GB 4789.40-2016 食品安全国家标准 食品微生物学检验 克罗诺杆菌属（阪崎肠杆菌）检验

016食品安全国家标准食品微生物学检验克罗诺杆菌属(阪崎肠杆菌)016 前 010食品安全国家标准 食品微生物学检验 阪崎肠杆菌检验、013出口奶粉中阪崎肠杆菌(克罗诺杆菌属)检验方法 第1部分:分离与计数。010相比,主要变化如下:标准名称修改为“食品安全国家标准 食品微生物学检验 克罗诺杆菌属(阪崎肠杆菌)检验”;修改了可疑菌落的挑取数量。0161 食品安全国家标准食品微生物学检验克罗诺杆菌属(阪崎肠杆菌)检验1 范围本标准规定了食品中克罗诺杆菌属(检验方法。本标准适用于婴幼儿配方食品、乳和乳制品及其原料中克罗诺杆菌属的检验。2 设备和材料除微生物实验室常规灭菌及培养设备外,其他设备和材料如下:温培养箱:251,361,44箱:25。温水浴箱:44平:质器。荡器。菌吸管:110微量移液器及吸头。菌锥形瓶:容量10000000菌培养皿:直径90自动微生物生化鉴定系统。3 冲蛋白胨水(良月桂基硫酸盐胰蛋白胨肉汤崎肠杆菌显色培养基。蛋白胨大豆琼脂(化鉴定试剂盒。化酶试剂:类发酵培养基:蒙氏柠檬酸盐培养基:0162 第一法 克罗诺杆菌属定性检验4 检验程序克罗诺杆菌属检验程序见图1。图1 克罗诺杆菌属检验程序5 增菌和增菌取检样100g(灭菌锥形瓶中,加入900缓冲蛋白胨水,用手缓缓地摇动至充分溶解,361培养18h2h。移取14养24h2h。轻混匀取增菌培养物1环,分别划线接种于两个阪崎肠杆菌显色培养基平板,61培养24h2h,0163 培养。取至少5个可疑菌落,不足5个时挑取全部可疑菌落,划线接种于51培养48h4h。定自行生化鉴定。克罗诺杆菌属的主要生化特征见表1。可选择生化鉴定试剂盒或全自动微生物生化鉴定系统。表1 克罗诺杆菌属的主要生化特征生化试验特 征黄色素产生+氧化酶)檬酸水解(+)发酵)+注:+99%阳性;-99%阴性;(+)90%99%阳性;(-)90%99%阴性。6 结果与报告综合菌落形态和生化特征,报告每100g(品中检出或未检出克罗诺杆菌属。第二法 克罗诺杆菌属的计数7 体和半固体样品:无菌称取样品100g、10g、1别加入9000轻振摇使充分溶解,制成110样品匀液,置361培养18h2h。分别移取14养24h2h。体样品:以无菌吸管分别取样品1000别加入9000轻振摇使充分混匀,制成110样品匀液,置361培养18h2h。分别移取14养24h2h。0164 离、 结果与报告综合菌落形态、生化特征,根据证实为克罗诺杆菌属的阳性管数,查告每100g(品中克罗诺杆菌属的0165 附 录 冲蛋白胨水( 2法加热搅拌至溶解,21高压灭菌15良月桂基硫酸盐胰蛋白胨肉汤 改良月桂基硫酸盐胰蛋白胨(法加热搅拌至溶解,装每管1021高压灭菌15 滤除菌。万古霉素溶液可以在05保存15d。0166 良月桂基硫酸盐胰蛋白胨肉汤合液中万古霉素的终浓度为10g/:蛋白胨大豆琼脂( 法加热搅拌至溶解,煮沸121高压15分N,N,N,N法少量新鲜配制,于冰箱内避光保存,在7 试验方法用玻璃棒或一次性接种针挑取单个特征性菌落,涂布在氧化酶试剂湿润的滤纸平板上。如果滤纸在10色或深蓝色,则为氧化酶试验阴性,否则即为氧化酶实验阳性。注:实验中切勿使用镍/铬材料。分法将各成分加热溶解,管分装521高压150167 验方法挑取培养物接种于好在液体培养基的液面下。301培养24h2h,观察结果。养基呈紫色,阴性者为黄色,空白对照管为紫色。分法将各成分加热溶解,管分装521高压15 实验方法挑取培养物接种于好在液体培养基的液面下。301培养24h2h,观察结果。养基呈紫色,阴性者为黄色。分法将各成分加热溶解,管分装521高压15 实验方法挑取培养物接种于好在液体培养基的液面下。301培养24h2h,观察结果。养基呈紫色,阴性者为黄色。分酪蛋白(酶消化)0168 法将各成分加热溶解,管分装521高压15 糖类溶液(杏仁甙)法分别称取杏仁甙等糖类成分各8g,溶于100滤除菌,制成80mg/ 法无菌操作,将每种糖类溶液加入基础培养基,混匀;分装到无菌试管中,每管10 实验方法挑取培养物接种于各种糖类发酵培养基,刚好在液体培养基的液面下。301培养24h2h,观察结果。糖类发酵试验阳性者,培养基呈黄色,阴性者为红色。法将各成分加热溶解,管分装1021高压15成斜面。0169 验方法挑取培养物接种于整个培养基斜面,361培养24h2h,观察结果。阳性者培养基变为蓝色。01610 附 录 索表每100g(样中克罗诺杆菌属最可能数(罗诺杆菌属最可能数(索表阳性管数100101信限下限上限阳性管数100101信限下限上限00011042注1:本表