飞扬肠胃炎胶囊体外抑菌作用研究

-精选财经经济类资料- -最新财经经济资料-感谢阅读- 1 飞扬肠胃炎胶囊体外抑菌作用研究 摘要 目的 探讨飞扬肠胃炎胶 囊的体外抑菌效果。 方法 采用试管二 倍稀释法联合琼脂平板法，以头孢曲松 钠为阳性对照药，测定飞扬肠胃炎胶囊 对大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、粪肠 球菌、铜绿假单胞菌、-溶血性链球菌、 白色念珠菌的最低抑菌浓度（MIC）和 最低杀菌浓度（MBC） 。 结果 飞扬肠 胃炎胶囊对大肠埃希菌（MIC 为 6.25 mg/mL） 、金黄色葡萄球菌（MIC 为 1.56 mg/mL） 、粪肠球菌（ MIC 为 25.00 mg/mL） 、铜绿假单胞菌（MIC 为 6.25 mg/mL） 、- 溶血性链球菌（MIC 为 12.50 mg/mL）的体外抑菌作用较强， 对白色念珠菌（MIC 为 100.00 -精选财经经济类资料- -最新财经经济资料-感谢阅读- 2 mg/mL）的体外抑菌作用较弱。 结论 飞扬肠胃炎胶囊对大肠埃希菌、金黄色 葡萄球菌、粪肠球菌、铜绿假单胞菌、 -溶血性链球菌具有较强的体外抑菌作 用。 中国论文网 /6/view-12954843.htm 关键词 飞扬肠胃炎胶囊；试管 二倍稀释法；最小抑菌浓度；抑菌作用 中图分类号 R285.5 文献标识 码 A 文章编号 1673-7210（2017） 10（a）-0021-04 Abstract Objective To investigate the antimicrobial activity in vitro of Feiyang Changweiyan Capsules. Methods The tube double dilution method and agar plate method were used to determine the minimum inhibitory concentrations （MIC） and minimum bactericidal concentrations （MBC） of Feiyang Changweiyan Capsules against Escherichia coil， Staphylococcus aureus， Enterococcus faecalis， -精选财经经济类资料- -最新财经经济资料-感谢阅读- 3 Pseudomonas aeruginosa， -hemolytic streptococcus and Candida albicans， taking Ceftriaxone as positive control drug. Results The antibacterial activity of Feiyang Changweiyan Capsules against Escherichia coil （MIC was 6.25 mg/mL） ， Staphylococcus aureus （MIC was 1.56 mg/mL） ， Enterococcus faecalis （MIC was 25.00 mg/mL） ， Pseudomonas aeruginosa （ MIC was 6.25 mg/mL） and -hemolytic streptococcus （MIC was 12.50 mg/mL） was stronger， which of Candida albicans （MIC was 100.00 mg/mL） was weaker. Conclusion Feiyang Changweiyan Capsules have stronger antimicrobial activity in vitro for Escherichia coil， Staphylococcus aureus， Enterococcus faecalis， Pseudomonas aeruginosa and -hemolytic streptococcus. Key words Feiyang Changweiyan Capsules； Tube double dilution -精选财经经济类资料- -最新财经经济资料-感谢阅读- 4 method； Minimum inhibitory concentrations； Antimicrobial activity w 扬肠胃炎胶囊由飞扬草、火 炭母、救必应三味中药组成，具有泻火 解毒、除湿止痢的功效，临床上用于细 菌性痢疾和急、慢性肠胃炎的治疗，疗 效显著，副作用小1。飞扬草为大戟科 大戟属植物飞扬草（Euphorbia hirta L.）的干燥全草，主要分布于我国南方、 日本、印度和亚热带地区2。据报道， 飞扬草在印度常用于女性疾病和儿童寄 生虫感染的治疗，此外，对呼吸系统疾 病、鼻炎、支气管炎等有良好的作用3。 现代研究表明4-6，飞扬草乙醇提取物 对大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、铜绿 假单胞菌的生长有抑制作用，正己烷提 取物对小鼠醋酸丙酯引起的炎症有治疗 作用。火炭母是蓼科植物火炭母 （Polygonum chinense L.）的药用全草， 临床上主要用于湿热泄泻、痢疾、湿热 疮疹、霉菌性阴道炎等疾病的治疗7-8， 火炭母的茎和叶提取物对细菌有抑制作 -精选财经经济类资料- -最新财经经济资料-感谢阅读- 5 用9。救必应为冬青科植物铁冬青 （Ilex rotunda Thunb.）的干燥树皮，常 用于乳娥、腹泻、痢疾的治疗10。研 究表明，救必应的乙醇提部位和蒸馏水 提取部位均有较强的抑菌作用11。虽 然关于飞扬草、火炭母、救必应三个单 味药的抗菌抗炎作用以及其他药理研究 较多，但对此三味药组方而成的飞扬肠 胃炎胶囊的抗菌抗炎作用研究较少，所 以本研究选取 6 种常见致病菌，测定飞 扬肠胃炎胶囊的体外抑菌作用，为探讨 该药作用机制及进一步扩大适应证奠定 基础。 1 材料与方法 1.1 菌株 大肠埃希菌（ATCC25922） 、金 黄色葡萄球菌（ATCC 29213） 、粪肠球 菌（ATCC29212） 、铜绿假单胞菌 （ATCC 27853） 、-溶血性链球菌（临 床菌株） 、白色念珠菌（ATCC 90028） 均由第四军医大学第一附属医院微生物 检验科提供。 -精选财经经济类资料- -最新财经经济资料-感谢阅读- 6 1.2 药物 飞扬肠胃炎胶囊（陕西君碧莎制 药有限公司，批准文号：国药准字 Z20080523） ；注射用头孢曲松钠（上海 罗氏制药，批号：SH6101） 。 1.3 培养基 营养肉汤培养基干粉（英国 OXOID 公司，批号：201603291） ；血 琼脂培养基（英国 OXOID 公司，批号 20160114B） 。 1.4 仪器与设备 MLS-3750 高压蒸汽灭菌锅（日 本三洋） ，Centrifuge 5418R 小型冷冻高 速离心机（德国艾本德公司） ，BSC- 1360B2 生物安全柜（HDL 公司） ，微 量加样器（吉尔森公司） ，BSA224S 赛 多利斯分析天平（德国赛多利斯公司） ， HF212UV CO2 培养箱（上海力康） ，麦 氏比浊仪（法国梅里埃） 。 1.5 供试品药液的配制 称取 10 g 飞扬肠胃炎胶囊内容物， -精选财经经济类资料- -最新财经经济资料-感谢阅读- 7 加适量蒸馏水（16 倍）回流提取 90 min，抽虑，滤液蒸干得样品 1。称取 10 g 飞扬肠胃炎胶囊内容物，加适量 75%乙 醇（16 倍）回流提取 90 min，抽虑， 滤液蒸干得样品 2。 分别称取 3.0 g 样品 1 和样品 2， 加入 15 mL 无菌生理盐水，待完全溶解 后，12 000 r/min，r = 7.7 cm，离心 10 min，吸取上清液过 0.22 m无菌滤膜， 即得浓度为 200 mg/mL 的样品 1 和样品 2 原药液。 精密称取对照药 2.56 mg 注射用 头孢曲松钠干粉，加 10 mL 无菌生理盐 水溶解，即得浓度为 256 mg/L 的原药 液。 1.6 菌液的制备 用无菌接种环将冻存的大肠埃希 菌、金黄色葡萄球菌、粪肠球菌、铜绿 假单胞菌、-溶血性链球菌、白色念珠 菌以三段划线法接种于无菌血琼脂培养 基上，经 35恒温培养 24 h 后，采用 麦氏比浊法，用生理盐水校正各菌液浓 -精选财经经济类资料- -最新财经经济资料-感谢阅读- 8 度至 0.5 麦氏比浊标准（即 1.5108 CFU/mL）待用。 1.7 最低抑菌浓度（ MIC）和最 低杀菌浓度（MBC）的测定 按照美国临床和实验室标准协会 （CLSI ）2007 标准，采用试管二倍稀 释法测定药物 MIC12-13。每个菌种的 抑菌实验取灭菌试管 2 排，每排 11 管， 每管加入 1 mL 灭菌营养肉汤，分别在 第 1 管中加入 1 mL 样品 1 原液和样品 2 原液，混匀，然后吸取 1 mL 至第 2 管，混匀后再吸取 1 mL 至第 3 管，连 续倍比稀释至第 9 管，到第 9 管时弃去 1 mL，此时各管药物浓度依次为 100、50、25、12.5、6.25、3.125、1.56 25、0.781 25、0.390 625 mg/mL，此外， 在 -溶血性链球菌的两排试管中分别加 入无菌脱纤羊血 100 L。然后每管中分 别加入调整好的各菌株稀释液 10 L， 使每管最终菌液浓度为 105 CFU/mL。 因真菌比细菌大，故真菌最终浓度约为 104 CFU/mL。第 10 管为无菌阴性对照， -精选财经经济类资料- -最新财经经济资料-感谢阅读- 9 第 11 管为无药阳性对照。同样取 12 只 灭菌试管排成一排，每管加入 1 mL 灭 菌营养肉汤，在第 1 管中加入对照品原 液 1 mL 混匀，其余操作同上，各管药 物浓度依次为 128、64、32、16、8、4、2、1、0.5、0.2 5 mg/L，第 11 管为无菌阴性对照，第 12 管为无药阳性对照。样品 1、样品 2 和阳性药物 MIC 测定分别重复 3 次， 以 3 次数值相同为最终结果。 因中药本身颜色较深以及人的视 觉差异，需采用琼脂平板法转板来确定 其 MBC 值，以提高对药物抑菌作用判 定的准确性。在判定完药物对应菌的 MIC 值后，从 MIC 值所对应药物浓度 及以上的试管中分别用无菌接种环取 10 L培养物，采用平板划线法将培养物 接种于血琼脂培养基上，置 35恒温培 养箱培养，24 h 后观察平板上是否有菌 落生长，以不生长菌落的最高药物稀释 浓度为飞扬肠胃炎胶囊对该菌的 MBC。 -精选财经经济类资料- -最新财经经济资料-感谢阅读- 10 2 结果 2.1 飞扬肠胃炎胶囊不同溶剂提 取物及注射用头孢曲松钠对 6 种菌的效 力 阴性对照组中无菌的液体培养基 和平板均无菌生长，阳性对照组试管有 菌生长，出现浑浊，同时划平板培养的 菌落生长良好，且本研究所测得的注射 用头孢曲松钠值与 CLSI 的参考值以及 文献报道注射用头孢曲松钠 MIC 值14 进行对比，可知，本研究结果有效。见 表 1。 2.2 飞扬肠胃炎胶囊对 6 种常见 菌的 MIC 飞扬肠胃炎胶囊水提取物对大肠 埃希菌和 -溶血性链球菌的抑菌作用更 好，飞扬肠胃炎胶囊醇提取物对大肠埃 希菌和 -溶血性链球菌的抑制作用比水 提取物稍弱，飞扬肠胃炎胶囊水提物和 醇提物对金黄色葡萄球菌、粪肠球菌、 铜绿假单胞菌、白色念珠菌的抑菌效力 相当。见表 2。 -精选财经经济类资料- -最新财经经济资料-感谢阅读- 11 2.3 飞扬肠胃炎胶囊对 6 种常见 菌的 MBC 飞扬肠胃炎胶囊水提物对大肠埃 希菌、金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、 -溶血性链球菌的抑菌作用相当，飞扬 肠胃炎胶囊醇提物对大肠埃希菌的杀菌 作用稍弱于水提物。对比飞扬肠胃炎胶 囊不同提取物的 MIC 值和 MBC 值可知， MBC 值比 MIC 值浓度高 24 个梯度。 见表 3。 综合分析以上结果，飞扬肠胃炎 胶囊对大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、 铜绿假单胞菌、-溶血性链球菌及粪肠 球菌有较强的抑菌作用，对白色念珠菌 的抑菌作用较弱。 3 讨论 飞扬肠胃炎胶囊由飞扬草、火炭 母、救必应三味中药组方而成，其中君 药飞扬草可清热解毒利湿，祛除肠道湿 热邪气，臣药火炭母可增强飞扬草的解 毒利湿功效，佐使药辅助飞扬草和火炭 母利湿解毒之功，止痛功效可改善腹痛 -精选财经经济类资料- -最新财经经济资料-感谢阅读- 12 症状。 人体作为一个生命整体，其局部 微生态是人生命环境的一部分，微生物 群之间是有联系的，有学者认为人体的 肠道和阴道的微生态平衡存在着相互调 节的作用14 。妇科炎症和肠胃炎的发 生与阴道微生物群和肠道微生物群的紊 乱有关15-18 ，飞扬肠胃炎胶囊又有应 用于女性疾病治疗的历史，结合飞扬肠 胃炎胶囊组方中三味药物良好的抑菌作 用，本研究选择了引起妇科炎症的 6 种 常见致病菌，进行飞扬肠胃炎胶囊的体 外抑菌实验研究，通过体外抑菌实验初 步确定w 扬肠胃炎胶囊对妇科炎症常 见菌的作用。实验结果表明，飞扬肠胃 炎胶囊对大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、 铜绿假单胞菌、-溶血性链球菌及粪肠 球菌抑制作用较强，对白色念珠菌抑制 作用较弱。根据体外研究