分光光度法测定新血宝胶囊中铁的含量

分光光度法测定新血宝胶囊中铁的含量 （湖北中医药大学药学院 药学（2）班 ） 一、实验综述 摘要：以邻二氮菲为显色剂用分光光度法测定新血宝胶囊中铁的含量。研究表明， 在 pH=29 的溶液中，铁（）可用盐酸羟胺还原至铁（） ，生成的铁（）与邻二氮 菲生成稳定的橘红色络合物， ，其最大吸收波长为 506nm,铁浓度在 0.3116.00mg/L 范围内 与溶液吸收光度呈良好的线性关系，线性回归方程为 A= _ 相关系数 r=_，检出限为_ mg/L，相对标准差 RSD=_，表观摩尔吸收系数 = _L （mol -1cm-1） 关键词：邻二氮菲；分光光度法；铁 铁元素是人体内重要的元素之一。人体缺铁容易导致一些贫血症状甚至一些疾病，所以适 当补铁对人体健康有着非常重要的意义。如果人体缺铁，可影响血红蛋白、肌红蛋白的合 成，使某些酶的活性降低，引起人体生理上的变化，从而导致免疫力降低，智力降低和机 体抵抗力下降等引起的各种疾病的产生。测定新血宝胶囊中的铁含量对于人体的健康有着 十分重要的意义。测定铁的含量由很多方法。本文采用邻二氮菲分光光度法测定新血宝胶 囊中铁的含量，该法具有操作简单、灵敏度高等特点，结果令人满意。 2、实验目的 1.了解分光光度法侧铁的选择 2.熟悉显色反应条件与测量条件的选择方法 3.熟悉实验设计的基本内容与方法 4.掌握分光光度法测定新血宝胶囊中铁的含量 3、实验原理 亚铁离子与邻二氮菲反应生成橘红色络合物，其反应式为： 四、实验仪器和试剂 仪器： 721(722)分光光度计、50ml 容量瓶、刻度吸管（1ml、5ml） ，pH 精密试纸。 实验试剂：铁标准储备液(Fe 2+=100.0 g/ml). 0.15%邻二氮菲水溶液(显色剂). 10%盐酸羟胺溶液 (还原剂) 醋酸缓冲溶液. 3mol/ml HCl. 1mol/ml NaOH. 五、实验设计方案 （一）测定波长的选择： 在 50m L 容量瓶中，准确加入 040m L 铁标准溶液( I ) ，分别加入 1 m L 10 盐酸羟胺 溶液，摇匀后放置 2m i n 后，再加入 2m L 015邻二氮菲溶液、5 m L10m o l L 醋 3 3 Fe2+NNFe2+ 橘 红色 max邻二氮菲 钠溶液，以水稀释至刻度，摇匀。用 l c m 吸收池，以去离子水为空白溶液作参比溶液， 在不同波长( 从 440 一 560nm ) 下测定一次吸光度。绘制吸收曲线。 表 1 /nm 440 450 460 470 480 490 492 494 A /nm 496 498 500 502 504 506 508 510 A /nm 520 530 540 550 560 A 绘制 A 曲线 A /nm 图 1 由图 1 可以看出，随着波长的增加，吸光度值逐渐增加，在_nm 处有最大吸收，此 后随着波长的增加，吸光度值降低。因此选择_nm 为最佳吸收波长。 （二）邻二氮菲的用量对吸光度的影响 取 6 个 50 m L 容量瓶，各加 1 0- 3m ol L 标准铁溶液 2 m L 及 1 m L 10N H 20H H C I 溶液，摇匀，放置 2m i n 后，再分别加入 010 m L、0 30 m L、0 50 m L、10 m L、2 0 m L 及 4 0 m LO 15邻二氮菲溶液，和 5 m L l m ol L C H 3C O O N a 溶液，以去离子水稀释至标线，摇匀。在 722 型分光光度计上用 l c m 吸收池， 在选定的波长_nm ，测定溶液的吸光度 ( A ) 。绘制吸光度一显色剂用量曲线。 表 2 邻二氮菲用量的不同对吸光度的影响 V 邻二氮 菲 0.10 0.30 0.50 1.0 2.0 4.0 A 根据实验数据绘制 AV 曲线 A /nm 图 2 根据表 2 和图 2 可知邻二氮菲的用量在 1.0, 4.0 范围时，溶液的吸光度最大且恒 定不变，故选 2.0m L 作为其最佳用量。 （三）显色反应的时间 取一个 50 m L 容量瓶，加入 2m L 10 qm o l L 标准铁溶液，及 l m L 10N H 20H H C I 溶液，摇匀放置 2m i n 后，再加 2 m L 01 5邻二氮菲溶液，5 m L1.0mol/L 醋酸钠溶液，以水稀释至刻度，摇匀。在分光光度计上，在选定波长_nm 下，用 l c m 吸收池，以去离子水为空白溶液作参比溶液，测定吸光度以后每隔半小时再测定一次。 表 3 不同显色时间对溶液吸光度的影响 时间 0h 0.5h 1h 1.5h 2.0h 2.5h 3.0h 3.5h 4.0h A 根据实验数据绘制 At 曲线 A t/h 图 3 根据实验结果，为了实现快速并且准确分析，本实验选择室温下最佳测定时间为显色 后_h。 （四）溶液 pH 的选择 取 6 个 50m L 容量瓶，每个加入 2 m L 10- 3mol/L 标准铁溶液，及 l m L 10N H ：O H H C I 溶液，摇匀放置 2r a i n 后，再加 2 m L 015 邻二氮菲溶液，摇匀。分别从滴 定管中加入 10 m L 、12 m L 、14 m L、16m L、18 m L、20 m L 01m o l L N a O H 溶液，以去离子水稀释至标线，摇匀。在选定波长_nm 下，用 1c m 吸收池。以去离子 水为空白，测定各溶液的吸光。 表 4 不同酸度对吸光度的影响 V/mL 10 12 14 16 18 20 A pH 根据实验数据绘制 ApH 曲线 A pH 图 4 由图 4 中可知，在 pH 值为_范围内吸光度最大并基本恒定，故本实验取 pH 为_作为最佳显色 pH 。所以我们就可以得出加入 _m ol LN aO H 溶液时为最适宜用量。 （五）标准曲线的绘制 取 5 个 50m L 容量瓶，用刻度移液管分别加入 000 m L 、040 m L、0 80 m L 、120 m L、1 60 m L 、180 m L ( I I ) 标准铁溶液注( 含铁 100 ugm L) 。在分别加入 1m L 10N H 20 H H C l 溶液，摇匀放置 2m i n 后，再加 2 m L 015邻二氮菲溶液，5 m L 1 0m o l L 醋酸钠溶液，以去离子水稀释至刻度，摇 匀。在分光光度计上，在选定波长_nm 下，用 l c m 吸收池，以去离子水为空白溶液 作参比溶液，测定各溶液吸光度。以含铁量为横坐标，相应吸光度为纵坐标，绘制出工作 曲线。 表 5 标准曲线 V/mL 0.40 0.80 1.2 1.60 1.80 A 由标准铁溶液( I I ) 在波长_nm 处测定吸光度，做标准曲线。数据见表 5 和图 5，其 线性较好。回归方程为：A =_，r =_。 根据实验数据，以含铁量为横坐标，相应吸光度为纵坐标，绘制曲线 A C/ug/L 用移液管量取 20mL 新血宝样品溶液于 5 0 m L 容量瓶中，加入 l m L 10N H ：O H H C l 溶液，摇匀放置 2min 后，再加 2 m L015邻二氮菲溶液，5m L 10m o l L 醋酸钠溶液，以水稀释至刻度，摇匀。在分光光度计上，在选定波长_nm 下， 用 l cm 吸收池，去离子水为空白溶液作参比溶液，放置_h 后，测邻二氮菲的用量， 图 4 不同显色时间对溶液吸光度的影响定吸光度。测得吸光度为 A =_，由回归方 程为：A=_ ，得 C = _ug/m L，则自来水中铁的含量 _ug/m L： 六、实验结论： 本实验的最佳实验条件是： 最大吸收波长为_nm ， 显色剂最佳用量为_m L ； 选择在室温