临床检验技术操作手册

检验在线--医学检验专业站 第一节 临床血液学检验 血常规检查 【 标 本 】 抗凝静脉血（有些仪器也可用末梢血） 。 【 方 法 】 血液细胞自动分析仪测定法。 【 试 剂 】 血液细胞自动分析仪配套试剂。 【 操 作 】 详见自己实验室血液细胞自动分析仪使用手册。 【 附 注 】 1. 血常规包括白细胞计数及分类、红细胞计数、血红蛋白浓度、红细胞比积、血小板计数 等项目。这些项目亦有相应的手工方法，详见有关资料。 2. 半自动及全自动血液细胞分析仪从设计上均要求用抗凝静脉血。其优点为： （1）静脉血能正确地反映病人实际情况，重复性好； （2）利于延长仪器的使用寿命； （3）解决了采血盘的交叉感染问题等。 3. 血细胞计数应用 EDTAK2：为抗凝剂（EDTAK 22 H2O 1.52.2mg 可抗凝 1ml 血） 。 4. 贮血容器应选用有盖塑料管。抗凝血采集后在室温中贮存应不超过 6h；如需制作血涂片 应在 2h 内完成。 5. 测定前必须将 EDTAK2 抗凝血充分混匀。 6. 血细胞分析仪测定最适温度为 1822，低于 15或高于 30，均可使细胞体积发生改 变，影响各参数的结果。 7. 血细胞分析仪用于白细胞分类只能当作一种过筛手段，当白细胞、红细胞、血红蛋白和血 小板的任何一项有明显 升高或降低；白细胞分类出现异常结果（中间细胞群百分率8.0%） ；红细胞、白细胞和血小板 的任何一个直方图出现异常图形等情况，须用显微镜检查及分类。 嗜酸性粒细胞直接计数 【 标 本 】 末梢血或抗凝静脉血。 【 方 法 】 直接计数法。 【 试 剂 】 1. Hinkelmann 液； 2. 乙醇- 伊红稀释液； 3. 伊红- 丙酮稀释液。 【 操 作 】 1小试管中加稀释液 0.38ml。 检验在线--医学检验专业站 2常法取末梢血 20ul，加入管内混匀，待红细胞溶解后两侧充池。 3静置 35min ，用低倍镜（必要时用高倍镜）镜下计数 10 个大方格内嗜酸性粒细胞数。 总数2010 6=嗜酸性粒细胞/L。 【 附 注 】 1. 血液稀释后应于 1 h 内计数完毕。 2. 充池前要充分混匀，但又不宜用力过猛。 3. 住院病人采集标本时间力求统一，以免受日间生理变化的影响。 红细胞沉降率测定 【 标 本 】 抗凝静脉血。 【 方 法 】 魏氏法。 【 试 剂 】 109mmol/L 枸橼酸钠溶液。 【 操 作 】 1. 3mm100mm 试管 1 支，在 2ml 容量处刻上记号，加抗凝剂 0.4ml。 2. 静脉采血后，取下针头，加血至刻度，旋转混合。 3. 用血沉管（300mm2.5mm）吸取上述混匀血液至“ 0 “ 刻度处，拭去管外附着的血液， 将管垂直立在血沉架上。 4. 记时，室温中静置 1h，观察血浆高度，以红细胞下沉的毫米数报告之。 【 附 注 】 1. 红细胞在单位时间内下沉的速度与血浆蛋白的量与质，血浆中脂类的量和质，红细胞的 大小与数量，是否成串钱相聚以及血沉管的内径、清洁度、放置位置是否垂直，室温高低等因素 都有关系。 2. 标本采集时应空腹。 3. 血液和抗凝剂的比例要准确。 4. 血沉管内径要标准（2.5mm） ，放置要垂直。 5. 做血沉的标本要在采集后 3h 内测定，并充分混匀。 6. 室温过低、过高和贫血时，对结果有影响。为此，血沉应尽量放在 1825室温下测定。 室温过高时血沉加快，可以按温度系数校正。室温过低时血沉减慢，无法校正。 网织红细胞计数 【 标 本 】 末梢血或抗凝静脉血。 【 方 法 】 百分计数法。 【 试 剂 】 10g/L 煌焦油蓝生理盐水溶液或 10g/L 煌焦油蓝 ACD 溶液。 【 操 作 】 1. 于小试管中滴加 1 滴煌焦油蓝生理盐水溶液或煌焦油蓝 ACD 溶液。 2. 加入末梢血或静脉血 2 滴于上述试管中，混匀。 3. 静置 1520min 后，取用 1 滴制成薄片。 1354 第八十一章 临床检验 4. 油镜下检查 1000 个红细胞中网织红细胞数，以百分率或绝对值报告。 【 附 注 】 1. 活体染色时间不能过短，室温低时，放 37温箱。 2. 网织红细胞也可用 Miller 窥盘计数法、荧光染色或流式细胞仪计数。 嗜碱性点彩红细胞计数 【 标 本 】 末梢血。 【 方 法 】 百分计数法。 【 试 剂 】 1. 甲醇； 2. 碱性亚甲基蓝染液（保存 23 周） 。 【 操 作 】 1. 按常法制成薄血片，自然干燥后，用甲醇固定 3min。 2. 用碱性亚甲基蓝染液染色 12min，水洗待干。 3. 用油镜计数 1000 个红细胞中嗜碱性点彩红细胞数，以百分率报告。 【 附 注 】 1. 用碱性亚甲基蓝染液染色后，红细胞呈浅蓝绿色，嗜碱性点彩呈深蓝色。 2. 也可用瑞氏染色，嗜碱性点彩呈蓝黑色。 3. 由于点彩红细胞分布不匀，必要时扩大计数红细胞数。 红斑狼疮细胞检查 【 标 本 】 静脉血。 【 方 法 】 改良血块法。 【 操 作 】 1. 抽取患者血液 23ml ，注于干燥试管内，于室温待凝。 2. 于凝固刚形成时，用竹签将凝块搅碎，并将残余凝块除去。 3. 以 2000r/分钟离心沉淀 10 分钟 ，使白细胞聚集在同一层面，以利于狼疮细胞形成。 4. 置 37温箱内温育 2h。 5. 取出白细胞层及其上下各少许，置红细胞比积管中，以 2000r/分钟离心，沉淀 10 分钟。 6. 吸去上层液，轻轻吸取白细胞层，制成薄片 34 张。 7. 以瑞氏染液染色、镜检。 【 附 注 】 1. 整个操作时间不能超过 3h。 2. 注意与果馅细胞鉴别。 一氧化碳血红蛋白定性试验 【 标 本 】 末梢血。 【 试 剂 】 50g/L NaOH。 检验在线--医学检验专业站 【 操 作 】 1. 取试管 2 支，各加蒸馏水 35ml ，一管加患者血液三滴，另一管加正常人对照血 3 滴， 混匀。此时，如患者血中有一氧化碳，则血液呈樱桃红色。 2. 每管各加 50g/L NaOH1 滴，轻轻混合，正常对照管呈绿褐色，如患者血液中有一氧化 碳血红蛋白，则溶血液仍呈樱桃红色，为阳性；如与正常对照色泽一致为阴性。 【 附 注 】 1. 观察结果须及时，否则樱桃红色逐渐退去，不易分辨。 2. 本试验敏感性较差，血液中一氧化碳含量到一定程度时才显阳性。如患者事先已采取通 气措施，血中一氧化碳含量下降，试验可阴性。但临床症状、体征仍可能存在。 （ 徐宝贵 朱 炎 ） 第二节 体液及排泄物检查 尿液检验 尿常规检查 【 标 本 】 新鲜尿液。 【 方 法 】 化学试带法。 【 试 剂 】 各型号尿液化学分析仪配套试带。 【 操 作 】 详见自己实验室的尿液化学分析仪使用手册。 【 附 注 】 1. 尿常规检查使用尿液化学分析仪，目前能进行 810 项检测（PH、蛋白、葡萄糖、酮体、 隐血、尿胆红素、尿胆素原、亚硝酸盐、比重、白细胞） 。这些项目亦有相应的手工方法，详见 有关资料。 2. 必须了解所用试带各膜块注意事项、药物干扰。 3. 要注意尿液化学分析仪测定结果与手工法的差异，必要时用手工法复查。 4. 尿液化学分析仪检测仅是一个过筛手段，当蛋白、隐血、白细胞等出现异常结果（如尿 蛋白“”或以上）时，应进行镜检。 5. 尿液颜色、透明度等一般性状异常时也应报告。 本周氏（Bence-Jones）蛋白定性 检查 【 标 本 】 新鲜尿液。 【 方 法 】 热沉淀反应法。 【 试 剂 】 1. 200g/L 磺基水杨酸溶液； 2. 2mol/L 醋酸盐缓冲溶液（pH4.90.1） 。 1356 第八十一章 临床检验 【 操 作 】 1. 先将尿液用磺基水杨酸法作蛋白定性检查，如呈阴性反应，则可认为尿液标本中本周 氏蛋白阴性。 2. 取透明尿液 4ml 于试管中，再加入醋酸盐缓冲液 1ml，混匀后，放置 56水浴中 15 分钟。 如有浑浊或出现沉淀，再将试管放入沸水中，煮沸 3 分钟，观察试管中浑浊或沉淀的变化，如浑 浊变清、浑浊减弱或沉淀减少，均提示本- 周氏蛋白阳性。若煮沸后，浑浊增加或沉淀增多，表 明此尿液中还有其它蛋白质，此时应将试管从沸水中取出，立即过滤。如滤液开始透明，温度下 降后浑浊，再煮沸时又透明，提示本- 周氏蛋白为阳性。 【 附 注 】 1. 过多的本- 周氏蛋白，在 90以上不易完全溶解，故需与对照管比较，也可将尿液稀释 后再测。 2. 煮沸过滤除去尿中白、球蛋白时，动作要迅速，并需保持高温，否则本- 周氏蛋白也会滤 去。 肌红蛋白定性试验 【 标 本 】 新鲜尿液。 【 试 剂 】 1. 10g/L 邻甲联苯胺（- tolidine）溶液； 2. 过氧化氢醋酸溶液； 3. 硫酸铵粉末。 【 操 作 】 1. 首先测试尿液中有无血红素的存在，即依次加入新鲜尿液 4 滴，邻甲联苯胺溶液 2 滴， 混和后，加入过氧化氢醋酸溶液 3 滴，如有蓝色或蓝绿色出现，表示尿中有 Hb 或/ 及 Mb 的存 在。 2. 离心或过滤使尿液透明，吸取 5ml，加入硫酸铵粉末 2.8g，使之溶解混合，约为 80% 饱 和度，静置 5 分钟，用滤纸过滤。取滤液重复测试有无血红素存在，如仍有，表示 Mb 阳性。如 不显蓝色，表示血红素已被硫酸铵沉淀，为 Hb 阳性。 【 附 注 】 1. 标本必须新鲜，并避免剧烈搅拌。 2. 本法为过筛试验，在少数正常人中可出现假阳性。 尿含铁血黄素定性试验 【 标 本 】 新鲜尿液。 【 方 法 】 罗斯（Rous）法 【 试 剂 】 120g/L 亚铁氰化钾水溶液（用时新鲜配制） ； 23 %盐酸。 【 操 作 】 1. 取混匀的新鲜尿液 15ml，以 2000r/min 离心 5min，倾去上清液。 2. 在沉渣中加入新鲜配制的 20g/L 亚铁氰化钾水溶液及 3%盐酸液各 2ml，充分混匀，室温 静置 10min。 检验在线--医学检验专业站 3. 再离心沉淀，取沉淀物涂片，加盖玻片后用高倍镜（必要时用油镜）检查。 4. 如见有分散或成堆蓝色闪光颗粒（直径 13um）即为阳性，如在细胞内则更为可信。 【 附 注 】 1. 所有试管、玻片、试剂均应防止铁剂污染，以免出现假阳性。 2. 一般应做阴性对照，如亚铁氰化钾与盐酸混和后即显深蓝色，表示试剂已污染高铁，不 宜再用。 尿乳糜定性检查 【 标 本 】 新鲜尿液。 【 试 剂 】 1. 乙醚（AR） ； 2. 苏丹醋酸乙醇染色液或猩红染色液。 【 操 作 】 1. 取尿 510ml，加乙醚 23ml ，混合振摇后，使脂肪溶于乙醚。静置数分钟后， 2000r/min 离心 5min。 2. 吸取乙醚与尿液的界面层涂片，加苏丹醋酸乙醇染色液或猩红染色液 1 滴。 3. 镜检观察是否有红色脂肪小滴。 【 附 注 】 1. 尿液中加少量饱和氢氧化钠，再加乙醚，有助于澄清。 2. 将分离的乙醚层隔水蒸干，若留有油状沉淀，也可加苏丹，镜检证实有无脂肪小滴。 尿胆色素原定性试验 【 标 本 】 新鲜尿液。 【 试 剂 】 1. 对二甲氨基苯甲醛试剂； 2. 饱和醋酸钠溶液； 3. 氯仿； 4. 正丁醇。 【 操 作 】 1. 在试管中，加入尿标本 2ml 及对二甲氨基苯甲醛试剂 2ml，混合。 2. 立即加饱和醋酸钠溶液 4ml，混合，加氯仿 3ml，振摇混合后，上层水溶液呈红色者为阳 性反应。 3. 阳性结果应用下法证实：如尿胆原含量多，用一次氯仿不能完全抽提尿胆原，应多次用 氯仿抽提，直至氯仿层呈淡粉红色或无色为止，再观察上层水溶液色泽。如上层水溶液为红色时， 再加正丁醇 4ml 抽提，如水溶液仍呈红色则证实尿中胆色素元为阳性。 【 附 注 】 1. 醋酸钠溶液必须为饱和液。 2. 当尿胆色素原浓度太高时，应将尿标本稀释 25100 倍。 3. 尿液必须新鲜，不能久置。 1358 第八十一章 临床检验 尿苯丙酮酸定性试验 【 标 本 】 新鲜尿液。 【 方 法 】 三氯化铁法。 【 试 剂 】 1. 100g/L 三氯化铁液； 2. 磷酸盐沉淀剂。 【 操 作 】 1. 尿液 4ml 加磷酸盐沉淀剂 1ml，混匀，静置 3min，如出现沉淀，可用滤纸过滤或离心除 去。 2. 滤液中加入浓盐酸 23 滴和 100g/L 三氯化铁溶液 23 滴，每加 1 滴立即观察颜色变化。 以尿液显蓝绿色并持续 24min，为阳性。 【 附 注 】 1. 尿中若含酚类药物（如水杨酸制剂）及氯丙嗪，也可与氯化铁结合显色，试验前应停用 此类药物。胆红素也可造成假阳性。 2. 小儿出生后 6 周内不易查出。故于出生 6 周后检查为宜。 3. 大多数苯丙酮尿症患者的尿液可出现阳性。但约 1/41/2 病例可能会漏检 4. 亦可采用 2，4-二硝基苯肼法。 尿沉渣检查 【 标 本 】 新鲜尿液（最好采集清晨中段尿） 。 【 方 法 】 显微镜检查法。 【 操 作 】 1. 取刻度离心管，倒入混合后的新鲜尿液 10ml，1500r/ min 离心 5min。 2. 弃去上层清液，留下 0.2ml 沉渣，轻摇离心管，使尿沉渣有形成分充分混匀。 3. 取尿沉渣 0.02ml，滴在载玻片上，用 18mm18mm 的盖玻片覆盖。 4. 镜检观察，用 1010 镜头，观察其中有形成分的全貌及管型。用 1040 镜头观察鉴定 细胞成分及计算数量，应观察 10 个视野所见最低和最高值，记录结果。管型用高倍镜鉴定，但 计数数量按低倍镜观察 20 个视野，算出一个视野的平均值，记录结果。尿结晶和盐类数量以每 一高倍视野、2、3、4报告。 【 附 注 】 1. 清晨空腹第一次尿（一般情况应采集中段尿） ，应在 1h 内送检。 2. 见到各种上皮细胞也应报告，报告方式参照白细胞。 3. 亦可采用染色尿沉渣镜检。 尿沉渣定量检查 【 标 本 】 新鲜晨尿。 【 方 法 】 一小时尿沉渣计数法。 检验在线--医学检验专业站 【 操 作 】 1. 标本收集：患者先排尿弃去，准确收集 3 h 尿液于干燥容器内送检（标本留取时间 5:308 :30） 。 2. 准确测量 3h 尿量，充分混合。取混匀尿液 10ml，置刻度离心管中，1500r/min 离心 5min，用吸管吸弃上层尿液 9ml，留下 1ml，充分混匀。吸取混匀尿液 1 滴，注于血细胞计数板 内。细胞共数 10 个大方格，管型共数 20 个大方格。最终计算出红细胞/h、白细胞/h 、管型/h 。 【 附 注 】 1. 尿液应新鲜，PH 应在 6 以下。 2. 尿液比重最好在 1.026 以上。 3. 如尿液中含多量磷酸盐时，应加少量稀醋酸液（切勿加多） ，使其溶解；含大量尿酸盐时， 应加温使其溶解。 4. 亦可采用尿沉渣定量分析板或尿沉渣自动分析仪进行尿沉渣定量检查，详见有关资料。 绒毛膜促性腺激素检测 【 标 本 】 新鲜尿液。 【 方 法 】 金标抗体检测法。 【 操 作 】 见试剂盒说明书。 【 附 注 】 若质控点和测定点均不呈现红色，表示试剂失效。 粪便检验 粪便的显微镜检查 【 标 本 】 新鲜粪便。 【 方 法 】 直接涂片镜检法。 【 操 作 】 1. 洁净玻片上加等渗盐水 12 滴，选择粪便的不正常部分，或挑取不同部位的粪便做直接 涂片（最好取大玻片，制成涂片后，应覆以盖片。涂片的厚度以能透过印刷物字迹为准）检查。 2. 在涂片中如发现疑似包囊，则在该涂片上滴加 1 滴碘液，在高倍镜下仔细鉴别，如仍不能 决定时，可取全量粪便浓缩法检查。 隐血试验 【 标 本 】 新鲜粪便。 【 方 法 】 免疫学检测法。 【 操 作 】 取一片洁净干燥的载玻片，滴加 23 滴蒸馏水，取粪便少许，调成均匀混悬液。取粪便隐 1360 第八十一章 临床检验 血试纸条，按说明书操作，将试纸条的反应端浸湿。在 5min 内观察结果。以反应线及质控线均 呈蓝色带为阳性。 【 附 注 】 1. 若两条线均不显色，说明试纸条失效。 2. 本法由于间断性出血或出血在粪便中分布不均等因素，可造成假阴性结果。 3. 本法由于药物等原因，对正常人检查有时会得到阳性结果。 4. 亦可采用化学试带法、邻甲联苯胺法、愈创木酯法等。收集标本前 3 日应禁食动物性食 物及富含叶绿素食物、铁剂、中药。但本法不受动物血红蛋白的干扰，试验前不须禁食肉类。 粪胆素检查 【 标 本 】 新鲜粪便。 【 方 法 】 氯化高汞煮沸法。 【 试 剂 】 饱和氯化高汞溶液。 【 操 作 】 1. 于小试管内置粪便一小块，加饱和氯化高汞溶液数毫升。 2. 将粪块调匀，加热煮沸 3min，立即观察颜色反应。 【 附 注 】 1. 结果不易判定时，应注意粪便颜色，必要时以盐水代替试剂做空白对照。 2. 当粪便颗粒经煮沸后如有红色又有绿色出现，说明标本内既含粪胆素又含胆红素，常见 于肠炎、腹泻等。 脑脊液检验 潘氏（Pandy）球蛋白定性试验 【 标 本 】 新鲜脑脊液。 【 试 剂 】 5%苯酚溶液（棕色瓶内保存） 。 【 操 作 】 取试剂 23ml，置于小试管内，用毛细滴管滴入脑脊液 12 滴，衬以黑色背景，立即观察 结果，报告阴性或阳性及阳性的程度。 细胞计数 【 标 本 】 新鲜脑脊液。 【 试 剂 】 1. 细胞计数板； 2. 红细胞稀释液； 3. 冰乙酸； 4. 1%冰乙酸。 检验在线--医学检验专业站 【 操 作 】 1. 细胞总数： （1）澄清脑脊液：混匀后用滴管直接滴入计数池，计数 10 个大方格内红、白细胞数，其总 和即为每 u l 的细胞数。 （如细胞较多，可计数一大格内的细胞数10） 。 （2）浑浊或带血脑脊液：用血红蛋白吸管吸取混匀的脑脊液 20ul，加入含红细胞稀释液 0.38ml 的小试管内，混匀后滴入计数池内，用低倍镜计数 4 个大方格中的细胞总数，再乘以 50 即为每 ul 脑脊液的细胞总数。 2白细胞数： （1）非血性标本：小试管内放入冰乙酸 12 滴，转动试管，使内壁沾有冰乙酸后倾去之， 然后滴加混匀的脑脊液 34 滴，数分钟后，混匀充入计数池，按细胞总数操作中的红、白细胞 计数法计数。 （2）血性标本：将混匀的脑脊液用 1%冰乙酸溶液稀释后，按细胞总数操作中的红、白细胞 计数法计数，结果稀释倍数。 3细胞分类： （1）直接分类法：白细胞计数后，将低倍镜换成高倍镜，直接在高倍镜下根据细胞核的形 态分别计数单个核细胞（包括淋巴细胞及单核细胞）和多核细胞，应数 100 个白细胞，并以百分 率表示。若白细胞少于 100 个，应直接写出单核、多核细胞的具体数字。 （2）染色分类法：如直接分类不易区分细胞时，可将脑脊液离心沉淀，取沉淀物 2 滴，加 正常血清 1 滴，推片制成均匀薄膜，置室温或 37温箱内待干，进行瑞氏染色后用油镜分类。 如见有不能分类的细胞，应另行描述报告。 【 附 注 】 1. 脑脊液常规包括一般性状检查、潘氏（Pandy）球蛋白定性试验及细胞计数。 2. 计数应及时进行。 3. 细胞计数时，应注意新型隐球菌与白细胞的区别。 4. 计数池用后，应用 75%乙醇消毒 60min。 浆膜腔积液检查 浆膜粘蛋白定性试验（Rivalta 反应） 【 标 本 】 新鲜浆膜腔积液。 【 试 剂 】 冰醋酸。 【 操 作 】 取 100ml 量筒，加蒸馏水 100ml，滴入冰醋酸 0.1ml （ PH 35） ，充分混匀，静止数分钟， 将穿刺液靠近量筒液面逐滴轻轻滴下，在黑色背景下，观察白色雾状沉淀的发生及其下降速度等， 报告阴性或阳性及阳性的程度。 细胞学检查 【 标 本 】 新鲜浆膜腔积液。 【 操 作 】 1. 细胞总数及有核细胞计数 方法基本与脑脊液同，漏出液中有核细胞数量常在 100106/L 以下；渗出液中有核细胞数量 1362 第八十一章 临床检验 较多，常在 500106/L 以上。 2. 细胞分类： 穿刺液应在抽出后立即离心，用沉淀物涂片后以瑞氏染色法进行分类。必要时制备稍厚涂片， 在干燥前放置乙醚乙醇等量混合液中固定 30min，用苏木素- 伊红（HE）或巴氏法染色查找癌细 胞。 精液检查 精子活动率 【 标 本 】 新鲜精液。 【 操 作 】 取新鲜标本混匀后，在温热玻片上用高倍镜观察 100 个精子，计数活动精子与不活动精子的 比例，计算精子活动的百分率。 【 附 注 】 如室温低于 10时，应将标本先放入 37温育 510min 后镜检。 精子活力 【 标 本 】 新鲜精液。 【 操 作 】 取上述新鲜湿片标本，观察精子的活动力，以 0 级至级报告。 精子计数 【 标 本 】 新鲜精液。 【 试 剂 】 精子稀释液。 【 操 作 】 1. 于小试管内加精子稀释液 0.38ml，吸液化精液 20ul，加入稀释液内摇匀。 2. 充分摇匀后，滴入血细胞计数池内，静置 12min，待精子下沉后，以精子头部作为基准 进行计数。 3. 如精子数少，可计数 2 个大方格内精子数，数得总数乘 10 万即为每毫升精液内精子数， 再换算成10 9/L 报告。 4. 如精子数多，可计数 5 个中方格内精子数，加 6 个零，即为每 ml 精液内精子数再换算成 109/L 报告。 【 附 注 】 1. 收集精液前应避免性生活 37 天，精液宜用清洁干燥之小瓶收集，避孕套内的精液不宜 采集。收集精液标本后应在一小时内检查，冬季应注意保温。 2. 出现一次异常结果，应隔一周后复查，反复查 23 次方能得出比较正确的结果。 3. 如低倍镜、高倍镜检查均无精子，应将精液离心沉淀后再涂片检查，如两次均无精子， 报告“无精子” 。 检验在线--医学检验专业站 精子形态观察 【 标 本 】 新鲜精液。 【 试 剂 】 革兰或瑞氏染液。 【 操 作 】 革兰或瑞氏染色后用油镜观察，报告异常精子的百分比。 前列腺液检查 【 标 本 】 新鲜前列腺液（临床医师作前列腺按摩术后，采集标本于清洁玻片上，立即送检） 。 【 操 作 】 1. 肉眼观：记录液体颜色、是否混有血液、粘稠度（有无脓块） 。 2. 湿片镜检：高倍镜下观察白细胞、红细胞、卵磷脂小体，其次为上皮细胞、精子、淀粉 样体等，必要时革兰染色查细菌。 阴道分泌物检查 【 标 本 】 阴道分泌物。 【 操 作 】 1. 清洁度： 取阴道分泌物，用生理盐水涂片，高倍镜检查，根据所含白细胞（或脓细胞） 、 上皮细胞、杆菌、球菌的多少，分成度。 2. 滴虫检查：在湿片镜下如见梨形，比白细胞大 2 倍，顶端有鞭毛 4 根，在 2542温度 下可活动的滴虫（在寒冷天气，标本要采取保温措施） ，报告之。 3. 霉菌检查：在湿片高倍镜下如见卵圆形霉菌孢子，报告之。 胃液检查 基础胃酸分泌量（BAO）及最大胃酸分泌量（ MAO）测定 【 标 本 】 胃液。 【 操 作 】 1. 先将晨间空腹残余胃液抽空弃去。连续抽取 1 小时胃液放入瓶内，作为一个标本计胃液 量。用酸度计准确测定氢离子浓度（也可用 pH 纸测定，或做胃酸浓度滴定） 。 2. 一次皮下注射五肽胃泌素（Pentagastrin）6ug/kg，注后每 15min 收集一份标本，连续抽 4 次，分别用上法测胃液量、胃酸氢离子浓度。 3. 根据上述测定值，分别计算出 BAO 及 MAO 值。 pH 值测定 【 标 本 】 胃液。 【 操 作 】 可先用 pH 试纸测定，凡 pH 值3 者，用 pH 计测定氢离子浓度。 1364 第八十一章 临床检验 十二指肠引流液及胆汁检查 【 标 本 】 胆汁及十二指肠引流液。 【 操 作 】 1. 按照胆汁来源不同，分为甲、乙、丙、丁四管（在容器上必须注明） 。 2. 观察各管胆汁的颜色、透明度、粘稠度。 3. 测定酸碱度，每管分别记录。 4. 高倍镜下镜检，注意细胞、寄生虫、结晶等存在的情况。 痰液检查 显微镜检查 【 标 本 】 痰液。 【 操 作 】 选择脓样、干酪样或带脓样血液部分，取 1 小块置玻片上，直接与生理盐水混合，涂成薄片， 加盖片后轻压之，用低倍镜及高倍镜检查。注意有无红细胞、白细胞、上皮细胞、弹力纤维、枯 什曼螺旋体、夏科- 雷登结晶、胆红素结晶、硫磺样颗粒（放线菌块） 、寄生虫卵（可见蛔虫卵、 肺吸虫卵） 、痢疾阿米巴、真菌孢子、心力衰竭细胞、载碳细胞、癌细胞等。 嗜酸性粒细胞检查 【 标 本 】 痰液。 【 试 剂 】 瑞氏或伊红- 美蓝染色液。 【 操 作 】 取痰液做直接涂片，干燥后用瑞氏或伊红- 美蓝染色液染色，油镜下计数 100 个白细胞，报 告嗜酸性粒细胞百分数。 （ 徐宝贵 朱 炎 ） 第三节 血栓与止血的检验 血管壁与内皮细胞检验 出血时间（BT） 出血时间检测是指皮肤受特定条件的外伤后，出血自行停止所需的时间。此过程反映皮肤毛 细血管与血小板相互作用，包括血小板粘附，血小板活化和释放以及血小板聚集等反应。 1. 出血时间“测定器法”自肘前窝凹下二横指处，经常规消毒后，使刀片由“测定器”内 刺入皮肤，启动秒表，每隔半分钟用干净滤纸吸干流出的血液，直至出血自然停止，按停秒表， 记录出血时间。 2. Duke 法，自耳垂或指尖取血。 【 方法与操作 】 见全国临床检验操作规程 （第二版） 【 注意事项 】 测定器法： 检验在线--医学检验专业站 1. 采取部位应保暖，血液应自动流出。 2. 由于刺入皮肤的刀片长度和深度均固定，故“测定器法”的结果较为准确。 3. 滤纸吸干流出血液时，应避免与伤口接触。 4. 试验前 1 周内不能服用抗血小板药物，如阿司匹林等，以免影响结果。 阿司匹林耐量试验（ATT ） 口服少量阿司匹林后，可使某些血栓和出血患者的出血时间延长。 【 方法与操作 】 定量口服阿司匹林后 2h，测定出血时间，当结果可疑时，可于 4h 后重复测定出血时间一次， 详见全国临床检验操作规程 （第二版） 。 【 试 剂 】 阿司匹林片（0.3g/片） 。 【 附 注 】 1. 服药前出血时间明显延长者，或临床有明显出血症状者，或有阿司匹林禁忌证患者，不 宜作此试验。 2. 阿司匹林有引起出血副作用，对准备手术或术后 1 周以内及血友病患者忌作本试验。 内皮细胞功能试验 血管性假血友病因子抗原（vWF : Ag）测定（ELISA 法） 【 标 本 】 自静脉取血 1.01.5ml，注入抗凝管 30mmol/L 枸缘酸-枸椽酸钠缓冲液（PH5.0 ） 内， （1:9 v/v）充分混匀，在 1h 内分离血浆，立即测定或放 - 201 周内测定。 【 方法与操作 】 见全国临床检验操作规程 （第二版） 【 附 注 】 1. 对血浆中血管性假血友病因子抗原含量过高的标本，应作稀释后再测定。 2. 凡 ELISA 检测中须注意的问题均要重视。 3. 除此法外，还可选用免疫火箭电泳法或单抗酶联免疫吸附法。 6-酮前列腺素 Fla（6-酮PG Fla）测定 【 标 本 】 采用血浆标本。 【 方法与操作 】 ELISA 法。现有商品试剂盒出售，严格按说明书步骤操作。 【 附 注 】 1. 如第二抗体为羊抗兔，则不宜测定兔血标本。 2. 除 ELISA 法外，尚有放射免疫法。 血小板数量和功能检验 血小板计数和平均血小板体积测定 血小板计数： 目视计数法。 【 标 本 】 1366 第八十一章 临床检验 末梢血或抗凝静脉血。 【 方法与操作 】 见全国临床检验操作规程 （第二版） 。 【 试 剂 】 1. 草酸铵法稀释液。 2. 许汝和稀释液。 【 附 注 】 1. 血小板稀释液要清洁。防微粒和细菌污染。试管和吸管也应清洁、干净。 2. 针刺应稍深，使血流通畅。拭去第一滴血后，首先采血作血小板检测，动作要快，防止 血小板聚集和破坏。采取标本后尽快计数。 3. 血液稀释液充分混匀后，滴入计数池内后，要静置 1015min。室温高时注意保持计数池 周围的湿度，以免水分蒸发。 4. 计数时光线要适中，注意有折光性的血小板与杂质灰尘相区别，附在血细胞旁边的血小 板也要注意，不要漏掉。 血小板计数仪计数 【 标 本 】 末梢血。 【 方法与操作 】 使用血小板计数仪及与其相匹配的稀释液。操作详见仪器使用说明书。 平均血小板体积（MPV）测 定 【 标 本 】 根据仪器的要求用末稍血或静脉取血注入抗凝管（EDTA.Na 2 或肝素） 【 方法与操作 】 自动化血细胞计数仪均可检测 血小板功能检验 血小板粘附试验 【 标 本 】 自静脉取血 1.01.5ml。 【 方 法 】 1. 玻珠柱法： （1）操作：见全国临床检验操作规程 （第二版） 。 （2）注意事项： 1）取血过程必须顺利，掌握血液通过玻珠柱的速度，流速太快，粘附率降低，流速太 慢会使粘附率增高。 2）玻珠柱为一次性用具，用后即弃去。 3）待用玻珠柱应置于干燥器中贮存，受潮后粘附率下降。 2. 玻璃滤器法： 【 标 本 】 自静脉取血 1.5ml。 【 方法与操作 】 检验在线--医学检验专业站 见全国临床检验操作规程 （第二版） 。 血小板聚集试验（PAgT） 【 标 本 】 自肘静脉取血 4.5ml 注入于含 0.5ml 109mmol/L 枸椽酸钠的硅化离心管内，充分混匀。 【 试 剂 】 1. 富含血小板血浆（PRP）及贫含血小板血浆（PPP） 。 2. 血小板聚集诱导剂 ADP、肾上腺素、胶原、瑞斯托霉素（Ristocetin）等。 【 方法与操作 】 PAgT 比浊法，按全国临床检验操作规程 （第二版）步骤操作。 【 注意事项 】 1. 血标本中 pH6.88.5 之间时，可测得最佳结果。 pH6.4 或10.0 时，可使聚集抑制或消 失。 2. 阿司匹林、潘生丁、肝素、双香豆素等可抑制聚集，尤其阿司匹林抑制聚集作用时间可 持续 1 周。 3. 采血后标本应放在 1525下，切忌冰箱内保存，并在 3h 内作完实验。 凝血因子检验 全血凝固时间检验（CT） 【 标 本 】 静脉取血 3ml。 【 方法与操作 】 试管法、硅管法操作参见全国临床检验操作规程 （第二版） 。 【 附 注 】 1. 静脉取血要一针见血，尽量减少组织液和空气混入。 2. 水浴箱温度要恒定，过高或过低，可影响结果。 活化部分凝血活酶时间测定（APTT） 【 标 本 】 自静脉取血，用 109mmol/L 枸椽酸钠作 1:9 抗凝。 【 试 剂 】 市售成套试剂。 【 方法与操作】 按试剂及有关仪器说明书要求进行。 【 附 注 】 1. 标本应及时检测，最迟不超过 2h。 2. 分离血浆应在 3000r/min，离心 10min。 3. 本试验较试管法全血凝血时间敏感，能检出因子：C25轻型血友病。 血浆凝血酶原时间测定（PT，一期法） 【 标 本 】 静脉血 1.8ml，用 109mmol/L 枸椽酸钠 0.2ml 抗凝。 【 试 剂 】 1. 组织凝血活酶浸出液； 1368 第八十一章 临床检验 2. 0.025mol/L CaCl2 液； 【 方法与操作 】 见全国临床检验操作规程 （第二版） 。 【 附 注 】 1. 采血后宜在 1h 内完成，置冰箱 4保存,不应超过 4h，-20 下可放置 2 周，-70可放置 6 个月。 2. 水温箱控制在 371，过高过低均影响结果。 简易凝血活酶生成试验（STGT） 【 标 本 】 取全血 0.04ml 加 5ml 蒸馏水，混匀，即成溶血液，备用。 【 方法与操作 】 见全国临床检验操作规程 （第二版） 纤溶系统检验 优球蛋白溶解时间测定（ELT ） 【 标 本 】 采取静脉血 1.8ml 注入含 0.2ml109mmol/L 枸橼酸钠液中，混匀。 【 试 剂 】 1. 109mmol/L 枸橼酸钠液； 2. 1%醋酸液； 3. （pH9.0）硼酸盐缓冲液； 4. 0.025mol/LCaCl2 液。 【 方法与操作 】 加钙法。操作参见全国临床检验操作常规 （第二版） 。 【 注意事项 】 1. 采血时，止血带不宜扎得过紧，不得超过 5min。 2. 观察溶解标本以不见絮状物为准。 3. 当纤溶极度亢进时，体内纤酶原基本被消耗尽时，本试验可呈假阴性。 组织纤溶酶原激活物测定（t-pA : A） 【 标 本 】 自静脉采血。 【 方法与操作 】 发色底法。操作见全国临床检验操作规程 （第二版） 。 【 注意事项 】 1. 采血时最好不用止血带，加压后会引起 t-pA 进入血液，取血后尽快在低温分离血浆。 2. 标本必须酸化处理，否则受纤溶酶原激活抑制物（PAI）的影响较大。 纤溶酶原活性测定（PLG : A） 【 标 本 】 自静脉取血 0.9ml,加 0.1ml 109mmol/l 枸橼酸钠液混匀。 【 试 剂 】 检验在线--医学检验专业站 1. 0.05mol/LTris 缓冲液（PH7.4） 。 2. 尿激酶。 3. 50%（v/v）甘油溶液。 4. 50%（v/v）醋酸液。 5. 正常人混合血浆。 6. 国产发色底物 140450（上海生化所东风试剂公司产品） 。 【 方法与操作 】 发色底物法。操作参见全国临床检验操作规程 （第二版） 。 D-二聚体测定 高凝状态的患者，血栓性疾病和弥漫性血管内凝血时，血浆 D-二聚体明显升高是诊断 DIC 的重要依据。 【 标 本 】 采静脉血 11.5ml，注入抗凝管（枸橼酸钠， EDTA.Na2 及肝素）内混匀。 【 方法、试剂与操作 】 ELISA 法，操作严格按商品出售的试剂盒说明书进行。 【 注意事项 】 1. 使用的抗凝剂量，不应超过血总体积 10%。 2. 待检血浆在室温保存 8h 或 44 天内，D-二聚体含量基本不变，若需长期保存，可置- 20保存，操作时置于 37水浴中快速复溶。 3. 市售 D-二聚体乳胶试剂盒及金标试剂盒使其检测更为方便，但不能定量。 血浆鱼精蛋白副凝固时间（3P）试验 【 标 本 】 自静脉抽取 1.0 1.5ml 血，注入枸橼酸钠抗凝管内，混匀。 【 方法与操作 】 见全国临床检验操作规程 （第二版） 。 【 试 剂 】 1. 109mmol/L 枸橼酸钠液。 2. 10g/L 硫酸鱼精蛋白液（pH6.5） 。 【 注意事项 】 1. 本试验不宜用草酸盐、肝素或 EDTA 盐作抗凝剂。 2. 抽血不顺利、抗凝不完全、标本保存于冰箱、试验时间已到未及时观察结果等均可致假 阳性结果。 3. 水浴箱温度太低或纤维蛋白原的含量过低，会出现假阴性结果。 血清纤维蛋白降解产物（FDP）测定 【 标 本 】 采用无溶血的血清。 【 方法、试剂与操作 】 ELISA 法。试剂现已有商品试剂盒供应，操作按说明书步骤进行。 1370 第八十一章 临床检验 循环抗凝物质检验 凝血酶时间测定（TT） 【 标 本 】 自静脉取血 11.5ml，注入枸橼酸钠抗凝管内，混匀。 【 方法与操作 】 见全国临床检验操作规程 （第二版） 【 试 剂 】 1. 109mmol/L 枸橼酸钠液 2. 凝血酶溶液 【 附 注 】 1. 采血后宜在 1h 内完成，置冰箱内保存不应超过 4h。 2. 肝素或 EDTA.Na2 抗凝血浆不宜作本试验。 血浆肝素或类肝素抗凝物质检验 （甲苯胺蓝纠正试验） 【 标 本 】 静脉枸橼酸钠抗凝血。 【 方法与操作 】 见全国临床检验操作规程 （第二版） 。 【 附 注 】 本试验中加甲苯胺蓝后，凝血酶时间缩短 5s 以上者，提示待检血，有肝素或类肝素增多。 蕲蛇酶时间测定（AT） 【 标 本 】 采静脉血 0.9ml 加 0.1ml（109mmol/L）枸椽酸钠抗凝。 【 试 剂 】 1. 蕲蛇酶溶液 0.5mg/支； 2. 109mmol/L 枸椽酸钠液。 【 方法与操作 】 见全国临床检验操作规程 （第二版） 。 （ 何金昌 徐淑屏 ） 第四节 溶血性贫血的检验 红细胞渗透脆性试验 【 标 本 】 1. 简易法，静脉血为宜。 2. 比色法，用肝素抗凝管，抽取静脉血 1.01.5ml，混匀。 【 方法及操作与试剂 】 1. 简易法：用配有 6 号针头的干燥无菌注射器取静脉血 1.01.5ml，立即滴入试管架上含有 不同量的 NaCL 及蒸馏水的各管中，每管滴，贫血患者可加 2 滴，摇匀，静置，室温 2h，观察 结果。详见临床实验诊断学上册 。 2. 比色法：见临床实验诊断学上册 。 检验在线--医学检验专业站 【 附 注 】 1. 简易法： （1）试剂配制要准确，每次配制量不宜过大，12 个月内需更换 1 次试剂。 （2）如取耳垂血要使血液流出畅通，如静脉血要求注射器干燥。 （3）如用抗凝血，以去纤维蛋白或肝素抗凝血为合适。 （4）如开始及完全溶血的结果不易判断时，可离心后观察。 （5）地中海贫血的渗透脆性降低，需作低浓度 NaCL 液检测。 2. 比色法： （1）如在室温下实验，需在 2 小时内比色结束。 （2）血与 NaCL 缓冲液的 PH 值及温度对检查结果均有一定影响。 红细胞孵育后渗透脆性试验 【 标 本 】 用肝素抗凝血 11.5ml，混匀后备用。 【 方法与操作 】 见全国临床检验操作规程第二版 【 试 剂 】 9g/L NaCl 磷酸盐缓冲液（pH7.4） 【 附 注 】 1. 试剂及试管需消毒，试管需加塞。 2. 试管中 PH 及温度必须恒定， pH 改变 0.1 或温度升高 5均可使结果改变。 红细胞自体溶血试验 本试验是测定患者的红细胞在自体血清中经孵育后，自发发生的溶血程度。 【 试 剂 】 1. 100g/L 葡萄糖（无菌） ； 2. 等渗盐水（无菌） ； 3. HiCN 稀释液； 4. 0.4mol/L ATP 生理盐水无菌液。 【 方法与操作 】 见全国临床检验操作规程第二版。 【 附 注 】 应严守无菌操作规程。 热溶血试验 【 标 本 】 静脉全血。 【 方法与操作 】 以无菌干燥注射器取静脉血 2ml，取下针头，缓缓地沿管壁注入消毒小试管中，避免产生气 泡，加少许消毒石腊油覆盖，37孵育 24h 后，离心观察结果，详见全国临床检验操作规程 第二版。 【 附 注 】 1372 第八十一章 临床检验 1. 注射器及试管要洁净，操作过程避免发生溶血。 2. 在孵育 24h 后，血块仍未改收缩，可用小玻璃棒沿管壁轻轻分离之，然后再离心沉淀， 观察结果。 酸溶血试验 【 标 本】 取静脉血 5ml，取下针头，将血沿瓶壁注入放有玻珠的三角烧瓶内，轻轻摇动，使纤维蛋白 析出，并附于玻璃珠内，继续摇转至血液不凝止。 【 方 法 】 1. Hams 试验法。 2. 简易酸溶血试验法。 【 试 剂 】 1. 0.2mol/ L HCL 液。 2. 8.5g/ L NaCl 液。 3 与患者同型或 AB 型血清（最好采用多人混合新鲜血清，以保证足够的补体） 。 【 操 作 】 见临床实验诊断学上册。 【 附 注 】 1. 血清酸化后，试管须塞紧，否则二氧化碳逸出，可使血清酸度降低。 2. 抗凝剂会影响 PH 值，故不宜用抗凝血浆，可自末梢取血 10 余滴，直接滴入盐水中，混 匀，离心弃去上清液，再配成 50红细胞悬液。 蔗糖水溶血试验 【 标 本 】 取枸橼酸盐或草酸盐抗凝管，抽静脉血 1ml。 【 试 剂 】 92.4g/L 蔗糖溶液。 【 方法与操作 】 见全国临床检验操作规程第二版。 【 附 注 】 1. 所用仪器清洁干燥，以免溶血。 2. 若无蔗糖也可用葡萄糖代替。 葡萄糖 6磷酸脱氢酶活性测定 【 标 本 】 取静脉血 0.51.0ml 注入抗凝管（肝素、 EDTA 或 ACD 液抗凝管） ，混匀。 【 方 法 】 比色法。 【 试 剂 】 1. 0.25mol/L Tris-HCL 缓冲液（pH 7.4） 。 2. 0.154mol/L KCl。 3. 0.12mol/L MgCl。 4. 0.00625mol/L G6PNa 2（2mg/ml） 。 5. 0.00625mol/L NADP（TPN） （5mg/ml） 。 检验在线--医学检验专业站 6. 氰化血红蛋白试剂。 【 操 作 】 见临床实验诊断学上册。 【 附 注 】 新鲜抗凝血（EDTA 或 ACD 抗凝血） ，在 4下保存，48 小时内尚可测定。 高铁血红蛋白还原试验 【 标 本 】 采静脉血 22.5ml 于含 0.2ml 枸橼酸钠（109mmol/L）试管内，混匀。 【 试 剂 】 1. 0.18mol/L 亚硝酸钠和 0.28mol/L 葡萄糖混合液。 2. 0.4mmol/L 亚甲蓝溶液。 3. 0.02mol/L 磷酸盐缓冲液（PH7.4） 。 4. 109mmol/L 枸橼酸钠液。 【 方法与操作 】 见全国临床检验操作规程第二版。 【 附 注 】 1. 红细胞比积低于 30时，高铁血红蛋白还原率显暑降低，因此，须调整红细胞与血浆比 例为 1：1 后，再取标本作试验。 2. 如采用 ACD 作抗凝剂，用量 ACD 与血之比为 0.15：1。该抗凝血可保存 1 周。不宜使用 草酸盐作抗凝剂，因其具有还原性。 3. 标本不应有凝块或溶血。分光光度计的波长应准确，一般要求 St 比 B 大 8 倍以上。 变性珠蛋白小体（Heinz 小体）