桑椹抗氧化活性的初步研究

-精选财经经济类资料- -最新财经经济资料-感谢阅读- 1 桑椹抗氧化活性的初步研究 【摘要】 中国论文网 /6/view-12957157.htm 目的：桑椹是既是食用又是药用 的水果之一，具有很高的营养价值，本 文对它所含的抗氧化活性成分进行了研 究。方法：新鲜桑椹的甲醇提取物用乙 酸乙酯萃取后，通过硅胶柱层析、薄层 层析等进行分离，得到的馏分用 DPPH 法测定其抗氧化活性。 结果：经过两 次分离，各得到 12 个和 7 个馏分，大 部分的馏分显示出了很强的抗氧化活性。 结论：日常食用的药食两用水果桑椹 中含有抗氧化活性成分，可以通过日常 饮食的摄入达到抗氧化的目的。 【关键词】桑椹；抗氧化活性； -精选财经经济类资料- -最新财经经济资料-感谢阅读- 2 DPPH 法 Preliminary Study on Antioxidative Activity of Mulberry Wang RongWu Tong 【Abstract】 ObjectiveMulberry is one of both edible and medicinal fruits with high nutrition. The antioxidative components were isolated and analyzed. MethodThe fresh mulberry were extracted with methanol, and after concentration under reduced pressure, the aqueous residue was partitioned with EtOAc to give EtOAc extract. After isolated and purified by a silica gel column and thin layer chromatography, gained fractions were supplied to measure the antioxidative activity by DPPH method. Result12 fractions and 7 fractions were gained after isolated twice. Most of the fractions showed the very strong antioxidative activity. ConclusionThere are -精选财经经济类资料- -最新财经经济资料-感谢阅读- 3 antioxidative components in mulberry, and antioxidation can be achieved by intake of mulberry. 【Key words】 mulberry; antioxidative activity; DPPH method 【中图分类号】R431 【文献标 识码】B 【文章编号】1005-0515(2011) 10-0419-02 桑椹，又名桑果、桑子，味甘、 性寒，具有生津止渴、滋阴补血、补肝 益肾、固精安胎、乌须黑发、聪耳明目、 安神养心、润肠通便、健步履、利关节、 去风湿、解酒等功效，常用于医治糖尿 病、肝肾阴虚、失眠耳鸣、津液不足、 风湿、便秘、须发早白、神经衰弱 1等。现代医学研究发现，桑椹还 具有防癌抗诱变、增强免疫力、驻颜抗 衰老、促进造血细胞生长、降低血糖血 脂2等方面的保健功能。本研究旨 -精选财经经济类资料- -最新财经经济资料-感谢阅读- 4 在通过提取桑椹鲜果中的抗氧化活性物 质，利用 DPPH 法测定各馏分的抗氧化 活性。 1 材料与方法 1.1 材料。 作为实验材料的桑椹为济南近郊 所产的水果，从济南市果品批发市场购 得。 1.2 仪器。 SB-1000 型旋转蒸发仪：上海爱 明仪器有限公司；UV754 紫外可见分光 光度计、FA2004B 型电子天平：上海精 密科学仪器有限公司；SHB循环水 式多用真空水泵：郑州长城科工贸有限 公司；ZF7C 三用紫外分析仪：上海康 华生化仪器制造有限公司。 1.3 试剂。 DPPH(1,1-Diphenyl-2- picrylhydrazyl)：Alfa Aesar 公司；无水 乙醇、硫酸：莱阳市康德化工有限公司； 甲醇、正己烷：天津市广成化学试剂有 限公司；三氯甲烷：天津市北方天医化 -精选财经经济类资料- -最新财经经济资料-感谢阅读- 5 学试剂厂；乙酸乙酯：天津市富宇精细 化工有限公司；正丁醇、冰乙酸：天津 市化学试剂三厂；硅胶：青岛海浪硅胶 干燥剂厂；试剂均为分析纯。 1.4 方法 1.4.1 桑椹活性成分的提取。 将 10 千克新鲜的紫红色桑椹放 入容器中，加入 10 升甲醇溶液，室温 下避光放置两天。用过滤瓶和砂芯漏斗 抽滤后得到桑椹的初提液，暂放在棕色 玻璃瓶中冷藏保存。再次将 10 升甲醇 溶液加入盛有桑椹的容器中，放置一天， 进行第二次提取。将两次的提取液混合， 用旋转蒸发仪进行减压浓缩，得到桑椹 的甲醇粗提水溶液。 将桑椹的甲醇粗提水溶液用乙酸 乙酯萃取，得到 190 克桑椹乙酸乙酯提 取物，将其溶解在 50 毫升的乙酸乙酯 中，放入棕色瓶中在冰箱中保存待用。 1.4.2 玻璃柱层析法分离桑椹活 性成分。 其中一部分的乙酸乙酯提取物 -精选财经经济类资料- -最新财经经济资料-感谢阅读- 6 （2.5g）经过硅胶色谱柱（402cm i.d.） ， 用正己烷-乙酸乙酯- 甲醇溶液按比例洗 提，溶出 12 馏分。50%和 100%甲醇馏 分（0.5g）又进一步经过硅胶色谱柱 （301.5 cm i.d.） ，用三氯甲烷-甲醇溶 液洗提，得到 7 馏分。 1.4.3 薄层层析法（thin layer chromatography，TLC）分离桑椹活性 成分。 将各馏分用毛细管均匀地点在薄 层层析板上，放入展开槽中进行分离。 待分离完毕后，用含 5%硫酸的乙醇溶 液喷雾后加热，并计算分离成分的 Rf 值。 1.4.4 抗氧化活性的测定（DPPH 法） 。 DPPH 是一种人工合成的稳定 自由基，在无水乙醇中呈紫色，于 517nm 处有强吸收。当有自由基清除剂 存在时，DPPH 浓度减小而使其颜色 减退，褪色程度与清除剂的能力及数量 呈一定的关系。因而可用分光光度法进 -精选财经经济类资料- -最新财经经济资料-感谢阅读- 7 行定量测定、分析，从而评价所研究的 物质的抗氧化活性的能力3 。 准确称取 0.0992 克 DPPH，用无 水乙醇定溶于 100 毫升的容量瓶中摇匀， 作为储备液。使用时取 8 毫升 DPPH 储 备液，用无水乙醇定溶于 100 毫升的容 量瓶中摇匀待测。 取提取物和 DPPH 溶液各 2 毫升 加入试管中，摇匀记做 Ai；取提取物和 无水乙醇各 2 毫升加入试管，摇匀记做 Aj； 取 DPPH 溶液和无水乙醇各 2 毫 升加入试管，摇匀记做 Ac。室温下放 置 30 分钟，然后用分光光度计在 517nm 下测定各种溶液的吸光度，并按 下列公式计算清除率。 清除率=1- (Ai-Aj) Ac100% 2 结果与分析 2.1 活性成分的分离: 2.5 克的桑椹乙酸乙酯提取物用 正己烷乙酸乙酯甲醇按下表中的比 例洗脱后得到了 12 个馏分，通过减压 -精选财经经济类资料- -最新财经经济资料-感谢阅读- 8 浓缩后得到了各馏分样品的重量（见表 1） 。 表 1 桑椹乙酸乙酯提取物柱层析 各馏分 馏分号 正己烷（%） 乙酸乙酯（%） 甲醇 样品质量（g） 颜色 1 100 0 无色 2 90 10 0.55 -精选财经经济类资料- -最新财经经济资料-感谢阅读- 9 浅黄 3 80 20 0.12 浅黄 4 70 30 0.18 黄 5 60 40 0.11 黄绿 6 50 50 -精选财经经济类资料- -最新财经经济资料-感谢阅读- 10 0.05 黑绿 7 30 70 0.07 深绿 8 0 100 0.29 黄绿 9 90 10 0.17 浅红 10 -精选财经经济类资料- -最新财经经济资料-感谢阅读- 11 80 20 0.29 红 11 50 50 0.23 深红 12 0 100 0.23 深红 第 11 和 12 号馏分即 50%和 100%甲 醇馏分混合在一起得到 0.5 克的物质， 用 50 毫升的三氯甲烷甲醇按下表中 的比例进行洗脱，并接收各馏分，得到 了 7 个馏分，通过减压浓缩后得到了各 -精选财经经济类资料- -最新财经经济资料-感谢阅读- 12 馏分样品的重量（见表 2） 。 表 2 第 11 号和 12 号馏分混合物 柱层析各馏分 馏分号 三氯甲烷（%） 甲醇（%） 样品质量（g） 颜色 1 100 0 无色 2 95 5 0.08 浅黄 3 90 10 -精选财经经济类资料- -最新财经经济资料-感谢阅读- 13 0.11 墨绿 4 80 20 0.06 深绿 5 50 50 0.16 黄绿 6 30 70 0.17 浅红 7 0 100 0.12 红 -精选财经经济类资料- -最新财经经济资料-感谢阅读- 14 2.2 TLC 的结果:在薄层层析的分 析中，正丁醇：冰乙酸：水=4：1：5 展开剂中第 10 号馏分显示了一个橘黄 色的圆点，Rf=0.83。 2.3 抗氧化活性: 桑椹乙酸乙酯提取物 12 馏分用 DPPH 法检测抗氧化活性，通过计算， 得出各馏分对 DPPH 的清除率（见表 3） 。 表 3 桑椹柱层析各馏分的抗氧化 活性 馏分号 1 2 3 4 5 6 7 8 -精选财经经济类资料- -最新财经经济资料-感谢阅读- 15 9 10 11 12 清除率% 22.8 88.7 96 93 96 95 93.8 90 92 96.7 96.6 第二次柱层析的 7 个馏分也用 DPPH 法检测了抗氧化活性，通过计算， 得出各馏分对 DPPH 的清除率（见表 4） 。 表 4 第二次柱层析各馏分的抗氧 -精选财经经济类资料- -最新财经经济资料-感谢阅读- 16 化活性 馏分号 12 3 4 567 清除率% 25.5 29.993.310096.1 93.8 3 讨论 表 3 中数据显示，除了馏分 2 的 活性很小以外，其他馏分都显示了较强 的抗氧化活性，其中馏分 4、6、7、11、12 的 DPPH 清除率达到 95%以上，说明桑椹中所含有的大多数 物质具有很强的抗氧化活性。薄层层析 的结果表明，馏分 10 只含有一个单一 的物质，可进一步纯化，得到纯品后通 过其他仪器分析确定其成分。表 4 结果 显示，馏分 4、5、6、7 的 DPPH 清除 率达到 90%以上，特别是第 5 个馏分， 显示了 100%的清除率，说明桑椹中含 有强抗氧化的物质。 随着物质文明程度的提高、社会 和科技的不断发展和进步，人们开始追 求食品对健康的促进作用和对机体的生 -精选财经经济类资料- -最新财经经济资料-感谢阅读- 17 理调节功能，进而达到健康和预防疾病 的目的。生物的抗氧化能力与其抗病、 抗逆性及延缓衰老密切相关，因此从天 然植物中寻找有效的抗氧化剂是当前的 研究热点。桑椹的化学成分含有游离氨 基酸、维