微生物实验答案整理

1. 在进行高压蒸汽灭菌时，是否只要灭菌锅压力表到达所需的值时锅内就能获 得所需的灭菌温度？为什么？ 不是。灭菌温度是通过水和水蒸汽的压力提高锅内温度实现的；当灭菌锅内的 空气未排净或仅排出一半时，虽然压力表指示的数值与排尽空气时相同，但不 能、满足水蒸汽温度函数关系，所以锅内温度并未达到所需值。 2.在手提式高压灭菌锅的盖上有哪些部件？它们各起什么作用？ 部件：排气阀、安全阀和压力表。 作 用： 排 气 阀： 点 燃 煤 气 灯， 在 水 煮 沸 后， 排 出 锅 内 空 气 以 蒸 汽 代 替， 及 灭 菌 后， 压 力 降 至 表 头 零 压 后 打 开 排 气 阀， 消 除 锅 体 内 外 压 力 差。 安全阀：正常情况下，当压力超值时会自动放汽而降压与避险。 压力表：指示压力显示。 3.高压蒸汽灭菌过的操作有哪几个步骤？每一步骤应注意哪些问题？ 步骤：加水、装料、加盖、排气、升压、保压、降压、取料和灭菌后处理。 注意： 加水：在放入灭菌料桶前，加水至与隔架圈同样高度为止。若锅体 内无水或水量不够均会在灭菌时引起重大事故。 装 料： 放 置 装 有 培 养 基 的 器 皿 时， 防 止 其 内 液 体 倾 倒 或 溢 出。 瓶 塞 不 应 贴 靠 料 桶 壁， 以 防 锅 体 降 压 时 产 生 的 冷 凝 水 沾 湿 棉 塞， 或 渗 透 棉 塞 进 入 培 养 基 等 灭 菌 物 品 中。 加 盖： 采 用 对 角 方 式 同 时 两 两 拧 紧 锅 体 与 锅 盖 间 的 螺 栓， 使 六 只 螺 栓 拧 紧 的 锅 盖 各 方 受 力 均 衡 并 使 锅 体 完 全 密 闭。 在 灭 菌 锅 加 热 时 应 及 时 开 启 排 气 阀。 排气：待空气排尽后，才可关闭排气阀继续加热。 升压：确定锅内空气是否排尽，十分重要。排尽后即可关闭排气阀。 保 压： 当 锅 内 压 力 到 达 所 需 压 力 时， 控 制 热 源， 维 持 压 力 至 所 需 时 间。 降 压： 达 到 灭 菌 时 间 后， 立 即 关 闭 热 源， 锅 内 压 力 降 至 表 头 零 压 后， 在 打 开 排 气 阀。 否 则 锅 内 压 力 突 然 下 降， 使 瓶 装 培 养 基 或 其 他 液 体 因 压 力 瞬 间 下 降 而 发 生 复 沸 腾， 造 成 事 故。 取 料： 由 于 取 料 时， 锅 内 温 度 及 蒸 汽 很 烫， 故 取 料 时 一 定 要 防 止 手 及 其 他 部 位 的 皮 肤 烫 伤。 灭 菌 后 处 理： 灭 菌 完 毕， 必 须 倒 掉 锅 内 剩 余 水 并 擦 干， 以 免 日 久 铝 质 装 料 通 被 腐 蚀。 4.革兰氏染色的原理是什么？ 该染色法所以能将细菌分为 G+菌和 G-菌，是由这两类菌的细胞壁结构和成分的 不同所决定的。 G-菌的细胞壁中含有较多易被乙醇溶解的类脂质，而且肽聚糖层较薄、交联度 低，故用乙醇或丙酮脱色时溶解了类脂质，增加了细胞壁的通透性，使初染的 结晶紫和碘的复合物易于渗出，结果细菌就被脱色，再经蕃红复染后就成红色。 G+菌细胞壁中肽聚糖层厚且交联度高，类脂质含量少，经脱色剂处理后反而使 肽聚糖层的孔径缩小，通透性降低，因此细菌仍保留初染时的颜色，呈现蓝紫 色。 5.在革兰式染色试验中，为什么会出现假阳性和假阴性？如何避免？ 革兰氏染色成败的关键是脱色时间，如脱色过度，革兰氏阳性菌也可被脱色而 误认为是革兰氏阴性菌。如脱色时间过短，革兰氏阴性菌也会被误认为是革兰 氏阳性菌。脱色时间的长短还受涂片之厚薄、脱色时玻片晃动的快慢及乙醇用 量多少等因素影响，难以严格规定。一般可用已知革兰氏阳性菌和革兰氏阴性 菌做练习，以掌握脱色时间。当要确证一个未知菌的革兰氏反应时，应同时做 一张已知革兰氏阳性菌和阴性菌的混合涂片，以资对照。 6.在微生物学实验中，常用于配制固体培养基的凝固剂是什么？它有哪些特性？ 如何使用？ 琼脂。特性： 化学成分单一且无营养价值，不影响培养基的本身的营养物质配 比和菌种生长；遇热可融化冷却即呈凝固态，且透明度高黏着力强耐加压灭菌 能力强，利于实验操作；分解性罕见，不会影响实验结果；常用浓度 1%2%， 经济节约。 使用：在液体培养基中加入适量的琼脂（1%2%）即可。 7.当物镜由低倍转到油镜时，随着放大倍数的增加，视野的亮度是增加还是减 弱？应如何调节？ 减弱。可以增加辅助光源的亮度来调整视野亮度。或调节聚光镜。 8.血球计数板计数时，计数室内如有气泡会对结果产生怎样的影响？如何避免 产生气泡？ 将影响菌悬液的随机分布而使计数产生误差。 吸取菌悬液滴加在盖玻片与计数板的边缘缝隙处，让菌液沿盖玻片与计数板间 的缝隙渗入计数室以避免产生气泡。 9.在革兰式染色试验中，不经复染这一步，能否区别革兰氏阳性细菌和革兰氏 阴性细菌？为什么？ 可以。因为脱色后 G+是紫色的而 G-就已经没有颜色了，这时，其实已经可以区 分了，但是如果不经复染的话，镜检时看不清 G-的细胞形态，但可以区分。 10.简述从环境中分离具有水解淀粉酶活性的芽孢杆菌的主要步骤。 1，样本采集：采集周围有花草的成颗粒状的离地表 10cm 左右的土壤 2，目的菌种的富集：取 15g 土壤加入 250ml 烧杯中，再加入 40ml 的无 菌水振荡 10min 制成土壤混悬液，用无菌移液管吸取 10ml 土壤悬液加入富集 培养基中，置于 37的恒温培养箱中培养 24h 在 8590水浴锅中加热 10min，杀灭菌体使芽孢得到富集 3，稀释涂布 梯度稀释：取 5 支加入 4ml 无菌水的试管，在一号试管中加入上述菌液 1ml 混匀，此时菌液稀释 10 倍；取一号试管中菌液 1ml 加入二号试管中混匀，此 时菌液稀释 10-2 倍；其余试管依次类推 涂布平板：用一支新的无菌枪头，由低浓度土壤稀释液中吸取 100ml 对号较均 匀地倒入已标记好稀释浓度的选择培养基上（在此之前各试管要摇匀） ，用灼烧 冷却后的无菌玻璃棒涂匀。每个浓度做 1 个平板。在 37下恒温培养 24h 芽孢杆菌的菌落扁平、边缘不整齐、白色、表面粗糙皱褶。 4，淀粉水解酶的鉴定 待菌落长出之后，滴加碘液，在菌落周围有透明圈证明芽孢杆菌产淀粉酶。 5，革兰氏染色，镜检 芽孢杆菌经革兰氏染色后成紫色 6，复筛：酶活力的测定 用游标卡尺分别测量透明圈和菌落的直径。根据两者比值大小初步确定淀粉酶 活性的高低。筛出酶活力最高的菌种。 11.利用加压蒸汽对培养基进行灭菌时，有何不利影响？如何防止？ 灭菌可能某些不耐热的物质受到破坏，如使糖类形成氨基糖、焦糖。还可能使 磷酸盐、碳酸盐与某些阳离子结合形成难溶性复合物而生成沉淀。 生产上可以把糖类物质用连消的方法，可以减少有害物质生成。培养基中加入 螯合剂，可以减少沉淀的生成。 12.V.P 试验的目的和原理分别是什么？ 目的：了解鉴别不同肠杆菌科各菌属的乙酰甲基甲醇试验原理，并掌握其操作 方法。 原理：某些细菌在葡萄糖蛋白胨水培养液中能分解葡萄糖产生丙酮酸，丙 酮酸缩合，脱羧成乙酰甲基甲醇，后者在强碱环境下，被空气中氧，氧化为二 乙酰，二乙酰与蛋白胨中的胍基生成红色化合物，称 VP（+）反应。 13.简述超净工作台在使用时主要的操作步骤。 1，检查超净工作台操作环境如环境温度、空气质量、电源灯，登记使用信 息； 2 ， 将 实 验 需 要 的 器 材 摆 在 工 作 台 台 面 上， 灭 过 菌 的 培 养 基 等 放 在 左 侧， 工 具 放 在 右 侧； 3，拉下玻璃挡板，开启紫外灯照射 30min 进行表面灭菌； 4， 30min 后关闭紫外灯，