stathmin基因表达与

Stathmin基因在期非小细胞肺癌中表达的意义 王小红 1 江洪 2, 周星明 3 , 张谷 4, 苏丹 5 1浙江省胸部肿瘤(肺、食管)诊治技术研究重点实验室、浙江省肿瘤医院化疗科 2杭州市第一人民医院胸外科 3 浙江省肿瘤医院胸外科 4浙江省肿瘤医院病理科 5浙江省胸部肿瘤(肺、食管)诊治技术研究重点实验室 浙江 杭州 310022 通讯作者：江洪 男 硕士 副主任医师 杭州市第一人民医院胸外科 浙江 省杭州市浣纱路261号 电话：电子邮箱： 基金项目 浙江省教育厅资助课题2007-01345 【摘要】目的：探讨期非小细胞肺癌(NSCLC)中Stathmin mRNA和蛋白表达与患者预后的 关系。方法：单基因定量法检测已手术期NSCLC患者肿瘤组织中Stathmin mRNA表达，免 疫组化法检测患者肿瘤组织中Stathmin蛋白表达水平,所有患者行NP方案化疗，统计学分析 其表达水平与患者临床病理学特征之间的关系，并随访患者的无瘤生存时间（DFS）和总体 生存时间（OS） ，统计学分析StathminmRNA和蛋白表达水平与患者的DFS、OS的关系。结果： Stathmin mRNA表达水平与患者的T分期、N分期显著相关，而与患者的年龄，病理类型均 无显著相关性、Stathmin 蛋白表达水平与患者的年龄、病理类型、T分期、N分期均无显 著相关性，Stathmin mRNA和蛋白表达水平与患者的OS，DFS均无显著相关性。结论：期 NSCLC患者肿瘤组织中Stathmin表达水平不能作为预测患者预后指标。 【关键词】 肺肿瘤；Stathmin； 一、资料和方法： 1.临床标本及资料收集：所有标本均从本院标本库中筛选（所有入标本库患者均签定知情 同意书，医院伦理委员会讨论通过） 。术后病理按照2006年国际抗癌联盟（UICC）TNM分期 标准进行分期，共筛选2007年9月-2010年6月经根治性手术切除的II期NSCLC患者73例。患 者的临床特征如下：男性58例、女性15例；年龄60岁55例、60岁18例；肿瘤大小3厘 米22例、3厘米51例；无淋巴结转移28例、有淋巴结转移45例；高-中分化53例、低分化20 例；腺癌33例、鳞癌36例、其他病理类型4例。 2.辅助化疗：患者术后转至化疗科室进行长春瑞滨联合顺铂化疗，顺铂75mg/m 2分三天给予， 长春瑞滨 25mg/m2 第1、8天，以上方案每3周重复。其中1例患者因骨转移只进行2周期化 疗，有4例患者第1周期在本院进行，余3个周期化疗当地进行，其余患者均在本院完成4个 周期的化疗。 3、随访资料（DFS和3年生存率）的收集：均通过电话随访，由指定医生完成，每3个月1次。 共随访70例，失访3例，随访率为95.89%，失访病例按截尾值处理。 4. mRNA的检测：用单基因定量（Quanti-Gene Assay）方法分别进行，由基因科技（上海） 有限公司完成。步骤如下：先将3-5片的石蜡切片样本直接用200L裂解液裂解完全消化后， 室温12000r/min，离心半径9cm，离心取上清液，与反应系统的各试剂包括微珠和探针等混 合，在54摄氏度600r/min的条件下过夜混合杂交，杂交后利用磁力洗去未杂交到微珠上的 杂质。接着对捕捉到的RNA信号利用bDNA技术做级联放大，通过预放大，放大，标记探针在 50600r/min的条件下分别作1h杂交，每一步杂交后都需要用洗涤液洗3次。最后做SAPE标 记后利用Luminex 200读取基因表达数据。检测过程按文献4 Eastham LL, Mills CN, Niles RM. PPARalpha/gamma expression and activity in mouseand human melanocytes and melanoma cellsJ. Pharm Res, 2008, 25(6):1327-1333. 的方法进行。检测Stathmin mRNA的寡核苷酸探针QuantiGene 2.0工具由Panomics公司设计 并合成。HPRT1基因作为质量控制基因,每个样本均检测待检基因和HPRT1基因拷贝数。 5、 Stathmin的蛋白水平检测：采用免疫组化方法，由本院病理科完成，免疫组化试剂购 自福州迈新公司。Stathmin，蛋白主要表达在细胞质中,阳性呈棕黄色，以内皮细胞为阳性 对照。结果判断采用半定量法，即结合阳性细胞的染色强度和百分比来判定表达状态。染 色强度：无色0分；浅黄色1分；棕黄色2分；棕褐色3分。着色细胞比例着色细胞比例：无 着色0分；5%为1分；6%30%为2分；31%60%为3分；61%为4分。两者相加得分为判定 级别：2分为阴性，2分为阳性。 6.统计分析：采用COX模型进行单因素分析，Kaplan-Meier法绘制生存曲线，并经Log-rank 检验，SPSS17.0软件完成。 二、结果 1、癌组织中Stathmin mRNA的表达：均值0.916739，中位值0.6318，极小值 0.335，极大值5.0746，方差0.975。 2、癌组织中Stathmin蛋白表达：在73例病例中，Sthatmin阴性45例，阳性28例，阳性率为 38.4%。 （见照片1、2） 3、Stathmin 表达水平与患者临床病理学特征之间的关系： Stathmin mRNA表达水平与患 者的T分期、N分期显著相关，而与患者的年龄，病理类型均无显著相关性、Stathmin 蛋 白表达水平与患者的年龄、病理类型、T分期、N分期均无显著相关性（见表1） 。 表1 Stathmin 表达水平与患者临床病理学特征之间的关系 Sthatmin蛋白表达 Stathmin mRNA的表 达 临床病理 特征 例数 阴性 阳性 X2 P 阴性 阳性 X2 P 肿瘤大小 3cm 50 33（66.0 ） 17（34.0） 1.274 0.259 22 28 1.793 5 年龄 60y 18 12（66.7 ） 6（33.3） 0.255 0.614 8 10 0.226 7 病理 鳞癌 36 20（55.6 ） 16（44.4） 16 20 腺癌 32 21（65.6 ） 11（34.4） 17 15 其他 5 4（80.0） 1（20.0） 1.491 0.474 3 2 0.755 87 T分期 1 12 6（50.0） 6（50.0） 4 8 2 55 34（61.8 ） 21（38.2） 1.883 0.390 31 24 4.878 10 3 6 5（83.3） 1（16.7） 1 5 N 分期 0 15 10（76.9 ） 5（23.1） 4 11 1 58 35（58.3 ） 25（41.7） 1.562 0.211 32 26 3.874 30 4、在 70例病例中，19 例在随访期间死亡，3 年生存率为为 75.1%，5 年生存率为 56.6%。 中位生存时间 68个月（95%CI：45.21-90.79 个月） ，见图 1。 图 1:70 例患者的生存曲线图 5、Stathmin mRNA低表达患者OS，DFS与高表达患者相比，均无显著性差异 （见图2、3） 。 图 2不同 Stathmin 表达患者的 DFS曲线图（X2=0.227,P=0.633） 图 3不同 Stathmin表达患者的 OS曲线图（ X2=1.907,P=0.167） 6、Sthatmin 蛋白表达水平与患者预后的关系：Sthatmin 阴性者 44例，阳性者 26例，两 组患者的 OS，DF