细菌菌落计数1

细菌菌落计数细菌菌落计数直接法血球记数板活菌染色：美蓝、吖啶橙、 TTC间接法细菌计数板和血球计数板都用来侧微生物的总菌数。血球计数板用来测较大微生物如酵母菌和霉菌孢子的总数，细菌计数板用来测细菌的总菌数。两种计数板的构造相似，不同的是细菌计数板的深度仅为血球计数板深度的 1/5。直接法 血球记数板间 接 法n平板菌落计数法 (Colony-counting Methods)一个活菌在合适的培养基表面，逐渐生长成一个 肉眼可见的菌落（菌落形成单位， colony forming unit, CFU），从而得知原始活菌含量。涂布平板法 Spread Plate浇注平板法 Pour Plate间 接 法 平板菌落计数法涂布平板法浇注平板法方法：方法：1.以无菌操作方法用灭菌吸管吸取以无菌操作方法用灭菌吸管吸取 0.9 ml生理盐水，分别生理盐水，分别 加入加入 6支灭菌支灭菌 EP管中。管中。2.以无菌操作方法吸取以无菌操作方法吸取 0.1ml充分混匀的待充分混匀的待检样本，注入盛有检样本，注入盛有 0.9ml灭菌生理盐水的灭菌生理盐水的试管中，混匀成试管中，混匀成 1:10稀释液。稀释液。3.吸取吸取 1:10的稀释液的稀释液 0.1ml注入盛有注入盛有 0.9ml灭菌生理盐水的试管中，混匀成灭菌生理盐水的试管中，混匀成 1:100稀稀释液。按同法依次稀释成释液。按同法依次稀释成 1:1000，1:10000稀释液等备用。（如此递增稀稀释液等备用。（如此递增稀释一次，必须更换一支释一次，必须更换一支 1ml灭菌吸管）灭菌吸管）4.用灭菌吸管取用灭菌吸管取 2 3个适宜稀释度的稀释菌个适宜稀释度的稀释菌液液 0.1ml，分别注入灭菌平皿内，每个稀，分别注入灭菌平皿内，每个稀释度重复做两个平板，涂布均匀后，置释度重复做两个平板，涂布均匀后，置37 ，培养，培养 24-48h。1 2 3 4 5 6样本10.1ml1 2 3 4 5 60.1ml 0.1ml 0.1ml 0.1ml 0.1ml 0.1ml0.1ml0.1ml 0.1ml适用领域：适用领域：1.广泛用于生物制品检验广泛用于生物制品检验 (如活菌制剂如活菌制剂 )，以及食品、饮料，以及食品、饮料和水和水 (包括水源水包括水源水 )等的含菌指数或污染程度的检测。等的含菌指数或污染程度的检测。2.疾病诊断疾病诊断*泌尿系感染性疾病的诊断泌尿系感染性疾病的诊断 -尿培养尿培养3.细菌感染及药物治疗效果细菌感染及药物治疗效果*临床病人临床病人*实验动物实验动物3、菌落计算方法（ 1）菌落计数方法做平板菌落计数时，可用肉眼观查，必要时用放大镜检查，以防遗漏。在记下各平板的菌落数后，求出同稀释度的各平板平均菌落总数。（ 2）菌落计数的报告 平板菌落数的选择选取菌落数在 30 300之间的平板作为菌落总数测定标准。一个稀释度使用两个平板，应采用两个平板平均数，其中一个平板有较大片状菌落生长时，则不宜采用，而应以无片状菌落生长的平板作为该稀释度的菌落数，若片状菌落不到平板的一半，而其余的一半中菌落分布又很均匀，即可计算半个平板后乘 2以代表全皿菌落数。 结果：结果：总活细菌数（总活细菌数（ CFUs/ml） =某一稀释度的平均菌落数某一稀释度的平均菌落数 10稀释度稀释度*注意事项见实验讲义注意事项见实验讲义