脓汁和粪便标本中病原菌的检测-3

器材准备斜面 4支，空气、手指皮肤、细菌分离培养物（上次实验平板）医学微生物学实验综合性实验三v空气细菌学检查结果分析v手指皮肤细菌学检查结果分析空气的 细 菌学 检查组 号 时间 (min) 地点 菌落形成 单 位 (CFU)1 152 153 154 155 156 157 158 159 1510 15CFU /m3 50,000NAT 86N( 直径 7cm平板）N：平板上的菌落数 A：平板面 积 (38.5cm2)T：采 样时间 (15分 钟 ) CFU： colony forming unit WHO推荐的医院各部 门 空气 细 菌 标 准级别 cfu/m3 适用范 围 级 区 10器官移植、心血管、 矫 形等外科手 术室，保 护 性隔离室，灌注或配制注射液 实验 室 级 区 200无菌室、手 术 室、供 应 室、 婴 儿室、中心 灭 菌 单 位、 术 后恢复室、早 产 儿及 产 房、重症 监护 病房 级 区 200500 一般病房、治 疗 室、放射室、衣帽室、按摩室、盥洗室、手 术 室浴室我国公共 场 所空气 卫 生 细 菌学 标 准（ GB9663 9673-1996， GB16153-1996,平皿直径 9cm）撞 击法cfu/m3沉降法个 /皿 适用范 围 1000 10 3 5星 级宾馆 、 饭 店 1500 20 2星 级 以下 宾馆 和非星 级带 空 调宾馆 、 饭 店 2500 30 普通 饭 店、招待所、酒吧、茶座、咖啡 厅 、 图书馆 、博物 馆 、美 术馆 、 飞 机客 舱 4000 40音 乐厅 、影 剧 院、 录 像 厅 （室）、游 艺厅 、舞 厅、理 发 店、美容院（店）、游泳 馆 、体育 馆 、医院候 诊 室、候机室、旅客列 车车厢 、 轮 船客 舱 、饭馆 （餐 厅 ） 7000 75 展 览馆 、商 场 （店）、 书 店、候 车 室、候船室液体或固体标本菌落总数测定v可将标本作十倍、百倍、千倍、万倍稀释。v分别取 1ml注入直径 9cm的灭菌平皿内。v倾注 46 营养琼脂培养基大约 15ml，混合均匀。琼脂完全凝固以后， 37 培养 48小时。v选择菌落数在 30 300之间的平板作为菌落总数测定标准。v将计数得到的菌落数乘以稀释倍数得出cfu/g(ml)。 13241324手指皮肤的细菌学检查第 1格为洗手前，第 2格为洗手后，第 3格为消毒后，第 4格空白对照。 2人 1个营养琼脂平板上 :甲、丙 常规洗手下 :乙、丁 标准洗手甲（丙）乙（丁）丙丁手指皮肤 细 菌学 检查结 果分析第 1格 为 洗手前： + 第 2格 为 洗手后常 规 (甲、 丙 )洗手方法： ?标 准 (乙、 丁 )洗手方法： ?第 3格 为 消毒后： ？第 4格空白 对 照： -医学微生物学实验综合性实验一v脓汁和粪便标本中病原菌的检测（三） 菌落特征观察 P11 细菌纯培养 P10 脓汁和粪便标本检验（录像） 油镜使用方法（讲解）菌落特征 (Colony Characteristics)v 大小：大 (直径约 3mm以上 )，中 (直径约 1 3mm)，小 (直径约 1mm以下 )。v 形状：圆形，卵圆形、假根形、丝状、不规则等。v 边缘：整齐，锯齿状，波浪状，羽毛状。v 表面：隆起、平坦、中心凸起、脐形凹陷；光滑或粗糙、湿润或干燥。v 溶血性：不溶血，不完全溶血 (菌落周围呈草绿色、不透明 )，溶血 (菌落周围出现透明环 )。v 色素：一般为无色或灰白色，特殊色素有两类：脂溶性色素 (菌落本身着色，培养基不着色 )和水溶性色素(菌落及培养基均着色 )。 细菌的溶血现象v根据细菌对血平板中红细胞的溶解能力可分为以下三种溶血类型 （甲型）溶血 :产生溶血素，不完全性溶血，在血平板上菌落周围有 1 2mm半透明的草绿色溶血环。 （乙型）溶血 : 呈完全性溶血，在血平 板 上菌落周围有 2 4mm宽，界限分明，无色透明的溶血环。 （丙型）溶血 :不产生溶血素，在血平 板 上的菌落周围无溶血环。细菌的纯培养 Pure Culturesv脓汁标本在普通平板上有黄色、白色两种菌落，菌落的色素是脂溶性的，是细菌本身的颜色。菌落直径 2mm左右、圆形、隆起、表面光滑、湿润、边缘整齐、不透明。 37 培养 24小时 v 粪便标本在伊红美蓝平板上，有紫黑色、淡粉红色两种菌落，菌落颜色是水溶性的，不是细菌本身的颜色，颜色的产生是因为大肠埃希菌分解乳糖产酸，酸使伊红与美蓝结合，形成紫黑色具有金属光泽、大而隆起、不透明的菌落；菌落直径 2 3mm。致病菌不分解乳糖，菌落呈伊红的颜色，很淡的粉红色，半透明，直径 1 2mm。 37 培养 24小时 紫黑色v 若培养、放置时间过长或者平板上某个部位细菌比较多、菌落比较密集，大肠杆菌菌落颜色可能会发生改变。因为大肠杆菌利用完乳糖以后，就要利用蛋白质，蛋白质分解大多产生碱性物质，中和了乳糖分解时产生的酸。大肠杆菌菌落可能会由原来的紫黑色变成粉红色，和致病菌颜色一样。v 密集或半密集区域的菌落，不一定是 单菌落，有可能是菌落形成单位（ CFU） 。由紫黑色变成粉红色37 培养 36小时 斜面接种 分工v 甲 普通平板 黄色菌落 1支斜面 v 乙 普通平板 白色菌落 1支斜面 v 丙 伊红美蓝平板 紫黑菌落 1支斜面 v 丁 伊红美蓝平板 粉红菌落 1支斜面 斜面标记：组号、黄色、白色、紫黑、粉红。 选择平板上相同的菌落数多的、典型的、容易挑取的单菌落。 在平皿底部玻璃上，画个大圈选取菌落，得到同组同学认可，才能挑取。画圈选菌落画圈选菌落甲黄色接种环套住菌落，轻刮下来，接种斜面。乙白色接种环套住菌落，轻刮下来，接种斜面。丙紫黑接种环套住菌落，轻刮下来，接种斜面。丁粉红接种环套住菌落，轻刮下来，接种斜面。甲黄色乙白色丙紫黑丁粉红斜面接种法 Streak Slant Method甲 黄色 , 乙 白色。丙 紫黑 , 丁 粉红。标记：组号，颜色生物安全警告v 接种环接种斜面一次，可产生几十个微生物气溶胶颗粒。v 气溶胶粒径 100um沉降很快 , 50um在 0.4s内扩散开 , 5um通过呼吸道直接到达肺泡。v Pike博士对实验室