高中生物选修1专题2微生物的培养与应用

微生物包括哪五类 ：病毒病毒细菌细菌放线菌放线菌真菌原生动物原核生物界原生生物界真菌界病毒界专题 2 :微生物的培养与应用微生物的基础知识微生物病毒病毒真菌原生动物原核生物结构简单 ,个体多数十分微小 (光学显微镜或电子显微镜 才能看到 )，繁殖迅速课题 1.微生物的实验室培养三 .纯化大肠杆菌四 .菌种保存一 .培养基二 .无菌技术课题 1.微生物的实验室培养一 .培养基1.概念 :人们按照对微生物的营养物质的不同需求 ,配制供微生物生长繁殖的 营养基质 。课题 1.微生物的实验室培养一 .培养基2.成分：一般都含有 水 、 碳源 、和 氮源 、 无机盐 、等营养物质，另外还需要满足微生物生长对 pH、 特殊营养物质 , 以及 氧气 的要求。 课题 1.微生物的实验室培养一 .培养基3.分类：a根据 物理性质 分固体培养基 用于微生物的分离计数液体培养基 常用于工业生产课题 1.微生物的实验室培养一 .培养基3.分类：b根据 化学成分 分合成培养基 成分明确天然培养基 成分 不明确c根据 用途 分选择培养基鉴别培养基选择培养基 加入青霉素的培养基分离酵母菌、霉菌等真菌 加入高浓度食盐的培养基 分离金黄色葡萄球菌 不加氮源的无氮培养基 分离固氮菌 不加含碳有机物的无碳培养基 分离自养型微生物 加入青霉素等抗生素的培养基 分离导入了目的基因的受体细胞课题 1.微生物的实验室培养二 .无菌技术利用较为 温和 的化学或物理方法 ,杀死物体中的 部份 微生物 (不包括芽孢和孢子 )1.消毒以 强烈 的化学或物理方法消灭体内外 所有微生物 ,包括 芽孢 和孢子。2.灭菌有些细菌在一定的条件下，细胞里面形成一个椭圆形的 休眠体 ，叫做 芽孢 。芽孢的壁很厚，对干旱、低温、高温等恶劣的环境有很强的抵抗力。芽孢又小又轻，可以随风飘散。当环境适宜的时候，芽孢又可以萌发，形成一个细菌 .a.煮沸消毒法 :100 煮沸 5-6minb.巴氏消毒法 :70-75 下煮 30min或 80 下煮15minc.化学药剂消毒法 :用 75%酒精、新洁尔灭等进行皮肤消毒 ;氯气消毒水源d.紫外线消毒常用消毒的方法：干热灭菌： 160-170 下加热 1-2h。高压蒸气灭菌： 100kPa、 121 下维持 15-30min.灼烧灭菌常用灭菌的方法：课题 1.微生物的实验室培养三 .纯化大肠杆菌一 ).培养基配制与灭菌二 ).接种、培养 纯化大肠杆菌三 ).结果分析与评价课题 1.微生物的实验室培养二 .纯化大肠杆菌2)称量 (按比例 )3) 溶化1)计算4)灭菌 :将包好培养基和培养皿进行高压蒸汽灭菌5)待冷却到 50OC时 倒平板一 ).培养基配制与灭菌倒平板操作的讨论用手触摸锥形瓶，温度下降到刚刚 不烫手 时即可开始倒平板。通过灼烧灭菌，防止瓶口的微生物污染培养基既可以使培养基表面的水分更好地挥发，又可以防止凝结在皿盖上的水珠落入培养基 ,造成污染空气中的微生物可能在皿盖与皿底之间的培养基上滋生，因此 最好不要 用这个平板培养微生物。课题 1.微生物的实验室培养二 ).纯化大肠杆菌1.原理 在适宜环境下， 单个细菌 能迅速生长增殖形成一个细胞群体 菌落课题 1.微生物的实验室培养二 ).纯化大肠杆菌2.方法 :平板划线法、稀释涂布平板法1.原理 在适宜环境下， 单个细菌 能迅速生长增殖形成一个细胞群体 菌落课题 1.微生物的实验室培养4.平板划线法通过接种环在琼脂固体培养基表面 连续划线 的操作，将聚集的菌种逐步 稀释分散 到培养基的表面。注意事项二 ).纯化大肠杆菌课题 1.微生物的实验室培养注意事项 : a.在操作的第一步、划线之前以及划线操作结束时都要 灼烧接种环 ？避免接种环上可能存在的 微生物 污染培养物杀死上次划线结束后，接种环上 残留的菌种 ，使下一次划线时，接种环上的菌种直接来源于上次划线的末端。及时杀死接种环上残留的菌种， 避免 细菌 污染 环境和感染操作者课题 1.微生物的实验室培养注意事项 :b.在灼烧接种环之后 ,要等其冷却后再进行划线以免接种环温度太高， 杀死菌种 。c.在作第二次以及其后的划线操作时，总是从上一次划线的 末端开始 划线能使细菌的数目 随着 划线 次数 的增加而 逐步减少 ,最终能得到由单个细菌繁殖而来的菌落。5.稀释涂布平板法将菌液进行一系列的梯度稀释，然后将不同稀释度的菌液分别涂布到琼脂固体培养基的表面进行培养。 二 ).纯化大肠杆菌系列稀释操作101 102 103 104 105 106涂布平板操作(1)将涂布器浸在盛有 70的酒精的烧杯中。(2)取少量菌液 (不超 0.1mL),滴加到培养基表面。(3)将沾有酒精的涂布器在火焰上引燃，火熄后冷却 8 10s。(4)用涂布器将菌液均匀地涂布在培养基表面。课题 1.微生物的实验室培养6.培养观察将接种后的培养基和一个未接种的培养基放入 37度恒温箱中培养12h和 24h后，分别观察记录二 ).纯化大肠杆菌1.未接种的培养基表面是否有菌落生长？如果有菌落生长，说明了什么？无菌落生长，说明培养基的制备是成功的，否则，说明培养基有杂菌，需要重新制备。2.在接种大肠杆菌的培养基上，能否观察到独立的菌落？它们的大小、形状、颜色相似？如果接种成功的话，在培养基的表面可观察到大小、形状、颜色相似的菌落。三 ).结果分析与评价3.培养 12h和 24h后，观察到的实验结果相同吗？如果不同，请分析产生差异的原因？培养 12h与 24h后的大肠杆菌菌落的 大小 会有明显 不同。随着时间的延长、菌落的不断生长，使菌落不断增大。4.如果在培养基上观察到不同形态的菌落，请分析其可能的原因。无菌操作 未 达到要求：可能是培养基灭菌不彻底；可能是接种时发生了污染；也可能是在培养的过程中受到了污染。三 ).结果分析与评价1.试管低温临时保存将菌种接种到试管的固体斜面培养基上，培养成菌落后，置于 4OC的冰箱中保存（每隔 3 6个月要重新接种培养后再保存）。2.甘油管长期保存在 3mL的甘油瓶中加入 1mL的甘油，高压灭菌。将 1mL培养的菌液转移到甘油瓶中，充分混合后，置于 20OC的冷冻箱中保存。四 .菌种保存课题 2.土壤中分解尿素的细菌的分离与计数一 .基础知识原理1.分离 - 筛选菌株筛选原理 :人为提供有利于目的菌株生长的 条件 ，同时抑制或阻止其他微生物生长。筛选方法 : 选择培养基培养控制培养基的 PH控制培养的温度 (氧浓度等 )课题 2.土壤中分解尿素的细菌的分离与计数一 .基础知识原理2.计数筛选方法 : 用显微镜 直接 计数间接 计数 统计平板的菌落数间接计数法（活菌计数法） :原理 :在 稀释度 足够 高 时，微生物在固体培养基上所形成的 一个菌落 是由 一个单细胞 繁殖而成的，即一个菌落 代表 原先的一个细菌方法 : 稀释涂布平板法计算公式 :（ CV ） x M注意事项注意事项 为了保证结果准确，一般选择菌落数在为了保证结果准确，一般选择菌落数在