中药学论文大黄

大黄对慢性肾功能不全的影响 【摘 要】 目的：观察大黄对慢性肾功能不全大鼠肾功能及肾组织 TGF-1 和 smad7表达的影响。 方法：采用腺嘌呤法建立大鼠慢性肾功能不全模型，治疗组予以大黄（4 g/kg/d）灌胃。 治疗 4 周后，检测各组大鼠的 24 小时尿蛋白定量、肾功能，通过组织学及蛋白印记观察 肾组织 TGF-1 和 smad7 的表达。 结果：治疗组大鼠的 24h 尿蛋白定量、肾功能明显增加（P0.01） ，而治疗组大鼠 24 h 尿蛋白定量、肾功能较非治疗组减少（P0.05） 。非治疗组大鼠肾组织 TGF-1、smad7 表达较正常组明显增加（P0.01） 。 结论：大黄可降低慢性肾功能不全大鼠 24 小时尿蛋白、肾功能水平，抑制肾组织 TGF- 1 和 smad7 表达。大黄对慢性肾功能不全的保护机制可能与降低肾脏 TGF-1 和 smad7 表达有关。 【关键词】 大黄 慢性肾功能不全 腺嘌呤 转化生长因子-1 smad 2 【大黄的基本信息】 1综述 本品为蓼科植物掌叶大黄 Rheum palmatum L.、唐古特大黄 Rheum tanguticum Maxim. ex Balf.或药用大黄 Rheum officinale Baill.的干燥根及根茎。秋末茎叶枯萎或次春发 芽前采挖，除去细根，刮去外皮，切瓣或段，绳穿成串干燥或直接干燥。 2性状 本品呈类圆柱形、圆锥形、卵圆形或不规则块状，长 317cm,直径 310cm。除尽外 皮者表面黄棕色至红棕色，有的可见类白色网状纹理及星点（异型维管束）散在，残留的 外皮棕褐色，多具绳孔及粗皱纹。质坚实，有的中心稍松软，断面淡红棕色或黄棕色，显 颗粒性；根茎髓部宽广，有星点环列或散在；根木部发达，具放射状纹理，成层环明显， 无星点。气清香，味苦而微涩，嚼之粘牙，有砂粒感。 3药效作用 3.1对消化系统的影响 泻下作用：作用表现：一般在服药后 610 小时排出稀便。泻下有效成分：认为主要 是番泻甙类。泻下作用机理：番泻甙在肠道细菌酶的作用下分解产生大黄酸蒽酮，大黄酸 蒽酮可刺激大肠粘膜，使肠蠕动增加而泻下。另外还可抑制肠细胞膜上 Na+、K+ATP 酶， 阻碍 Na+转运，使肠内渗透压升高，保留大量水分，促进肠蠕动而泻下。利胆、保肝。促 进胰液分泌、抑制胰酶活性。抗胃及十二指肠溃疡。 3.2对血液系统的影响 止血作用：特点：作用确切、见效快。止血有效成分：-儿茶素、没食子酸。止血 作用机理：促进血小板的粘附和聚集功能；增加血小板数和纤维蛋白原含大黄量；降低抗 凝血酶活性；使受伤局部的血管收缩。降血脂：降低总胆固醇、甘油三酯、低密度脂蛋 白、极低密度脂蛋白及过氧化脂质。 3.3抗感染作用 抗病原微生物作用：抗菌谱：敏感的细菌有葡萄球菌、溶血性链球菌、淋病球菌、白 喉杆菌、伤寒杆菌、痢疾杆菌等。敏感的病毒有流感病毒、孤儿病毒、乙肝病毒、脊髓灰 质炎病毒等。其他敏感微生物有阿米巴原虫、阴道滴虫、血吸虫及钩端螺旋体等。抗菌有 效成分：大黄酸、大黄素、芦荟大黄素。 抗菌作用机理：影响叶酸的酶系统；抑制细菌 核酸和蛋白质合成；抑制细菌生物氧化酶系统；诱生干扰素。抗炎、解热作用。免疫调节： 蒽醌衍生物可抑制非特异性免疫功能。抗衰老抗氧化作用，国内外越来越多学者证明，大 黄所含鞣质有很好的抗氧化作用。 4用药禁忌 4.1禁忌 凡表证未罢，血虚气弱，脾胃虚寒，无实热、积滞、瘀结，以及胎前、产后，均应慎 服。如用本品泻下通便，煎服时应后下，或用沸开水泡汁，否则药效会减弱。服用大黄后， 3 其色素会从小便或汗腺中排泄，故小便、汗液可以出现黄色。此外，大黄哺乳妇女服用后， 婴儿吮食乳汁，可能引起腹泻，因此授乳妇女不宜服用。由于本品又能活血行瘀，故妇女 胎前产后及月经期间也必须慎用。 4.2不良反应 大黄除可引起胃肠道反应外，曾有报道 2例老年患者因长期服用（2 年）大黄苏打片， 每日 15-21片，引起严重的缺铁性贫血，血红蛋白下降到 5-5.6g，当减少用药量并补充 铁等维生素 C后恢复正常。通过炭末在肠道内转运时间和排泄时间研究以及肠道内水分测 定等证明，大黄作用部位在大肠，是一种大肠性致泻剂，而铁主要在大肠中吸收，认为导 缺致铁的原因可能为，大黄导泻作用干扰了铁的吸收；大黄鞣酸可能与 Fe结合成不溶性 复合物，妨碍了吸收；苏打中和了胃酸；干扰了铁与维生素 C螯合，妨碍了铁的吸收。还 有报道 1例哮喘病人服大黄苏打 4片后，出现皮肤痒疹、红斑，哮喘加重，经斑贴试验证 实为大黄致敏。 【检测】 1材料 湖北产中药材大黄。腺嘌呤。兔抗 TGF-1、Smad7 抗体；En Vision免疫组化试剂 盒；BCA 试剂盒。 2动物分组和模型建立 雄性 SD大鼠 60 只，7 周龄，体重 19020 g。适应性饲养 1 周，随机分为正常组 20 只和腺嘌呤组 40只。腺嘌呤组每日腺嘌呤 300 mg/kg灌胃，6 周后以代谢笼留取 24 小时尿液，眶内静脉采血，测定 24 小时尿蛋白定量、血尿素氮、血肌酐。检测发现全部 造模成功。随机分为 2 组：非治疗组 20 只，治疗组 20 只。治疗组大鼠每日给予黄葵胶 囊2 g/kgd灌胃，同时正常组和非治疗组给予等量生理盐水灌胃。4 周后全部大鼠以 代谢笼留取 24 小时尿液，眶内静脉采血，测定 24 小时尿蛋白定量、血尿素氮及肌酐。 大鼠处死后取部分肾组织置于 10中性甲醛中固定，部分肾组织液氮保存用于蛋白印迹 杂交方法（Western blot）检测蛋白表达。实验期间大鼠自由饮水、进食。 3尿蛋白定量及肾功能测定 肾组织经 10中性甲醛固定，梯度乙醇脱水、二甲苯透明、浸腊、包埋、切片，厚 3 m，行 HE染色，观察肾小球硬化及肾间质纤维化的程度。 4蛋白印记分析 各组取约 100 mg肾组织置于 1 ml裂解缓冲液（含蛋白酶抑制剂 PMSF 100ug/ul，aprotinin 1 ug/ml，leupeptin 1 ug/ml） ，匀浆后冰浴 30 分钟，然后 4 度 12000 g离心 20 分钟。提取蛋白后用 BCA法测量蛋白浓度。取等量蛋白质进行 SDS-聚丙 烯酰胺凝胶电泳，半干法转移至聚氟乙烯膜上，封闭液封闭，加入 1：200 稀释的 TGF- 1 抗体，4 过夜。0.05TBST 洗膜 3 次，ECL 显影。 5统计学处理 4 计量资料采用均数标准差表示，数据用 SPSS 13.0软件包进行统计学处理。各组间 均数比较采用单因素方差分析，P 0.05认为有统计学意义(方差齐时用 LSD法、方差不 齐时用 Tamhane法)。 6检测结果 非治疗组和治疗组大鼠尿蛋白排泄明显高于正常组(P 0.01)；治疗组大鼠尿蛋白定 量与非治疗组比较有所降低(P 0.05)，非治疗组和治疗组大鼠血肌酐明显高于正常组(P 0.01)；治疗组大鼠血肌酐与非治疗组比较有所降低(P 0.05)；尿素氮变化同血肌酐变 化 见表 1 表 1. 各组大鼠尿蛋白定量、血尿素氮、肌酐水平 组别 n 尿蛋白定量(mg/d) 尿素氮(mmol/L) 肌酐（mol/L） 正常组 20 9.242.16 7.261.03 48.269.36 治疗组 20 169.327.69* 18.53.89* 119.15.86* 非治疗组 20 89.117.34* 14.15.34* 80.612.25* *与正常组相比，P0.01，与非治疗组相比，P0.05。 在 HE染色中，非治疗组大鼠可见明显的肾小球增生，系膜增殖，肾小球毛细血管部 分塌陷，球囊粘连，部分肾小球完全硬化，间质有炎细胞浸润，部分肾小管已萎缩，系膜 外基质显著增加。治疗组与非治疗组比较，肾小球损伤、硬化轻，肾间质炎细胞浸润少， 间质纤维化。 慢性肾功能不全是所有肾脏疾病进展的共同结局，其实质是肾脏纤维化，严重威胁人 类健康。目前研究表明，TGF-1 和其受体下游的信号转导因子 Smad7蛋白在促进肾小球 纤维化及肾小管间质纤维化方面起重要作用。 TGF-1 是迄今已知作用最强的一种促肾纤维化的细胞因子，具有调节细胞的增殖、 分泌、迁移和凋亡等多种生物学活性。TGF-1 在肾纤维化中的作用涉及到细胞外基(ECM)、 细胞增殖及转分化、炎症浸润等各个环节，是介导肾小球硬化和肾间质纤维化关键细胞因 子，在肾纤维化过程中 TGF-1 起着关键作。 目前认为，Smad7 主要通过与 TGF-1 型受体结合抑制 TGF-1 信号转导，以往在许 多肾脏疾病如肾小球肾炎、肾病综合征、狼疮性肾炎、糖尿病肾病等的动物模型和人的肾 活检标本的研究中，都提示 TGF1Smad7 信号通路被激活，用抗 TGF-1 的抗体或 Smad7转基因治疗时，慢性肾脏病的肾脏纤维化得到改善，提示 Smad7信号通路在肾脏纤 维化的发生发展中起着重要作用3。 现代实验表明大黄能抑制 TGF1 的过度表达，减缓肾功能恶化速度，而被被广泛 用于治疗慢性肾小球肾炎和慢性肾衰竭4。慢性肾功能不全的实质是肾脏纤维化，而 TGF-1 是促肾纤维化最重要的细胞因子，smad7 蛋白是 TGF-1 受体的胞内激酶底物， 在调节 TGF-1 促肾纤维化过程中起重要作用，本实验结果显示大黄可能通过减少腺嘌呤 致慢性肾功能不全大鼠的 TGF-1 及增加 smad7蛋白表达，来减缓甚至抑制肾小球及肾间 5 质纤维化；降低大鼠 24 小时尿蛋白定量、血尿素氮及血肌酐；减轻慢性肾功能不全大鼠 肾病组织的病理改变，延缓慢性肾功不全进入终末期肾衰竭的时间。 【参考文献 】 1 Wang W, Koka V, Lan HY. Et al. Transforming growth factor-beta and Smad signalling in kidney diseasesJ. Nephmlogy(Carlton),2005,10(1):48-56. 2 Keith H,Jeremiah MOP-l prevents renal fibrogenesis associated with ureteral obstructionJ. Am J Phy Ren Phy. 2000,280(3):130-136. 3 Hirotaka Fukasawa.Tatsuo Yamamoto. Treatment wit