高效液相色谱法测定阿莫西林颗粒中的高分子杂质

-精选财经经济类资料- -最新财经经济资料-感谢阅读- 1 高效液相色谱法测定阿莫西林颗粒 中的高分子杂质 摘 要：目的：采用高效液相色 谱法去测定阿莫西林颗粒中高分子杂质 的方法。方法：在测定的过程中采用的 是高效液相色谱的方法。色谱柱是当前 比较常见的凝胶柱，流动相 A 是浓度为 0.1mol/L，PH 值为 7.0 的磷酸盐缓冲液。 流动相 B 为水，流动相的流速为 0.6- 0.9ml/min，在测定中检测的波长为 254nm。结果：阿莫西林颗粒中的杂质 含量在 0.1%以内。结论：高效液相色 谱法在测定阿莫西林中杂质含量使具有 灵活性高，准确性强和操作简便等多项 优势，这种方法也值得大力的推广和应 用。 -精选财经经济类资料- -最新财经经济资料-感谢阅读- 2 中国论文网 /8/view-12772199.htm 关键词：高效液相色谱法；阿莫 西林颗粒；高分子杂质 阿莫西林是一种半合成广谱青霉 素，这种药物本身的酸性非常强，同时 抗菌效果非常好，在临床上有着非常好 的应用效果，所以也得到了广泛应用， 和其他类型的抗生素相同，在阿莫西林 应用的过程中，过敏反应是非常关键的 一个问题，在研究中发现出现过敏反应 是阿莫西林制剂当中含有非常多的杂质， 所以要想减少过敏反应的影响，就一定 要对产品当中的高分子杂质进行有效的 控制，本文主要采用高效液相色谱法对 杂质进行测定。 1 仪器与试药 仪器：WatersHlLC 仪（美国 Waters） ，1525 泵，2487UV 检测器，色 谱工作站（WatersBreeze） 。 试药：阿莫西林对照品（中国药 品生物制品检定所，含量为 86.20l0） ； 水为重蒸馏水；阿莫西林颗粒（商品名 -精选财经经济类资料- -最新财经经济资料-感谢阅读- 3 为再林，批号为 031202、031203、031204，海南先声药 业有限公司） ；蓝色葡聚糖 2000（Pharmacia 公司）：其他试剂均 为分析纯。 2 方法与结果 2.1 色谱条件 色谱柱：SephadexG-10 凝胶柱 （不锈钢色谱柱，300mmx10mm） ，内 填 SephadexG-10 凝胶，安玛西亚生物 技术（上海）有限公司提供。流动相： 以 pH 值为 7.0 的 0.1mol/L 的磷酸盐缓 冲液（取 21.85g，一二水磷酸氢二钠与 6.08g 二水磷酸二氢钠溶于水中制成 1000mL，用氢氧化钠或磷酸调溶液的 pH 值至（7.00.1）为流动相 A；以重 蒸馏水为流动相 B。在下述条件下进行 测定：检测波长为 254nm；流速为 0.6- 0.9mL/min；进样量为 20L。 2.2 系统适应性试验 在试验的过程中，研究人员采用 蓝色葡聚糖 2000ml 的溶液对色谱柱的 -精选财经经济类资料- -最新财经经济资料-感谢阅读- 4 理论塔板数和拖尾因子进行测定，蓝色 葡聚糖的浓度为 1mg/ml，在试验的过 程中将流动相 A 当做这一步骤采用的流 动相。将流动相的流速控在 0.6- 0.9ml/min，检测的波长一定要控制在 254nm。理论上的塔板数是 1695，拖尾 因子能够为 0.86.试验当中我们精确的称 取适量的林标准品两份，将二者分别放 在容积为 50ml 的容量瓶当中，加入适 量的重蒸馏水，对其进行溶解和稀释， 一直到标准的刻度。两份对照品按照标 准的方法将流动相 B 当成是试验中的流 动相，将一份样品进行三次的连续进样， 峰面积相对的偏差为 0.38%，而将二者 分别进样一针，两份峰面积的相对偏差 达到了 0.26%。 2.3 溶液制备 对照品溶液制备：精确称取 20mg 的阿莫西林对照品，将其放置在 容积为 50ml 的容量瓶当中，采用流动 相 B 对其进行溶解和稀释到容量瓶刻度 的位置，将其当做是对照品溶液。 -精选财经经济类资料- -最新财经经济资料-感谢阅读- 5 供试品溶液制备：取本品 4 袋， 将其按照试验的要求研细，同时还要精 确的称取适量的细粉，将其放置在容积 为 50ml 的容量瓶当中，加入 30ml 的流 动相 A，采用超声溶解的方式，将其稀 释到刻度的位置，此外还要以适当的力 度将其摇匀，用滤膜对其进行滤膜处理， 将其当做供试品溶液。 2.4 测定方法 精确吸取供试品溶液 20l，将其 注入到色谱仪当中，将流动相 A 当成流 动相对其进行测定，对色谱图进行记录， 此外还要量取 20l 的对照品溶液，将 其注入到色谱仪当中，将流动相 B 当做 流动相进行测定，同时还要对色谱图进 行全面的记录。其暴露的时间要在蓝色 葡聚糖 2000 和阿莫西林主峰杂质的含 量之间，这一区间内都能将其计为高分 子的杂质，用外标法的方式五对供试品 当中的阿莫西林高分子含量进行计算。 2.5 阿莫西林颗粒中高分子杂质 的测定 -精选财经经济类资料- -最新财经经济资料-感谢阅读- 6 使用上述色谱条件，对 3 批阿莫 西林颗粒的高分子杂质进行了全面的测 定，在测定的过程中采用阿莫西林当做 对照，使用主成分对照的方式去评价当 中的相关物质的含量，供试品当中杂质 的含量都不超过 0.2%，结果如表 1 所 示。蓝色葡聚糖 2000 和样品的色谱图 如图 1 所示： 表 1 样品测定结果 A 对照品溶液 B 蓝色葡聚糖 2000 C 样品 图 1 HPLC 图 3 讨论 在试验的样品当中加入了质量分 数为 10%的碳酸钠溶液，所以阿莫西林 比较容易出现聚合的现象，在采取自然 的方式放置了 3 格小时之后，对其进行 了在一次的测定，发现高分子杂质的含 量增加了接近一倍。因此，样品完全溶 解之后应该采取立即进样的方式，同时 在每次完全溶解之后，样品只能进一针， 在试验的过程中一定要对碳酸钠溶液的 -精选财经经济类资料- -最新财经经济资料-感谢阅读- 7 加入量进行严格的控制，这样就可以使 得超声的时间有所延长，溶解也更为充 分。 在对照品溶液进样的过程中，应 该将水当成流动相，进样品溶液的过程 中应该将磷酸盐缓冲液当成流动相，这 样也就可以充分的保证对照品主峰的保 留时间和样品的高分子杂质保留的时间 具有高度的一致性。 到目前为止，阿莫西林及青霉素 类抗生素的高分子杂质尚无标准品。以 HPLC 分析相关物质，在没有杂质对照 品的情况下， 中国药典采用主成分 对照法评价相关物质的含量，故在参照 相关文献的基础上，木研究采用自身对 照法进行了测定，结果表明本法简便、 易行，能有效地检测到阿莫西林颗粒中 的杂质含量。 随着免疫学和分子生物学技术的 迅速发展，目前对阿莫西林过敏机制有 了较明确的认识。阿莫西林木身没有抗 原性，不直接引发过敏反应，引起过敏 -精选财经经济类资料- -最新财经经济资料-感谢阅读- 8 反应的是制