探究斐林试剂和双缩脲试剂的使用条件

-精选财经经济类资料- -最新财经经济资料-感谢阅读- 1 探究斐林试剂和双缩脲试剂的使用 条件 人教版高中生物必修 1 的“生物 组织中还原糖、蛋白质的鉴定”实验对 “斐林试剂”和“双缩脲试剂”的使用作了 要求： 斐林试剂鉴定还原糖时，必 须将甲液和乙液混合均匀后使用，切勿 分别加入生物组织样液中进行检测。 双缩脲试剂鉴定蛋白质时，先向蛋白稀 释液中加入 A 液（1 mL） ，均匀，再加 入 B 液 34 滴。针对平时学生实验时 反映出的很多问题，笔者进行了探索， 旨在探究剂的使用条件，改进实验，确 保实验顺利完成。 中国论文网 /8/view-12759899.htm 1 实验目的 -精选财经经济类资料- -最新财经经济资料-感谢阅读- 2 尝试探究斐林试剂、双缩脲试 剂的使用条件，进一步将本实验完善， 为日后教学工作的改进奠定基础。 2 实验原理 可溶性还原糖（如葡萄糖、果 糖、麦芽糖）与斐林试剂发生作用，可 生成砖红色的 Cu2O 沉淀。 葡萄糖+Cu（OH）2 葡萄糖酸 +Cu2O（砖红色）+H2O; 蛋白质+双缩脲试剂紫色。 蛋白质与双缩脲试剂发生作用， 产生紫色反应。蛋白质分子中含有很多 肽键，在碱性 NaOH 溶液中能与双缩脲 试剂中的 Cu2+作用，产生紫色反应。 3 材料、试剂、器具 实验材料：新鲜去皮的梨汁、 生豆浆、熟豆浆。 实验试剂：斐林试剂（甲液： 质量浓度 0.1g/mL NaOH 溶液;乙液：质 量浓度 0.05 g/mL CuSO4 溶液） 、双缩 脲试剂（A 液：质量浓度 0.1 g/mL NaOH 溶液;B 液：质量浓度 0.01 g/mL -精选财经经济类资料- -最新财经经济资料-感谢阅读- 3 CuSO4 溶液） 、质量分数 8%的盐酸、蒸 馏水等。 器具：试管、试管架、试管夹、 烧杯、量筒、滴管、酒精灯、三脚架、 石棉网、打火机等。 4 方法步骤及现象（表 1、表 2） 5 对实验现象的分析 由表 1 的 1、2 号试管现象可看 出，斐林试剂的使用顺序对实验结果有 一定影响，但都能出现砖红色沉淀，可 能是待测液中的有机酸会中和一些 NaOH，使产生的 Cu（OH）2 不足，所 以 2 号试管砖红色沉淀会少些。1、3 号 试管现象说明斐林试剂实为新制的 Cu（OH）2 悬浊液，不需提供酸性环 境，加入盐酸会将新的 Cu（OH）2 分 解，致使还原糖无法和斐林试剂反应， 所以无砖红色沉淀。从 1、4 号试管现 象可知，加热方式不同对实验结果有一 定影响，水浴加热比直接用酒精灯加热 更理想，受热更均匀，也更安全。1、5 -精选财经经济类资料- -最新财经经济资料-感谢阅读- 4 号试管说明只加乙液实验无法进行，即 还原糖不能单纯的与 Cu2+发生反应并 生成砖红色沉淀。 由表 2 的 1、2 号试管可知，双 缩脲试剂使用顺序对实验结果有一定影 响。1、3 号试管说明加入的双缩脲试剂 B 液（ CuSO4）不能过量，否则蓝色的 Cu2+会遮盖产生的紫色或致使试管底部 余有 Cu2+。由 1、4 号试管可看出，在 碱性溶液中，蛋白质才能与双缩脲试剂 中 Cu2+反应，形成紫色络合物，也就 是说蒸馏水不能代替 NaOH 溶液。 1、5 号试管可看出，豆浆经煮沸仍可发 生双缩脲反应，也进一步说明了双缩脲 试剂是和肽键反应，即使蛋白质变性了， 空间结构破坏但肽键未破坏，也能和双 缩脲试剂出现颜色反应。 此次实验发现斐林试剂和双缩 脲试剂的使用中，试剂使用顺序对实验 结果会有一定影响但不大，而试剂的量 （如双缩脲试剂 B 液）对实验结果的影 响较大。此外实验的水浴的温度、处理 -精选财经经济类资料- -最新财经经济资料-感谢阅读- 5 时间、溶液酸碱性条件、加热方式等都 有可能影响实验结果，所以实验过程中 要控制好无关变量。 6 实验设计及说明 本实验设计立足于高中生物实 验“检测生物组织中的还原糖、蛋白质” 基础之上，但又加以改进和创新： 从斐林试剂的使用顺序、条件要求（酸 碱性） 、加热方式等方面进行设计，通 过实验让学生能更好的理解相关的理论 知识。 针对双缩脲试剂的使用条件 及蛋白质检测中易出现的问题进行设计， 通过变性和未变性蛋白质对照，进一步 说明双缩脲反应的本质为“双缩脲试剂 和肽键反应” ，也提示双缩脲试剂不能 做为鉴定蛋白质变性的试剂。 诚然此实验