丙肝抗体检测的困惑与对策ppt课件

丙肝抗体检测的困惑与对策 1 背景 1 l 我国 HCV感染以 1型 为主 80% l 其中以 1b型多见 64% l 慢性化率 60%-80% 肝硬化 10%-15% 肝细胞癌 1%-7% l 无预防性疫苗 2 背景 2 l 最有效治疗方案：聚乙二醇长效 a-干扰素（ PEG-IFN-a）联合利巴韦林（ Ribavirin) l 持续免疫学应答（ SVR）基因 1型患者低于 50% l HCV抗体阳性率随年龄增加而上升 l 男女间无明显差异 3 Nature. Reviews. March 2005 Volume 5 4 Nature. Reviews. March 2005 Volume 5 5 实验诊断 -2004版丙型肝炎防治指南 一、常规指标 l ALT AST 白蛋白 胆碱酯酶 PT 二、 HCV抗体 l 以 EIA法对高危人群筛查 l 免疫功能缺陷、自免病、易假阳性， HCV RNA 有助于确诊 HCV感染 l 第三代试剂敏感性、特意性高， 可不用重组免可不用重组免 疫印迹法（疫印迹法（ RIBA）验证）验证 6 * 临界值、灰区概念 载自 Chin Jab Med. July 2006 Vol29.No.7 l 应结合临床情况，慎重考虑灰区样本的检验结果 7 * HCV抗体 S/CO比值分布 载自 Clinical Chemistry 49:6 940944 (2003) 8 * 举例： HCV抗体阳性标本做确认实验 S/CO 比 值 阴性 n(%) 不确定 n(%) 阳性 n(%) 1.0-4.0(n=98) 69(70%) 20(20%) 9(9%) 4.1-8.0(n=31) 14(45%) 13(42%) 4(13%) 8.1-12.0(n=32) 5(16%) 13(41%) 14(44%) 12.1-20.0(n=63) 0(0%) 3(5%) 60(95%) 载自 Clinical Chemistry 49:6 940944 (2003) 9 * HCV抗体阳性标本做 HCV-RNA检测 S/CO比 值 阳性 n(%) 阴性 n(%) 1.0-8.0(n=30) 2(11%) 28(89%) 8.1-20(n=25) 0(0%) 25(100%) 20.1-30(n=29) 17(58%) 12(42%) 30.1-40(n=172) 159(92%) 13(8%) 40(n=283) 261(92%) 22(8%) 载自 Clinical Chemistry 49:6 940944 (2003) 10 举例 11 J Clini Hepatol, January 2011,Vol.27, No.1 12 J Clini Hepatol, January 2011,Vol.27, No.1 13 需要 HCV检测的规范化流程 14 HCV检测策略 因目的而异： 1. 诊断 2. 疫情监测 3. 血液筛查 丙型肝炎病毒实验室检测技术规范 上报稿 15 筛查试剂 样品 阴性反应 初筛试验 阳性反应 复检试验 均阴性反应一阴一阳均阳性反应 补充试验 原有试剂双孔或原有试剂加另一 种不同原理（或厂家）试剂 报告阴性 图 3 HCV临床诊断筛查检测流程 以诊断为目的的检测策略 HCV 临床诊断筛查检测流程 16 复检阳性反应样品 阳性反应 免疫印迹试验 阴性反应 报告阴性 图 4 HCV直接进行补充试验检测流程 可疑 核酸检测 阳性反应阴性反应 报告可疑 报告阳性 以诊断为目的的检测策略 HCV 直接进行补充试验检测流程 17 复检阳性样品 可疑 免疫印迹试验 阴性反应 报告阴性 图 5 HCV“根据试剂 S/CO比值 ”的确证检测流程 阳性反应 报告阳性 报告可疑 根据 S/CO值判断 高 S/CO值 低 S/CO值 以诊断为目的的检测策略 HCV 考虑 S/Co比值的确证检测流程 仅限于试剂给出了特 定阈值时使用 18 根据补充试验结果报告抗 -HCV检测结果的解释 抗 -HCV 筛查结果 补充试验 结果 报 告 解 释 筛查试验 阴性 不需 检测 抗 -HCV阴性 未感染 HCV，除非 怀 疑最近被感染或存在其它 证 据提示感染 HCV。 筛查试验 阳性， 且 S/CO比 值 高 未做 抗 -HCV阳性 可能提示既往感染或 现 在感染了 HCV；未做血清 学 补 充 试验 。高 S/CO比 值 的 样 品常被确 证为 阳性 （ 95），但尚有 1个月）重 测 抗 -HCV或 HCV RNA 。 筛查试验 阳性 NAT阳性 抗 -HCV阳性HCV RNA阳性 提示活 动 性 HCV感染。 筛查试验 阳性 NAT阴性免疫印迹阳性 抗 -HCV阳性HCV RNA阴性 存在抗 -HCV，提示既往感染或 现 在感染 HCV；由 于某些 HCV慢性感染病人的 HCV RNA间 隙阳性， 因此一次 HCV RNA阴性 结 果不能排除活 动 性感染 。 筛查试验 阳性 NAT阴性RIBA阴性 抗 -HCV阴性HCV RNA阴性 未感染 HCV。 筛查试验 阳性 NAT阴性RIBA可疑 抗 -HCV可疑HCV RNA阴性 抗 -HCV筛查结 果可能是假阳性，在 这 种情况下，提示未感染 HCV。 19 样品 阴性反应 初筛试验 阳性反应 复检试验 阴性反应阳性反应 报告阴性 筛查试剂 （高敏感性） 报告阳性 筛查试剂 （高特异性） 图 7 HCV感染疫情报告检测流程 以疫情监测为目的的检测策略 20 另一种抗体筛查 试剂或 NAT 以血液筛查为目的的检测策略 样品 阳性反应 初筛试验 阴性反应 复检试验 阳性反应阴性反应 报告阳性 待确证 抗体筛查试剂 报告阴性 图 6 HCV血液筛查检测流程 21 基本原则 1 l 对于筛查试验阴性样品，不需要做进一步 检测，可报告 “ 抗 HCV阴性 ” 对于筛查试验阳性样品，可选择 S/CO比值 进行补充试验，或非 S/CO比值的补充试验 22 基本原则 2 2a 高比值 ，可报告 “ 抗 HCV阳性 ” ，不需要做 补充试验；低比值，最好做 RIBA.此方案适合 特定的筛查试剂 （已证实高比值 95%补充试 验阳性。 2b所有筛查试验阳性标本，均进行 RIBA；或先 作 HCV RNA检测，阴性标本再测 RIBA 23 丙肝病毒及丙肝抗体试剂 1 l 1989年美国学者 Choo等从感染输血后非甲非 乙型肝炎（ PT-NonA、 NonB）病毒的黑猩猩 肝组织中，首次获得病毒的全基因克隆 l 同年，第一代 EIA-1实际问世（单一 NS4重组 抗原，即 C100-3） l 1992年，第二代 EIA-2（增加 Core和 NS3重组 抗原） 24 丙肝病毒及丙肝抗体试剂 2 l 1995年第三代 EIA-3出现 l 核心抗原比例降低 l 重新构建 NS3和 NS4，使抗原活性提高 l 增加 NS5抗原，诊断价值仍在探讨 l 缩短检测窗口期（ 58天） 25 假阳性问题 l 美国 CDC报道在 HCV低流行率人群，如无偿献 血员（低于 10%） l 采用第二代 (Abbott)和第三代 (Ortho)EIA试 剂 l 假阳性率可达 30% l 不能仅凭 EIA结果判断 HCV感染 l 以 RIBA或 HCV RNA进行验证 26 造成假阳性原因 l 高 IgG血症：高浓度非特异性 IgG可吸附到固 相载体上或包被的抗原上 l RF干扰 l SOD超氧化歧化酶干扰 l HCV抗原不纯 27 我国情况 l RIBA试剂昂贵，我国试验室、采血机构目 前不做为补充试验 l 假阳性结果引起部分就医者或献血员不必 要的心理负担 l 不同试剂盒对弱阳性的检出率不同 l 同一厂家不同批次的试剂，质量有差异 l 我国 HCV不同感染率的人群， S/CO阈值数 据缺乏（美国主要 a型 ；中国 主要 1b 型） l 在我国， S/CO高低不能预示真阳性的可能 性大小 28