HPV检测目的及最佳检测方法ppt课件

HPV病毒检测的目的 及最佳检测方法 1、 HPV检测的目的是什么？ 2、 HPV检查的最佳方法检查的最佳方法 ？ 3、德同产品介绍 2 主要内容 只是 为了查有没有 HPV病毒感染？ 是 为了查 HPV感染型别，检测型别 越多越好？ 是 为了发现已经存在的为了发现已经存在的 CIN2+病变病变 和预和预 CIN2+ 的的 风险人群？风险人群？ 3 HPV检测的目的是什么？ 专家对 HPV检测是否要临床验证如何看待？ HPV检测的目的是什么？ 1个 HIV/HBV = AIDS/HBV 1个 HPV CIN或宫颈癌 （ 80-90%的女性 HPV感染是一过性的，可在 6-24个月通过自体免疫清除） 高危型 HPV持续感会导致宫颈癌 从 HPV感染到宫颈癌，一般需要 10 20年 高分析敏感度 检测与临床无关的病毒水 平（假阳性） 一过性的感染会自身清除 恢复阶段：免疫响应 早期感染会自身清除 Snijders et al. Journal of Pathology 2003; 201:1-6 HPV检测的目的是什么？ HPV病毒含量与临床病变的关系 CIN病变 进展为高级病变 无 CIN病变 CIN转归 WHO指南对于 HPVCutoff有明确推荐 检测 阳性判断值 6 WHO guidelines for screening and treatment of precancerous lesions for cervical cancer prevention. World Health Organization 2013 l 阳性判断值（ Cutoff）的设定，在 2013年的 WHO宫颈癌筛查和管理 指南中是有具体建议的，其推荐高危型 HPV 检测 cut-off 值 1.0 pg/ml HPV检测的目的是什么？ HPV检测的目的是什么？ HPV检测的目的是什么？ 7 n 不再是单纯的病毒检测，而是强调 “临床 ”，不再是制造商说了算，而是临床 说了算 n 阳性判断标准是要获得理想临床敏感度和特异度的临界值，制造商不能仅凭 简单的病毒检测数据来制定，建议使用 ROC曲线的方式进行评估，这需要大 量临床检测数据才能最终找到理想的临界值 2015年 CFDA针对 HPV检测试剂阳性判断值的规定： 临床灵敏度特异度的 Cutoff值 HPV检测的目的是什么？ 8 2015年欧洲 IPV大会：宫颈癌筛查 HPV检测目的 l HPV检测不是为了检测病毒，不是一过性感染，而是检测感染病毒后的进展风险 l HPV检测 需要关注临床敏感度 ，最大化的保护低风险人群，最大化的辨别高风险人群 2015 IPV Conference， Mark. Stoler 2016年 CSCCP会议 Greater China Commerical Summit 9 n HPV检测不是仅仅为了检出 HPV感染，而是为了发现已经存在的 CIN2+病变和预测 CIN2+的风险； n 对于 HPV检测来说，最重要的是临床灵敏度和阴性预测值 HPV检测的目的是什么？ WHO / IRAC 明确检测 13种 HPV Title, Location, Date 1 0 n 从流行病学和致癌机制证据方面， WHO/IRAC 明确检测 13种 HPV型别： HPV16、 18、 31、 33、 35、 39、 45、 51、 52、 56、 58、 59、 68 最强的致癌型别，几 个致癌位点已经明确 充足流行病学证据证 实会导致宫颈癌 缺乏宫颈癌流行病学 证据，但从致癌机制 上有强的证据支持 2009 WHO IARC Special Report Policy A review of human carcinogens Part B 2015年中国 CFDA明确 HPV检测型范围 1 1 高危型 13种 ： HPV16、 18、 31、 33、 35、 39、 45、 51、 52、 56、 58、 59、 68 若可检测的 HPV基因型别不能涵盖上述 13种高危型，则 可能造成阴性预期值无法达到临床要求，因此不能用于 宫颈癌筛查。 -不能少！ 可包含不确定其风险的 “中等风险型 ”5种： HPV26、 53 、 66、 73、 82 另外最多可包含 5种 不确定风险的 HPV 型别 宫颈癌相关检测必须 包含 13种高危 HPV 型别 n HPV检测型别太少的产品如只检测 5种 型别、 2种 型别（如 HPV16/18）等，将 不能再注册 HPV检测的目的是什么？ HPV检测的目的是什么？ Title, Location, Date 1 2 如申报的宫颈癌相关 HPV核酸检测产品涉及上述 18种以外 的其他 HPV基因型，则需提出明确理由和依据 且应得到国际有关权威机构的文献支持。 不建议将低危型 HPV检测用于宫颈癌筛查 若申请人提出低危型 HPV检测相关产品注册， 则应详细解 释其临床意义和适应症，并提供充分的证据 。 限制申报其他型 HPV 限制申报低危型 HPV n 不能盲目的追求过多的 HPV检测型别 n 不建议将低危型 HPV检测用于宫颈癌筛查 中国 CFDA明确限制低危型 HPV检测 2015最新 CFDA指导原则以服务临床为 最终目的 1 3 设定与临 床风险相 关的阳性 判断标准 Cutoff 阳性判 断值 以 CIN2+ 为临床终 点的敏感 度和特异 度 临床敏 感度、 特异度 初筛 联合筛 查 ASCUS 分流 临床适 应症 一项检测技术，要想满足以上要求，必须基于长时间大量的临床验证才能实现 2015年 CFDA新的指导原则，从临床目的出发，精确注册标准要求 答案： 只是 为了查有没有 HPV病毒感染？ NO 是 为了查 HPV感染型别，检测型别越 多越好？ NO 是 为了发现已经存在的 CIN2+病变和 预 CIN2+ 的风险 人群 ？ yes 14 HPV检测的目的是什么？ 1、 HPV检测的目的是什么？ 2、 HPV检查的最佳方法检查的最佳方法 ？ 3、德同产品介绍 15 主要内容 HPV检查的最佳方法 直接核酸检测 （无需 PCR实验室） n 杂交捕获技术 （ HC2、 DH1、 DH2、 DH3） n 酶切信号放大法 （ Cervista） 核酸扩增后检测 PCR类技术 （需 PCR实验室） n 膜杂交法 n 基因芯片法 n 反向点杂交法 n 流式荧光杂交法 n 荧光探针法 HPV DNA检测 技 术 分 类 HPV检查的最佳方法检查的最佳方法 杂交捕获技术 （ HPV检测的金标准） 产品 德国凯杰的： HC2 杭州德同的： DH2、 DH3 17 HPV检查的最佳方法 杂交捕获技术 的三大优势： 1、独特的探针技术： 14 种全长 8000RNA 探针，避免因 区域片段（如 L1 区）丢失造成的假 阴性 2、无需 DNA提取，无需核酸扩增，有效 避免因环境因素造 成的假阳性 3、统一的临 床 判 定 标 准 1.0pg/ml ，避 免 因方法 学灵敏度过高产生的假阳性，结果重 复性好，准确可靠。 18 HPV检查的最佳方法 杂交捕获法独特的探针技术 HPV病毒基因组为环状双链 DNA，含有 8000个碱基对 德同 DH系列 HPV 检测 “ 全长鸡尾酒 ”探针技术 HPV18 8000bp，基于全长，涵盖 HPV DNA所 有区域 2 12种不同型别探针混合 准确，不漏诊 Cobas HPV Emerging Issues on HPV Infections: From Science to Practice, Monsonego 2006 HPV 病毒基因 L1片段缺失 PCR中 -球蛋白的竞争 -globin -globin -globin-globin -globin -globin -globin HPV HPV HPV HPV HPV HPV HPV -globin HPV HPV -globin 反应过程中的竞争会导致假阴性结果 “-球蛋白和 HPV以共同引物 L1片段进行扩增，这样会降 低 HPV检测的敏感度 ” Coutlee et al. JCM 2002; 40(3): 902-907 PCR导致假阴性的原因 n 不同 HPV型别扩增效率不同 n 如果 L1片段缺失，检测失败 (整合型 HPV) n 通用引物会和低危型 HPV结合，抑制了目 标高危型别的扩增 n 内指控（ Beta-globin）会抑制 HPV扩增 n 样本抑制 (有 5的样品丢失因出现抑制而 无法扩増 ) PCR检测可能导致假阳性结果 u 检测与临床不相关的感染 u 样本间的污染 缺乏统一的判定标准 结果受主观因素影响 杂交捕获 PCR 经临床验证的同一判定标准 1.0pg/ml 仪器判读、结果客观可靠 统一的判定标准 HPV检查的最佳方法 为何要明确 “临床灵敏度和临床特异度的 Cutoff值 ” ？ 2 6 2015 IPV Conference， Mark. Stoler n 参考参考 2015年世界年世界 IPV大会：大会： n 理想的临床灵敏度和特异度的临界值（ Cutoff），即及能够保证对 CIN2的病人具有非常高的检出率的同时，又可以 避免因分析敏感度过高而造成的假阳性 n 临床敏感度与疾病进展风险挂钩 n 分析敏感度与是否存在病毒感染挂钩： PCR过于敏感的分析敏感度，会将病毒含量的人判断为阳性 HPV检查的最佳方法 Adapted from Snijders et al. Journal of Pathology 2003; 201:1-6 分 HPV检查的最佳方法 析敏感度与临床敏感度 n 杂交捕获 HPV DNA检测为阴性时并 不代表体内没有 HPV，表明样品中 HPV含量不足 5000拷贝 . n 杂交捕获 HPV DNA检测为阳性时（ 高于以上标准）可以预测未来 8-10 内患 CIN2/3或者进展为更高级别病 变的风险 n 短暂及一过性的感染会通过自身免疫力 清除 n PCR 方法检测 HPV的分析敏感度可能 10 拷贝 区别：分析敏感度与临床敏感度 分析敏感度 PCR 方法的分析敏感度达到 10个拷贝 /ml 阳性结果：可能没有临床相关性 临床敏感度 杂交捕获的分析阈值经临床验证为 5,000 个拷贝 /ml 经临床证实：高度的阴性预测值 q 样本中能检测出的病毒最低水平 q 也被称作检测极限 (LOD) q 统计学意义：检测结果与零的区分 q 以临床病变为终点指征，检测出高度病变的敏 感度 (CIN3+ / SCC) q 初筛时，能够检测出 CIN2或宫颈癌的比例 q 分析阈值必须得到严格的验证 HPV检查的最佳方法检查的最佳方法 杂交捕获技术 （ HPV检测的金标准） 产品 德国凯杰的： HC2 杭州德同的： DH2、 DH3 29 HPV检查的最佳方法 1、 HPV检测的目的是什么？ 2、 HPV检查的最佳方法检查的最佳方法 ？ 3、德同产品介绍 30 主要内容 杭州德同 DH系列 产 品 利用基因杂交、 化学发光、信号 放大的原理在分 子水平检测 WHO 认可的 14种高危 型 -HPV 病毒 DNA 最新 “2+12 型 ” 检测设计 (HPV16/ 18 与 其他 12种型别检 测 ) 德同产品原理 -新一代杂交捕获技术 DH产品系列产品系列 可检测的高危型可检测的高危型 HPV型别型别 DH2 HPV-16, 18, 31, 33, 35, 39, 45, 51, 52, 56, 58, 59, 66, 68 DH3 HPV-16, 18 HPV-31, 33, 35, 39, 45, 51, 52, 56, 58, 59, 66, 68 杭州德同 DH系列 产 品 具有 48T、 96T两种规格 半自动检测仪器 全自动检测仪器 杭州德同 DH系列产品检测仪器 DH产 品与 HC2的 临 床比 对 临床比对临床比对 HC2 合计合计 Kappa系数系数 (95%CI)阳性阳性 阴性阴性 DH2 阳性阳性 980 4 984 0.9864 （ 97.70%- 99.58%）阴性阴性 4 415 419 合计合计 984 419 140 3 阳性符合率阳性符合率 （ 95%CI ） 99.59%（ 98.96%-99.89%） 阴性符合率阴性符合率 （ 95%CI ） 99.05%（ 97.57%-99.74%） 总符合率总符合率 （ 95%CI ） 99.43%（ 98.88%-99.75%） 临床比对临床比对 HC2 合计合计 Kappa系数系数 (95%CI)阳性阳性 阴性阴性 DH3 阳性阳性 971 7 978 0.9662 （ 95.14%- 98.09%）阴性阴性 13 413 426 合计合计 984 420 140 4 阳性符合率阳性符合率 （ 95%CI ） 98.68%（ 97.75%-99.29%） 阴性符合率阴性符合率 （ 95%CI ） 98.33%（ 96.60%-99.33%） 总符合率总符合率 （ 95%CI ） 98.58%（ 97.81%-99.13%） 孙小伟 等， 中华肿瘤防治杂志 2016年 2月 第 23卷 第 3期 137-140 河南新密 “ 两癌 ” 筛查项目 DH2对 CIN2+的检出率显著高于巴氏涂片和 VIA/VILI Cobas HPV DH3 HPV P value CIN2+ Sensitivity 123/135(91.1%,85.0-95.3) 126/135(93.3%,87.7-96.9) 0.650 Specificity 9667/10534(91.8%,91.2- 92.3) 9604/10534(91.2%,90.6- 91.7) 0.120 PPV 123/990(12.4%,10.4-14.6) 126/1056(11.9%,10.0- 14.0) 0.736 NPV 9667/9679(99.9%,99.8- 99.9) 9604/9613(99.9%,99.8- 100) 0.663 CIN3+ Sensitivity 77/83(92.8%,84.9-97.3) 81/83(97.6%,91.6-99.7) 0.277 Specificity 9673/10586(91.4%,90.8- 91.9) 9611/10586(90.8%,90.2- 91.3) 0.135 PPV 77/990(7.8%,6.2-9.6) 81/1056(7.7%,6.1-9.4) 0.934 NPV 9673/9679(99.9%,99.9- 100.0) 9611/9613(99.9%,99.9- 100) 0.175 临床试验显示： DH3具有与 Cobas相同预测高级别病变的效能 浙江龙游 10669名健康妇女 接受 Cobas和 DH3筛查结果比对 Cobas HPV DH3 HPV P value CIN2+ Sensitivity 108/135(80.0%,72.3-86.4) 114/135(84.4%,77.2-90.1) 0.426 Specificity 10143/10485(96.7%,96.4- 97.1) 10111/10485(96.4%,96.1- 96.8) 0.238