医院感染监控中常用的检测方法

医院感染监控中常用的检测方法 采样及检查原则： 采样后必须尽快对标本进行相应指标的检测，送检 时间不得超过 6 h；若标本 4 保存时，送检时间可延长，但不得超过 24 h。 1医务人员手的微生物学监测 （1）采样时间： 在接触患者或从事医疗活动前进行采样。 （2）采样面积及方法： 被检人五指并拢，将浸有无菌 9g/L 氯化钠溶 液的棉拭子一支在双手曲面从指根到指端来回涂擦各两次（一只手涂 擦面积约 30cm2） ，并随之转动采样棉拭子，剪去手接触部位，将棉拭 子放入装有 10ml 采样液的试管内送检。采样面积按平方厘米 cm2) 计 算。 （3）细菌菌落总数检查： 1ml 采样液放入灭菌平皿内，用普通营养 琼脂作倾注培养，放 35温箱内培养 2448 h 计数菌落。 手细菌菌落总数（cfu/ cm2）= 平板上菌落数采样液稀释倍数 302 （4） 判断标准： 见表 6-3-1。 2物体表面的微生物学监测 （1）采样时间：消毒处理后 4 h 内采样。 （2）采样面积： 被采表面30 m2，设东、西、南、 北、中 5 点，其中东、西、南、北点均距墙 1m。 （4） 采样方法： 用 90mm 直径普通营养琼脂平板在采样点暴露 530 min 后送检培养。 （5）细菌菌落总数检查：将平板置 37温箱内培养 24 h 计数菌落。 空气细菌菌落总数（cfu/ m3 ）= 50000NAT 式中：A平板面积 （cm2 ） T平板暴露时间 （min ） N平均菌落数 （cfu/平板） （6） 判断标准：见表 6-3-1。 4使用中消毒剂和无菌器械保存液的微生物学监测 （1） 采样时间： 采取更换前使用中的消毒剂与无菌器械保存液。 （2 ） 采样量及方法： 在无菌条件下，用无菌吸管吸取 1ml 被检样 液，加入到 9ml 稀释液中混匀。醇类和酚类消毒剂用普通营养肉汤作 稀释液。含氯消毒剂、含碘消毒剂、过氧化物消毒液需在肉汤内加入 0.1%硫代硫酸钠作稀释液。季铵盐类消毒液需在肉汤中加入 3% Tween 80 和 0.3卵磷脂作稀释液。含有表面活性剂的各种复方消毒剂需在肉 汤中加入 3Tween 80 作稀释液。常用消毒剂的中和剂见表 6-3-2。 (3) 细菌菌落总数检查：分别取 1ml 采样液放入 2 只灭菌平皿内，用 普通营养琼脂作倾注培养，将其中一只平板置 20培养 7d,观察真菌生 长情况；另一平板放 37温箱内培养 72 h 计数菌落。 平板上有菌生 长，证明被检样液有残存活菌，若每个平板菌落数在 10 个以下，仍可 用于消毒处理（但不能用于灭菌） ；若每个平板菌落数超过 10 个，说 明每毫升被检样液含菌量已超过 100 个，不宜再用。 （4）判断标准：使用中消毒剂，细菌菌落总数100 cfu/ ml，病原 微生物不得检出；无菌器械保存液必须无菌。 5医疗用品的微生物学监测 （1）采样时间：在消毒或灭菌处理后，存放有效期内采样。 （2）采样量及采样方法：可用破坏性方法取样的医疗用品，如输液 （血）器、注射器和注射针等均参照中华人民共和国药典2000 年 版二部附录中“无菌检查法”规定执行。对不能用破坏性方法取样的 特殊医疗用品，可用浸有无菌 9g/L 氯化钠溶液的棉拭子在被检物体表 面涂抹采样，被采表面100 cm2，取全部表面；被采表面100 cm2， 取 100 cm2。 （3）无菌检查：参照中华人民共和国药典2000 年版二部附录中 “无菌检查法” 。 （4）细菌菌落总数检查：1ml 采样液放入灭菌平皿内，用普通营养琼 脂作倾注培养，放 37温箱内培养 2448 h 计数菌落。 物体表面细菌菌落总数（cfu/ cm2）= 平板上菌落数采样液稀释倍数 采样面积（cm2） （5）判断标准：进入人体无菌组织、器官或接触破损皮肤、粘膜的医 疗用品必须无菌。接触粘膜的医疗用品细菌菌落总数20 cfu/g 或 100 cm2, 不得检出病原微生物。 6血液和腹膜透析所用的水及透析液的微生物学监测 （1）采样点：透析用水出口（ 自来水经过过滤、软化、活性炭吸附、 去离子逆渗透等步骤处理后的出口） 、透析液出口 （即透析结束时透 析液离开透析器的出口） 。如疑有透析液污染或严重感染病例，应增加 采样点，如原水口、透析液配比机、反渗水出口、贮水罐出口、透析 液进口等。 （2）细菌菌落总数检查： 取透析用水或透析液 1ml 放入灭菌平皿内， 用普通营养琼脂作倾注培养，放 37温箱内培养 2448 h 计数菌落。 细菌菌落数（cfu/ ml）= 平板上菌落数采样液稀释倍数所取液体 的容积（ml） （3）判断标准：透析用水的细菌落菌总数100cfu/ml；透析结束时， 透析液细菌落菌总数2000cfu/ml，并且无致热原物质存在。 表 6-3-1 各类环境空气、物体表面、医护人员手细菌菌落总数卫生标 准 环境类别 范 围 细菌菌落总数（ cfu/ cm 2 ）空气 物体表面 医护人员手 类 层流洁净手术室、层流洁净病房 10 5 5 类 普通手术室、产房、婴儿室、 早产儿室、普通保护性隔离室、 200 5