快速、易于操作u缺点 ： 敏感性和特异性较低uIF试验对标本质量的要求较高u由于在结果判定时有一定主观性，需要检测人员具有较丰富的经验l 双抗体夹心 ELISA法u比 IF复杂，但敏感性和特异性较高Institute for Viral Disease Control and Prevention (IVDC), China CDC 26标本检测 与解释 核酸检测已经成为病毒性疾病实验室诊断中最常用的方法，发挥着越来越重要的作用， 核酸检测的方法多种多样， 主要 包括两类l 不进行病毒核酸扩增的探针杂交法l 核酸扩增的方法 ： PCR/RT-PCR/Real-time PCR）、基于核酸序列的扩增（如 NASBA）Institute for Viral Disease Control and Prevention (IVDC), China CDC 27标本检测 与解释 特点l 敏感性极高、简便、快速， Real-time PCR还可以定量检测l 高通量、多病原快速检测Institute for Viral Disease Control and Prevention (IVDC), China CDC 28标本检测 与解释 间接检测 病毒分离l 细胞培养u原代细胞培养u传代细胞培养l 鸡胚接种u尿囊腔u卵黄囊u.l 动物接种Institute for Viral Disease Control and Prevention (IVDC), China CDC 29标本检测 与解释 血清学检测l 在病毒学实验室中使用最为普遍，如急性期血清中特异性IgM、 IgA、 IgG检测等l 血清学检测的方法多种多样，多数病毒性感染通常都可以采用血清学检测的方法加