肽核酸技术对禽场病毒持续侵染良好控制方案的研究禽病篇

我们致力于养殖场病毒感染良好控制与净化保健方案推广肽核酸技术对禽场病毒持续侵染良好控制方案的研究 (禽病篇 )韩健葆 博士京农业大学动物科技学院楠森兽医诊断技术研究中心报告人简介：韩健葆 先生楠森集团运营总监，毕业于南京农业大学，从事畜禽场健康管理研究和兽用肽核酸（基因）抗病毒药物及多肽类功能性免疫调节剂研究推广多年 ，兼任国内多家动物保健品企业新药研发顾问，常年为国内规模化养殖场提供技术培训及疫病诊断服务。 应对愈渐复杂的病毒性疾病发生现状，在行业内率先提出 “ 规模化养殖场病毒感染良好控制与净化保健方案 ” 的兽医传染病综合控制专家。森楠生物技术研究有限公司简介森楠生物隶属于楠森集团公司，专注于动物用核酸和多肽类抗病毒免疫增强药物及功能性饲料添加剂研究开发的高新技术企业，公司以 “致力于推广规模化养殖场病毒感染控制与净化方案 ”为核心经营价值，秉承 “以创新思路成就未来、以优异品质创造价值 ”的经营理念，以 “专业、敬业、善学、奋进 ”的企业文化，以服务全球畜牧业为己任，用心为客户提供系统的现代养殖技术解决方案。楠森资质与荣誉“我们致力于为 养殖场提供病毒感染良好控制与净化保健方案 ”“We will dedicate to eradicate the viral dieases in large-scaled farms”楠森核心价值禽场病毒感染控制与净化方案的创造 疫百特注册商标拥有国家发明专利，技术世界领先发明创造名称： 禽流行性感冒病毒特异性反义核酸药物 ，专利号：ZL 201010159652.1 发明人货专利权人：韩健宝在临床流行性的疾病所导致的损失中 ,约有 70%疾病损失是由病毒性疾病导致 ,所以病毒性疾病是影响养殖业健康发展和盈利的关键因素。病毒性传染病在养禽业中所扮演的角色关于病毒病毒是一类超显微的、不具有细胞结构的、专性活细胞内寄生的实体。它由一种核酸 (DNA或 RNA)和蛋白质组成 ,没有酶或酶系统极不完全 ,不能进行独立的代谢作用 ,必须寄生在宿主细胞内 ,借助于宿主细胞的代谢系统复制自身的核酸和蛋白质才能繁殖。病毒的感染机制病毒的生活史分为 5个基本过程： 吸附 (absorption)：病毒对细胞的感染起始于病毒蛋白外壳同宿主细胞表面特殊的受体结合，受体分子是宿主细胞膜或细胞壁的正常成分。因此，病毒的感染具有特异性。 侵入 (penetration)：病毒吸附到宿主细胞表面之后，将它的核酸注入到宿主细胞内。 复制 (replication)：病毒核酸进入细胞后有两种去向，一是病毒的遗传物质整合到宿主的基因组中，形成溶原性病毒；第二种情况是病毒 DNA(或RNA)利用宿主的酶系进行复制和表达。 成熟 (maturation)：一旦病毒的基因进行表达就可合成病毒装配所需的外壳蛋白，并将病毒的遗传物质包裹起来，形成成熟的病毒颗粒。 释放 (release)：病毒颗粒装配之后，它们就可从被感染的细胞中释放出来进入细胞外，并感染新的细胞。有些病毒释放时要将被感染的细胞裂解，有些则是通过分泌的方式进入到细胞外。危害养殖业较大的病毒分类病毒种类 病毒（科） 疾病RNA 副黏病毒 鸡新城疫正黏病毒 禽流感双股 RNA病毒 禽法氏囊小 RNA病毒 鸭肝炎 冠状病毒 禽传染性支气管炎小 RNA病毒 猪口蹄疫黄病毒 猪瘟批衣病毒 猪蓝耳病Taura综合症病毒 虾桃拉综合症DNA细小病毒 小鹅瘟圆环病毒 猪圆环病毒病疱疹病毒 猪伪狂犬病杆状病毒 虾白斑综合征病YebatonTM的研发背景 近年来 ,由于从国外引种及进口动物源性饲料原料，饲养管理模式的改变等导致病毒性疾病发生和控制愈渐复杂 ,养殖场普遍面临着新增的病毒性疾病与老病新发的病毒性疾病双重夹击的困扰，造成生产上极大的损失，对养殖业的健康发展形成了巨大的障碍。 但就目前的抗病毒药物的品种结构而言 ,可供临床使用的药物比较有限 ,远不能满足生产上预防和治疗病毒病的需要。寻找新的有效的抗病毒药 ,特别是对病毒具有高度选择性、而对宿主细胞无毒害的药物仍是当前迫切的需要。在这种特殊时期，疫百特 TM应时而生，将会给中国乃至世界的养殖场所遭受的病毒感染带来新的控制方案。 森楠生物 SENNAN BIO. 下属的中国新药研发中心（ NDDC）与美国 Cornell University基因工程药物研究中心技术合作，将反义技术和反义寡核苷酸药物（ YebatonTM ）这一全新的 “ 沉默基因 ” 治疗技术引用到兽医临床，为当前愈见复杂的病毒性疾病的药物有效控制提供了新的途径。有了疫百特 TM，我们才能与病毒和谐共处 目前在兽医临床上尚无任何抗病毒化合物被许可使用， yebatonTM对于 DNA病毒和小 RNA病毒的控治以其良好的药代动力学特征、广谱的抗病毒作用、广泛的临床适应症以及良好的耐受性和无毒副作用的特点 ,将会为养殖业的健康发展和畜禽病毒性疾病的控治做出重要的贡献。 SENNAN BIO. 针对猪、家禽和虾的主要传染病设计合成的 yebatonTM（反义脱氧寡核苷酸），具有较强的抗病毒活性。体外实验表明本品对猪的（猪瘟病毒、蓝耳病病毒、口蹄疫病毒、伪狂犬病毒、圆环病毒）；禽的（流感病毒、新城疫病毒、传支病毒、鸭肝炎病毒、法氏囊病毒）；对虾的（白斑综合征（ WSS）病毒和桃拉综合征（ TS） 病毒）显示出极强的抗病毒作用。YebatonTM是指建立在反义技术（ Antisense technology）的基础上，采用人工合成的反义脱氧寡核苷酸经特殊工艺修饰制备的基因工程抗病毒免疫增强新药，这种基因片段药物（ DNA及 RNA片段）是与病毒 DNA或RNA互补的核酸序列 ,能与病毒基因链的保守核苷酸序列（即 mRNA ）杂交 ,形成稳定的互补结构 ,选择性地干扰或封闭基因表达、阻断病毒基因正常复制，以达到治疗病毒病目的的新型治疗技术，被称之为 “ 沉默基因 ” 或 “生物导弹 ” 给药技术 。什么是 YebatonTMYebatonTM的特点 相对广谱性（针对危害家禽主要病毒设计的反义脱氧寡核苷肽）， 如 :NDV、 AIV、 IBV、 IBDV等 高效性（病毒性疾病良好的控制效果） 最优化的药物设计（可以和任何化学药物及中药混合复配） 长期投药无毒，安全。 针对病毒目的基因作用，不产生耐药性。疫百特TM的空间结构神奇的拟病毒结构 疫百特TM运用基因工程技术合成并以肽骨架修饰手段对反义寡核苷酸进行修饰形成聚合物，从而弥补天然结构核酸药物抗病毒时效短暂、在机体内生物利用度低，易被核苷酸酶降解的缺陷，不但使之在体内的半衰期明显延长，而且使核酸药物具有稳定的理化性能和相对广谱抗病毒活性。YebatonTM的结构特点我们采用低聚壳聚糖对寡核苷酸基因修饰技术将经修饰的反义寡核苷肽制备成速溶缓释颗粒，家禽口服 YebatonTM后，经过消化道逐步吸收有效成分（反义脱氧寡核苷酸），保证绝大多数有效药物核酸分子的生物活性不被破坏，具备高水平的生物利用率，这种壳聚糖修饰技术和缓释制剂工艺是保证生物活性药物经家禽口服后不被消化道内酶破坏的理想技术。以壳聚糖为载体的口服基因药物（摘要）唐明青 1,刁 勇 1,2,许瑞安 1,2(1.华侨大学分子药物学研究所 , 2.分子药物教育部工程研究中心 ,福建泉州 362021)人药研究论文案例长期以来 ,基因药物的给药以注射途径为主 ,是因为口服给药存在多种限制因素 ,如胃中的低 pH可使 DNA脱嘌呤化 ,消化酶易降解治疗基因 ,常用基因载体难以被肠上皮细胞摄取等 ,相关释药技术的发展明显滞后于基因药物本身的发展 1。作为一种天然的阳离子聚合物 ,低聚壳聚糖不仅易与带负电荷的DNA等遗传物质结合而形成纳米微粒 ,还具有无毒、易获得、生物可降解、稳定、生物相容、能抵抗胃肠道环境 (pH、核酸酶 )对药物的破坏、生物黏附性强、可促进药物渗透吸收等优点 ,日益成为口服基因药物的优良载体。YebatonTM （多聚 -反义寡核苷酸肽）经口服进入体内后与特异宿主细胞结合，在酶的催化作用下脱去肽骨架，经受体导入细胞内，识别并激活 2 、 5-寡腺苷酸合成酶，被活化的寡腺甘酸可以使潜伏在体内的内源核酸酶（核酸内切酶 -Dicer）活化，在 RNA诱导的基因沉默复合体（ RISC， RNA-induced silencing complex） 作用下，对（病毒）靶基因 mRNA进行切割，引起病毒复制环节能力丧失，从而达到抗病毒的作用。YebatonTM的作用机制 (抗病毒机理 )YebatonTM的作用机制 (免疫调节机理 )YebatonTM所独特的拟病毒结构，进入机体后可被免疫系统误认为是遭受到病毒攻击从而激活机体的特异性和非特异性的免疫防卫机能。对其免疫调节抗肿瘤机制的研究表明，其主要作用是激活自然杀伤细胞（ NK细胞）、 T、 B淋巴细胞、巨噬细胞活性、诱导机体产生多种干扰素、多种细胞介素，从而达到预防和治疗病毒病，修复机体免疫缺陷的作用。YebatonTM实验室与临床研究森楠生物新药研发中心的研究人员在长达六年的实验室研究和众多猪、禽场进行临床应用性研究，结果表明：疫百特 (YebatonTM)对猪、禽临床常见多种病毒性疾病具有很好的预防和理想、经济的治疗效果。YebatonTM抑制新城疫病毒（ NDV）感染细胞的试验 结果显示： YebatonTM对 NDV在细胞内感染有明显的抑制作用。对照（ Control）组的细胞中形成的平均空斑数为 128个。YebatonTM组的细胞中形成的平均空斑数为 27个。YebatonTM与常用化学抗病毒药物的治疗对比YebatonTM对人工感染新城疫、法氏囊、传染性支气管炎病毒后的发病率影响结果表明 :在适当的剂量范围内，YebatonTM的添加量越大，控制病毒感染的效果越显著。 YebatonTM不同剂量饮水添加后对各病毒攻毒后的保护情况YebatonTM抑制流感病毒（ AIV）感染细胞的试验将 CEF细胞培养成单层， YebatonTM转染 ;以 PBS液作对照 .14 h后再接 AIV。病毒感染 48 h后通过间接免疫荧光评价 YebatonTM对病毒复制的抑制效果。图 1. 未用 YebatonTM转染的感染 AIV的 CEF细胞（ 100 ） 图 2. 用 YebatonTM转染的感染 AIV的CEF细胞（ 100 ）结果表明，转染YebatonTM可以显著的抑制病毒对细胞的感染。禽场实施病毒性传染病良好控制的原