口蹄疫病毒A型抗体快速检测方法 镧系荧光免疫层析法

1ICS11.220B 41DB21辽宁省地方标准DB XX/ XXXXXXXXX代替DB 口蹄疫病毒A型抗体快速检测方法 镧系荧光免疫层析法The Rapid Detection Methods for Antibodies to Foot and Mouth Disease Virus Type A Lanthanide Fluorescence Immunochromatographic Assay点击此处添加与国际标准一致性程度的标识（本稿完成日期：2018年8月）XXXX - XX - XX发布XXXX - XX - XX实施辽宁省质量技术监督局发布4DBXX/ XXXXXXXXX目次前言II1范围12规范性引用文件13原理14仪器与试剂14.1仪器14.2试剂15样品采集与处理25.1样品的采集25.2样品的处理25.3样品的贮存26检测方法26.1样品稀释26.2加样26.3检测26.4有效性判定27结果判定2附录A（规范性附录）样品稀释液的配置4前言本标准按照GB/T 1.1给出的规则起草。本标准由辽宁省畜牧兽医局提出。本标准由辽宁省畜牧兽医局归口。本标准起草单位：辽宁省动物医学研究院、辽宁省动物疫病预防控制中心。本标准主要起草人：周晨阳、申贯男、杨本勇、杨洺扬、梁乔、李蓉、张健、孙世宇。 口蹄疫病毒A型抗体快速检测方法 镧系荧光免疫层析法1 范围本标准规定了以镧系荧光免疫层析法检测牛、羊、猪血清中的口蹄疫病毒A型抗体的检测方法。本标准适用于牛、羊、猪血清中口蹄疫病毒A型抗体水平的快速检测。2 规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法NY/T 541 兽医诊断样品采集、保存与运输技术规范3 原理采用免疫夹心法和镧系荧光免疫层析法相结合技术，检测动物血清样本中的口蹄疫病毒A型抗体。将镧系纳米荧光微球作荧光示踪物标记口蹄疫病毒A型重组抗原，血清样本抗体与镧系纳米荧光微球标记的口蹄疫病毒A型重组抗原接触形成复合物后，继续与硝酸纤维素膜上检测线包被的口蹄疫病毒A型重组抗原发生反应，形成抗原-抗体-荧光微球标记抗原免疫复合物，最后用荧光检测仪读取检测卡上的荧光信号。4 仪器与试剂4.1 仪器4.1.1 镧系荧光检测仪：激发波长为400 nm20 nm，检测波长为615 nm10 nm。4.1.2 单道可调移液器：10 L 100 L，0.5 L 10 L。4.1.3 分析天平：感量0.0001 g。4.1.4 离心机。4.1.5 冰箱：2 8 ，-20 。4.2 试剂4.2.1 样品稀释液：见附录A。4.2.2 口蹄疫病毒A型抗体荧光免疫试剂卡：镧系荧光微球标记的口蹄疫病毒A型重组抗原和鸡IgY埋置在标记物垫内；硝酸纤维膜上的测试线（T）和参考线（C）分别包被口蹄疫病毒A型重组抗原和羊抗鸡IgY的IgG。（见图1） 图1 口蹄疫病毒A型抗体镧系荧光免疫层析卡示意图5 样品采集与处理5.1 样品的采集应按照NY/T 541中的规定进行，并做好安全防护。按常规方法用干燥、洁净的离心管或适当容器采集3 mL5 mL血液。5.2 样品的处理血液样本用离心机3000 r/min离心3 min，分离血清，血清量不少于500 L。5.3 样品的贮存血清样本在2 8 冷藏可保存24 h，如需长期保存应置-20 或-80 。6 检测方法6.1 样品稀释将待检血清样本用样品稀释液进行50倍稀释。6.2 加样将镧系荧光免疫层析卡置于干净平坦的台面上，用移液器吸取已稀释好的待检样本垂直滴加80 L于加样孔内。6.3 检测避光层析15 min20 min，30 min内用镧系荧光检测仪检测，读取效价。6.4 有效性判定控制线（C线）检测到荧光信号，实验结果有效。7 结果判定效价128时，判为阳性；效价64时，判为阴性；效价在64128之间时，判为可疑。_AA附录A （规范性附录）样品稀释液的配置A.1 称取 Na2HPO412H2O 4.02 gA.2 称取 NaH2PO42H2O 0.66 g A.3 称取 NAN3 1.5 g A.4 称取硫酸葡聚糖（MW:40000） 1.5 gA.5 量取Tween-201 L 3.75 mL A.6 800 mL双蒸水放入1 L烧杯。A.7 A.1、A.2、