卵细胞浆单精子显微注射(icsi)治疗不育67个周期分析

卵细胞浆单精子显微注射(ICSI)治疗不育67个周期分析 【黑龙江虹桥医院】 摘要 目的：分析卵细胞浆内单精子显微注射授精 (ICSI)治疗 因少弱精及梗阻性无精症所致之不育症的临床效果。 方法：采用 GnRH 一 十 FSHhMG 十 HCG 促排卵，对成熟卵细胞 (M)进行显微 注射授精。受精卵体外培养3天后移植回子宫腔。结果：67个周期获成熟卵(M)586 个， 受精率7628。临床妊娠率2537。结论：ICSI 是治疗不育的有效方法。 常规体外受精一胚胎移植(1VFET) 治疗少弱精梗性无精所致之不育疗效较差，结果 常以成熟卵不能受精而失败ICSI 技术的出现使对上述原因的不育的治疗成为可能。我 院遗传与生殖研究所自1997年11月起开始采用 ICSI 技术治疗少弱精、梗阻性无精所致之不 育症67个周期，现报道如下。 1资料和方法 11资料来源 11*1研究对象 1997年 11月至2000年7月在我院遗传与生殖研究所采用 ICSI 治疗因男 性因素的不孕患者67个周期，平均年龄为：男，3412(24 、50) 岁，女3058(22”49) 岁。 ICSI 指征：(1) 少、弱精患者； (2)阻塞性无精症；(3)双方染色体检查正常。少弱18和梗阻 性无精症的诊断标准依据 WHO 不育夫妇标准检查与诊断手册，其中少弱精患者42个周期， 梗阻性无精症25个周期。 112卵子准备 按本所控制性超排卵方案诱导卵泡生长 C1当有两个直径18mm 主导卵泡时，给 hCGl0000IU(ProfasiSerono)36h 后经阴道超声引导下取卵。卵子在体外培养46h(HTF 培 养液加10HS)，在含80IU Hyaluronidase(Sigma，H3757)液中去除卵丘复合体，将出现第 一极体的成熟卵移入 Hepes 加 HTF 培养液中备用。 113精子准备 对少弱精者采用 Percoll 梯度离心法处理精子对梗阻性无精症者经睾丸手术穿刺取精， 采用直接洗精孵育。处理后的精子置于5的 CO 2培养箱中备用。 114ICSI 方法 采用 Olympus 一70倒置显微镜 (DIC 系统)和 EPPendorf 电动步进显微操作仪。显微 固定针和注射针采用 Cook IVFKHPIP1035、KMPIP1035。显微注射前先在 Falconl006培养皿中央加 3个5l PVP 微滴(PVP Sigma5288)除中间 PVP 外，2侧 PVP 各加少 许精于(10 20条HP)。用 HePes 加 HTF 培养液在 PVP 微荫的上下各做4个5l 的微滴， 加矿物油覆盖(Min-eral Oil， Sigma M8410)。将卵子移入培养 Hepes 加 HTF 培养液中。用 显微注射针制动精子尾部，确认精子被制动后吸入精子。用显微固定针固定卵子，使第一 极体位于612点时钟方位，吸入精子的显微注射针从3点时钟方位进入卵细胞浆内并回吸 胞浆，见凹陷的卵膜有回弹现象时，说明已刺入胞浆内，即注射精子入胞浆内。退出显微 注射针，并检查卵子形态是否正常。将已注射后的卵子移入 HTF 加10HS 中洗涤5次后在 37，5 的 CO2培养箱中培养至胚胎移植。 115检查受精和评签胚胎质量 显微注射授精16h 后，检查有无雌雄原核或第二极体出现。受精卵继续培养至72h(中 途不更换培养基)，技 Brian Dale 方法2评鉴胚胎质量。优质胚胎为12级胚胎即卵裂球大 小相等、碎片少于13。当胚胎碎片超过50，卵裂球大小相差明显时，该周期取消。 116胚胎移植和临床妊娠检查 胚胎移植以优质胚胎为主，移植时所用培养液条件与胚胎培养时相同。胚胎移植数目 依据病人年龄、胚胎质量等而有所不同。38岁以上不孕患者移植胚胎数量不超过5个，其他 不孕患者移植胚胎数量不超过4个。胚胎移植4周后，B 超检查见胎心博动为临床妊娠。 117统计方法：结果采用 x2检验，t 检验 P0 05差别有显著性。 2结果 21 67个 ICSI 治疗周期获卵数目及体外授精、胚胎质量。67个 ICSI 治疗周期获卵725 个其中成熟卵子586个(80 83) ，受精率7618，卵裂率 9396，获优质胚胎率 6905，共有17例获临床妊娠，临床妊娠率为2537。本组资料中。少弱精致不孕者 42例梗阻性无精症者25例。 3讨论 31 ICSI 的临床应用 1992年 Palermo G 等3首次将 ICSI 应用于临床并获得成功以来，已诞生了 ICSI 新生 儿近万名，从近年的文献对 ICSI 新生儿的随访分析，新生儿出生缺陷率没有超过自然妊娠 后的发生率。但由于 ICSI 时可以将来自父源性异常染色体的精子注射到正常卵子中，从而 遗传给子代。因此 ICSI 之前必须检查男性患者的染色体。 本文资料中显示男性不育组和不明原因不孕组在受精率、卵裂率、优质胚胎串、胚胎 移植数目和妊娠成功率方面存在显著性差别，这可能是经睾丸或附睾活检精子质量较差， 其精子成熟度、活力均低于正常射精的精子，尤其是在睾丸中获取的精子不活动的状态下， 挑选正常精子有一定困难，主时需作低渗试验，挑选尾部卷曲肿胀的精子注入卵细胞浆内 4，由于本组资料中，二组男性不育的精子制备方法不同，梗阻性无精子症的精子采用培 养基直接制备。在 ICSI 时，其注射精子过程可能将杂质带入卵细胞浆内，引起胚胎质量下 降。 32显微注射的操作 ICSI 时，显微注射针将精子准确注入卵细胞浆内，这是 ICSI 受精的基本条件之一。注 射针穿入卵膜时，可见到卵膜朝进针方向凹陷，回抽卵浆可以激活卵子，但不能回抽量太 多，导致 PVP 的进入。制动精子采用 Eppendorf 显微注射仪时，宜在培养皿底部快速压、 摩擦精子尾部。见精子不动和尾部有一明显折痕时，表明精子制动成功。关于精子注入部 位与第一极体的方位关系，大多数文献认为，第一极体612点时钟方位是对纺锤体损伤小 的部位，所以基本上采用该方位进针。本组后期的研究将进针方位改为711点时钟方位也 取得相同结果。 33移植胚胎数目 移植胚胎数目应依据 ICSI 病人条件及胚胎质量而定。两组移植胚胎数目相似(442土 104vs 470土108)，但梗阻性无精于症组优质胚胎数目低于少弱精组，妊娠率有降低 的趋势，由于本研究组病例数目较少，未发现显著性差异。 34影响 ICSI 成功的主要因素 影响 ICSI 的主要因素有：卵子质量； 精子质量； 显微注射操作。卵子质量将 直接影响受精和胚胎质量。采用高纯度的 FSH 或基因重组的 FSH 为主的超排卵方案可获 得优质的卵子。显微注射中卵膜弹性的好坏提示卵子的