abo、rhd血型鉴定

ABO、RhD 血型鉴定操作规程 一、 目的 指导规范本科工作人员进行血液 ABO、RhD 血型鉴定工作。 二、 适用范围 输血岗位工作人员。 三、 职责 负责对申请输血的标本进行 ABO、RhD 血型鉴定。 四、 标本 2mlEDTA-K2 抗凝全血。 五、 实验器材 载玻片、0.510ul 加样枪、20200ul 加样枪、1001000ul 加样枪、一次 性吸头、台式离心机、小试管、微柱凝胶离心机、记号笔等。 六、 实验试剂 抗-A、抗-B 血型定型试剂（单克隆抗体） ，RhD（IgM）血型定型试剂 （单克隆抗体） ；0.5%1%A、B 标准红细胞盐水悬液；ABO 、RhD 血型定 型检测卡；0.9% 生理盐水。 七、 检测原理 血型鉴定，是根据 IgM 类特异性血型抗体与红细胞膜上特异性抗原结合， 能出现凝集反应的原理，用已知 IgM 类特异性抗-A、抗-B 和 RhD 标准血 清来检测红细胞上有无相应的特异性抗原；而反定型，是同时用标准 A 红细胞和 B 红细胞来检测被检血浆（清）中有无相应的天然 IgM 类抗-A 或抗-B。 微胶凝柱卡是采用排阻层析原理，在微胶凝柱介质中，红细胞抗原与相 应抗体结合，形成红细胞免疫复合物，在一定离心力下，该复合物不能 通过凝胶间隙而浮于胶表面或悬于胶中；如无相应抗体结合，则不能形 成红细胞免疫复合物，在一定离心力下，分散的红细胞可以通过凝胶间 隙沉于微柱腔底部。 八、 操作流程 1、 玻片法 1.1 查抗原：取洁净载玻片一张，用记号笔标注好 A、B、Rh，分别向所标注位 置加 5ul 待检全血，再向相应位置滴加抗 -A、抗-B 、RhD 标准血清一滴，混 匀。 1.2 查抗体：台式离心机 3000r/min 离心待检标本 2min，上清备用。取洁净载 玻片一张，记号笔标注 Ac、Bc ，相应加入 A 型、B 型标准红细胞一滴，再 分别加入待检血浆（清）20ul ，混匀。 1.3 将玻片不断轻轻转动，使血清与红细胞充分混匀，连续 15min，肉眼观察有 无凝集反应。如肉眼观察无凝集，则用显微镜观察有无凝集或溶血。 2、 微胶凝柱法 2.1 标本准备：待检全血 3000r/min 离心 2min，上清液为待检血浆；取压积红 细胞 10ul 加入 1000ul 生理盐水中制成待检红细胞悬液，在试管上做好标记。 2.2 标注微柱凝胶卡（受检者信息及检测时间） 。 2.3 将备好的待检红细胞悬液分别加入前 4 支微柱腔（抗-A、抗-B、RhD、对照） ， 每孔 50ul。 2.4 将待检血清（浆）分别加入后两支微柱凝胶腔中（中性） ，每孔 50ul。 2.5 将已知 A 型和 B 型红细胞 0.5%1.0%浓度悬液 50ul 分别加入第五和第六支 微管中。 2.6 即刻用专用微柱凝胶离心机离心 5min，取出肉眼观察，判定结果。 2.7 结果判定：阴性不出现特异性抗原抗体复合物，红细胞沉于微柱底部；阳性 出现特异性抗原抗体复合物，红细胞浮在凝胶表面或胶中。 九、 ABO、 RhD 标准血型谱 血型 抗-A 抗-B RhD 对照 Ac Bc A 型 RhD（+ ） + - + - - + B 型 RhD（+ ） - + + - + - O 型 RhD（+ ） - - + - + + AB 型 RhD（+ ） + + + - - - A 型 RhD（-） + - - - - + B 型 RhD（-） - - - - + - O 型 RhD（-） - - - - + + AB 型 RhD（- ） + + - - - - 十、 注意事项 1. 严格按照操作规程进行作业，认真核对标本并做好相应标记。 2. 所用玻片、吸头、试管必须清洁干净，防止溶血。 3. 一般先加血清，后加红细胞，以便核实是否漏加血清。 4. 所有试剂用完应放回冰箱保存，以免细菌污染，影响试剂实验结 果。 5. 微胶凝柱卡必须在使用前离心。 6. 红悬液浓度控制在 0.5%1.0%范围内，浓度过高或过低均会引起 异常结果。 7. 红细胞标本不能被细菌污染，否则会出现假阳性反应。尽可能用 当日采集新鲜血做，若不得不用陈旧血，则必须先做阴性对照试 验，以确定该标本是否可以做本实验。 8. 如在微柱凝胶管中出现溶血现象，强烈提示为红细胞抗原抗体阳 性反应，也不能排除其他原因所致溶血，对此标本一定要认真分 析，并向上级主管技术人员报告并讨论。 9. 判读结果后一定要仔细核对，做好标记和记录，避免笔误。 10.出现正反定型不符时，要重新核对，并严格按照操作规程重做一 遍该实验。如果受检者是婴儿或者肿瘤患者，理论上应该检测到 的抗体没有检测到，可以忽略不计，以检测到的抗原定型。如果 受检者不是婴儿或肿瘤患者，则可将加样完成的微胶凝柱卡置于 4或 37环境 15 分钟，再离心观察结果。 十一、 方法学评价 1. 玻片法定型简单，不需要离心设备，适用于大规模血型普查。该 法仅靠抗体的力量凝聚红细胞，无离心力加速反应，不适用于交 叉合血。 2. 凝胶微柱卡定型，使用安全，操作简单，结果稳定可靠，灵敏度 高，重复性好，但费用昂贵，需要特殊离心设备。 十二、 参考文献 1. 李勇，杨贵贞.1999.人