(019)初始污染菌检验规程

1、 目的 通过检验产品的初始污染菌，了解产品在生产过程中受微生物的情况，以便更好地提高 产品质量。 2、 范围 本方法适用于本公司生产的一次性使用静脉输液针（简称：输液针） 、一次性使用无菌 配药注射器 带针（简称：配药注射器） 、一次性使用无菌注射器 带针（简称：注射器） 、一 次性使用输液器 带针（简称：输液器） 、一次性使用袋式输液器 带针（简称：袋式输液器） 及其配件、无菌产品初始包装等的初始污染菌的检验。 3、 依据 GB 15979-2002 一次性使用卫生用品卫生标准 中华人民共和国药典 2010 版第二部 GB 8368 一次性使用输液器 GB/T 19973.1-2005 （ISO 11737-1:1995）医疗器械的灭菌微生物学方法 第1部分:产 品上微生物总数的估计 GB 15980 一次性使用医疗用品卫生标准 4、 要求 灭菌产品管道类内腔污染菌数：应10cfu/件次，外部应100cfu/件次；非管道类应 100cfu/件次；敷料类应100cfu/g；消毒产品应1000cfu/件次或重量（g） ，具体见表 1。 表 1 初始污染菌含量产品名称 内腔污菌数 外表面污染菌数 注射器或配药注射器 输液器、袋式输液器 输 液 针 10cfu/件次 100cfu/件次 无菌产品初始包装 100cfu/件次或重量 （g） 注射针 100cfu/件次 5 检验方法 5.1 卵磷脂、吐温 80营养琼脂培养基的配制： 成份： 蛋白胨 20 g 牛肉膏药 3 g 氯化钠 5 g 琼脂 15 g 卵磷脂肪 1 g 吐温 80 7 g 蒸馏水 1000 g 制法：先将卵磷脂加到少量蒸馏水中，加热溶解，加入吐温 80，将其他成分(除琼脂外) 加到其余的蒸馏水中，溶解。加入已溶解的卵磷脂、吐温 80，混匀，调 pH 值为 7.17.4 加 入琼脂，121高压灭菌 20min，储存于冷暗处备用。 5.2 样品采样数量：各类产品每批随机抽取 10 件样品。 5.3 供试液制备 5.3.1.供试品是敷料、可以破坏性类可用无菌手续称取 10g,放入 100ml 灭菌生理盐水 中充分振荡后取样。作为 1：10 的供试液。 5.3.2.供试品是液体取 10ml 加至 100ml 灭菌生理盐水中充分振荡后取样。作为 1：10 的供试液。 5.3.3.对供试品不能采用破坏性取样可用浸有无菌生理盐水拭子涂抹采样，被采表面积 为 100cm2，加入灭菌生理盐水 100ml。作为 1：10 的供试液。 5.3.4.可用破坏性方法取样供试品：（参照中华人民共和国药典 2005 年规定进行) 5.3.5 供试品为输液器（或袋式输液器）及注射器（或配药注射器）产品的供试液制备 5.3.5.1 内腔供试液制备：每套输液器内腔注入 20mL（袋式输液器注入量为 280 mL） 灭菌生理盐水,振摇 5 次，汇聚在一无菌及无热原的烧杯中。作为 1：1 的供试液。每支注射 器抽取灭菌生理盐水至公称容量，振摇 5 次，汇聚在一无菌及无热原的烧杯中。作为 1：1 的供试液。 5.3.5.2 外部供试液制备：按产品外表面积每 10cm2用 1mL 的灭菌生理盐水冲洗（可用 无菌棉拭子沾无菌生理盐水在输液器表面往返涂抹 10 次后，将棉试子放入 10ml 灭菌生理盐 水的试管中,将试管震打 80 次混匀作为供试液） ，汇聚在一无菌及无热原的烧杯中。作为 1：1 的供试液。 5.3.6 供试品为注射针或溶药针产品的供试液制备 除去单包装，内外表面积每 10cm2用 10mL 的灭菌生理盐水冲洗，汇聚在一无菌及无热 原的烧杯中或将 1 支注射针直接完全浸入 10mL 无菌、无热原的生理盐水中每支注射针内外 表面积约 5cm2）。作为 1：20 的供试液。 5.3.7 供试品为输液针产品的供试液制备 5.3.7.1 内腔供试液制备：每支输液针内腔缓慢注入 5 mL 灭菌生理盐水，汇聚在一无 菌及无热原的烧杯中。作为 1：5 的供试液。 5.3.7.2 外部供试液制备：除去单包装，外表面积每 10cm2用 10mL 的灭菌生理盐水冲 洗，汇聚在一无菌及无热原的烧杯中。作为 1：10 的供试液。 5.3.8 供试品为扩张器产品及无菌产品初始包装的供试液制备 按产品外表面积每 10cm2用 1mL 的灭菌生理盐水冲洗（可用无菌棉拭子沾无菌生理 盐水在产品内表面往返涂抹 10 次后，将棉试子放入 10ml 灭菌生理盐水的试管中,将试管震 打 80 次混匀作为供试液） ，汇聚在一无菌及无热原的烧杯中。作为 1：1 的供试液。 5.4 移至培养基（平板倾注法） 将每样取 3 份平行样，每个稀释级各吸取 1ml（不超过 45）至每个灭菌平皿，也就是 每个稀释级注 3 个平皿。经灭菌完毕的营养琼脂培养基冷却至 4550 时，倾注上述各个 平皿 15ml，另倾注一个不加样品灭菌空平皿作空白对照。以顺时针或逆时针方向快速转动 平皿，使供试液与培养基充分混匀。冷却后将已经凝固的平板倒置于 37培养箱中，一般 XXXX 医用器材有限公司 第三层次文件 标题：初始污染菌检验规程 修订状态：B 版 0 次 文件编号：XX/TF/PZ/0192010 页码：第 3 页 共 4 页 培养 482h。 注：对于液体基质中含有杀灭或抑制微生物时，采用 0.45m 孔径滤膜过滤，再将滤膜移至培养基平皿中，具体详见 GB/T 19973.1-2005 中 A.4.2.6.2 膜过滤法（薄膜过滤器。国产的价格大概 500 元左右，全套的话可能要在 10002000.1.供试液制备：取定量或定重的样品，浸泡至一定量的浸提液（0.9%无菌氯化钠溶液或者 pH=7.0 蛋白胨-氯化钠溶液）中，浸提 30min，此溶液即为供试液。2.将薄膜过滤器的薄膜用 0.9%无菌氯 化钠溶液浸湿，然后将浸提液无菌操作倒入过滤器中过滤，在完全滤完前，倒入一定量的 0.9%无菌氯化钠溶 液作为冲洗液。3. 取出滤膜，贴在营养琼脂培养基上，倒置培养。这个主要是基本步骤，根据不同情况还有其 它问题。可以参考中国药典 2005 年版附录无菌检查法） 。 5.5 计数方法：将平板置菌落计数器或从平板的背面直接以肉眼用标记笔点计，以投射 光衬以暗色背景，仔细观察，计数。必要时可以借助于放大镜、菌落计数器。 菌落特征： 形态特征：常为白色、灰白色或灰色，亦有淡褐色、淡黄色（如果培 养基中加入 0.1%TTC 试剂，菌落为红色） 边缘整齐或不整齐，表面有光滑、粗糙，皱褶、突起或扁平。 大小差异很大。 5.6 计算公式为： 平均菌数稀释倍数 菌数/每件次（或 g）= 件次或重量（g） 6 检验规则 6.1 若每个平行样中无菌或菌落数小于或等于表 1 时，则报出菌数符合规定。 6.2 产品的初始污染菌是为一次/周。 6.3 产品取样应在完成整个包装过程以后，而又在灭菌前从大包装内取；对零组件取样 应在流入下道工序之前取样。 7注意事项 7.1 供试品的取样必须在万级环境中 100 级净化条件下，无菌操作，防止污染。 7.2 应严格遵守无菌操作，同时消除抑菌成份的干扰。 7.3 外部污染菌数超标一般为工人的的手污染菌数超过 300cfu/只手或操作台面污染菌数 超过 20cfu/cm2，这时应增加工人的手消毒频次及对手消液的杀菌效果进行重新验证或对操 作台面用 75%酒精过行消毒。 7.4 进入无菌室的控制 a、定期检查无菌环境的空气是否符合规定； b、无菌室在使用前开启紫外线灯 3060min 进行空气消毒； c、在进行接种倾注琼脂平板均需在无菌室超净工作台或接种罩内操作; d、检查一切进入无菌环境的器材灭菌、消毒的标志物是否完备； e、洗手消毒：首先用肥皂涂在手上揉搓 1015s，肥皂虽不杀菌，有去污作用，然后 用流水彻底冲洗，可有效除去手上大多数暂住菌，如连续洗 23 次(视手的污染程度)，使 残余的微生物减少到最低水平，再用消毒液洗手，如洗必泰、苯扎溴铵、碘伏、乙醇、过氧 乙酸等。 f、操作人员将手部消毒后，再穿戴无菌工作服(包括鞋、帽、口罩等)。严格的无菌服 应是戴帽套头的无扣的上衣，颈部、脸部及袖口是紧口的，以保护身体，防止污染。一般的 无菌衣是背开口，围胸部、紧扣颈部与长袖紧口的，以保护身体，防止污染。 g、在进入无菌室后，进一步用浸有消毒液的棉球或泡沫塑料物消毒手，然后可进行检 验或实验操作。 7.5 检验过程的控制 a、在所有操作中均不应大幅度或快速动作，以免搅动空气中尘埃微粒。 b、使用玻璃器皿应轻取轻放，避免破损，以防培养物扩散。 c、在近火焰区操作。 d、使用金属接种器具、用前、用后均需燃烧灭菌。 e、应用橡胶乳头套在吸管上端，吸吹供试液或培养液等，切勿用嘴直接吸吹吸管。 f、用注射器吸取样品、培养物时，注射器内应无空气；装卸针头时应用灭菌的镊子； 从密封容器内抽取液体时，应注入无菌空气；带液体的针筒针头应向上倾斜，并用 75%乙醇 棉球 (挤干)保护针头根部；注射时勿用力过猛，以免内容物喷出或针头脱落使溢出液体污 染灭菌器材或环境。 g、当灭菌瓶塞或试管塞掉落在工作台上，一般不宜再用，应另换无菌塞，或通过火焰 处理后再用。 7.6 意外事故的控制 a、假定无菌衣受污染，应脱下翻转包裹，使污染部分包在内部，送往消毒，经灭菌后， 洗涤