HPV检测目的及最佳检测方法ppt课件_第1页
HPV检测目的及最佳检测方法ppt课件_第2页
HPV检测目的及最佳检测方法ppt课件_第3页
HPV检测目的及最佳检测方法ppt课件_第4页
HPV检测目的及最佳检测方法ppt课件_第5页
已阅读5页,还剩34页未读 继续免费阅读

下载本文档

版权说明:本文档由用户提供并上传,收益归属内容提供方,若内容存在侵权,请进行举报或认领

文档简介

HPV病毒检测的目的 及最佳检测方法 1、 HPV检测的目的是什么? 2、 HPV检查的最佳方法检查的最佳方法 ? 3、德同产品介绍 2 主要内容 只是 为了查有没有 HPV病毒感染? 是 为了查 HPV感染型别,检测型别 越多越好? 是 为了发现已经存在的为了发现已经存在的 CIN2+病变病变 和预和预 CIN2+ 的的 风险人群?风险人群? 3 HPV检测的目的是什么? 专家对 HPV检测是否要临床验证如何看待? HPV检测的目的是什么? 1个 HIV/HBV = AIDS/HBV 1个 HPV CIN或宫颈癌 ( 80-90%的女性 HPV感染是一过性的,可在 6-24个月通过自体免疫清除) 高危型 HPV持续感会导致宫颈癌 从 HPV感染到宫颈癌,一般需要 10 20年 高分析敏感度 检测与临床无关的病毒水 平(假阳性) 一过性的感染会自身清除 恢复阶段:免疫响应 早期感染会自身清除 Snijders et al. Journal of Pathology 2003; 201:1-6 HPV检测的目的是什么? HPV病毒含量与临床病变的关系 CIN病变 进展为高级病变 无 CIN病变 CIN转归 WHO指南对于 HPVCutoff有明确推荐 检测 阳性判断值 6 WHO guidelines for screening and treatment of precancerous lesions for cervical cancer prevention. World Health Organization 2013 l 阳性判断值( Cutoff)的设定,在 2013年的 WHO宫颈癌筛查和管理 指南中是有具体建议的,其推荐高危型 HPV 检测 cut-off 值 1.0 pg/ml HPV检测的目的是什么? HPV检测的目的是什么? HPV检测的目的是什么? 7 n 不再是单纯的病毒检测,而是强调 “临床 ”,不再是制造商说了算,而是临床 说了算 n 阳性判断标准是要获得理想临床敏感度和特异度的临界值,制造商不能仅凭 简单的病毒检测数据来制定,建议使用 ROC曲线的方式进行评估,这需要大 量临床检测数据才能最终找到理想的临界值 2015年 CFDA针对 HPV检测试剂阳性判断值的规定: 临床灵敏度特异度的 Cutoff值 HPV检测的目的是什么? 8 2015年欧洲 IPV大会:宫颈癌筛查 HPV检测目的 l HPV检测不是为了检测病毒,不是一过性感染,而是检测感染病毒后的进展风险 l HPV检测 需要关注临床敏感度 ,最大化的保护低风险人群,最大化的辨别高风险人群 2015 IPV Conference, Mark. Stoler 2016年 CSCCP会议 Greater China Commerical Summit 9 n HPV检测不是仅仅为了检出 HPV感染,而是为了发现已经存在的 CIN2+病变和预测 CIN2+的风险; n 对于 HPV检测来说,最重要的是临床灵敏度和阴性预测值 HPV检测的目的是什么? WHO / IRAC 明确检测 13种 HPV Title, Location, Date 1 0 n 从流行病学和致癌机制证据方面, WHO/IRAC 明确检测 13种 HPV型别: HPV16、 18、 31、 33、 35、 39、 45、 51、 52、 56、 58、 59、 68 最强的致癌型别,几 个致癌位点已经明确 充足流行病学证据证 实会导致宫颈癌 缺乏宫颈癌流行病学 证据,但从致癌机制 上有强的证据支持 2009 WHO IARC Special Report Policy A review of human carcinogens Part B 2015年中国 CFDA明确 HPV检测型范围 1 1 高危型 13种 : HPV16、 18、 31、 33、 35、 39、 45、 51、 52、 56、 58、 59、 68 若可检测的 HPV基因型别不能涵盖上述 13种高危型,则 可能造成阴性预期值无法达到临床要求,因此不能用于 宫颈癌筛查。 -不能少! 可包含不确定其风险的 “中等风险型 ”5种: HPV26、 53 、 66、 73、 82 另外最多可包含 5种 不确定风险的 HPV 型别 宫颈癌相关检测必须 包含 13种高危 HPV 型别 n HPV检测型别太少的产品如只检测 5种 型别、 2种 型别(如 HPV16/18)等,将 不能再注册 HPV检测的目的是什么? HPV检测的目的是什么? Title, Location, Date 1 2 如申报的宫颈癌相关 HPV核酸检测产品涉及上述 18种以外 的其他 HPV基因型,则需提出明确理由和依据 且应得到国际有关权威机构的文献支持。 不建议将低危型 HPV检测用于宫颈癌筛查 若申请人提出低危型 HPV检测相关产品注册, 则应详细解 释其临床意义和适应症,并提供充分的证据 。 限制申报其他型 HPV 限制申报低危型 HPV n 不能盲目的追求过多的 HPV检测型别 n 不建议将低危型 HPV检测用于宫颈癌筛查 中国 CFDA明确限制低危型 HPV检测 2015最新 CFDA指导原则以服务临床为 最终目的 1 3 设定与临 床风险相 关的阳性 判断标准 Cutoff 阳性判 断值 以 CIN2+ 为临床终 点的敏感 度和特异 度 临床敏 感度、 特异度 初筛 联合筛 查 ASCUS 分流 临床适 应症 一项检测技术,要想满足以上要求,必须基于长时间大量的临床验证才能实现 2015年 CFDA新的指导原则,从临床目的出发,精确注册标准要求 答案: 只是 为了查有没有 HPV病毒感染? NO 是 为了查 HPV感染型别,检测型别越 多越好? NO 是 为了发现已经存在的 CIN2+病变和 预 CIN2+ 的风险 人群 ? yes 14 HPV检测的目的是什么? 1、 HPV检测的目的是什么? 2、 HPV检查的最佳方法检查的最佳方法 ? 3、德同产品介绍 15 主要内容 HPV检查的最佳方法 直接核酸检测 (无需 PCR实验室) n 杂交捕获技术 ( HC2、 DH1、 DH2、 DH3) n 酶切信号放大法 ( Cervista) 核酸扩增后检测 PCR类技术 (需 PCR实验室) n 膜杂交法 n 基因芯片法 n 反向点杂交法 n 流式荧光杂交法 n 荧光探针法 HPV DNA检测 技 术 分 类 HPV检查的最佳方法检查的最佳方法 杂交捕获技术 ( HPV检测的金标准) 产品 德国凯杰的: HC2 杭州德同的: DH2、 DH3 17 HPV检查的最佳方法 杂交捕获技术 的三大优势: 1、独特的探针技术: 14 种全长 8000RNA 探针,避免因 区域片段(如 L1 区)丢失造成的假 阴性 2、无需 DNA提取,无需核酸扩增,有效 避免因环境因素造 成的假阳性 3、统一的临 床 判 定 标 准 1.0pg/ml ,避 免 因方法 学灵敏度过高产生的假阳性,结果重 复性好,准确可靠。 18 HPV检查的最佳方法 杂交捕获法独特的探针技术 HPV病毒基因组为环状双链 DNA,含有 8000个碱基对 德同 DH系列 HPV 检测 “ 全长鸡尾酒 ”探针技术 HPV18 8000bp,基于全长,涵盖 HPV DNA所 有区域 2 12种不同型别探针混合 准确,不漏诊 Cobas HPV Emerging Issues on HPV Infections: From Science to Practice, Monsonego 2006 HPV 病毒基因 L1片段缺失 PCR中 -球蛋白的竞争 -globin -globin -globin-globin -globin -globin -globin HPV HPV HPV HPV HPV HPV HPV -globin HPV HPV -globin 反应过程中的竞争会导致假阴性结果 “-球蛋白和 HPV以共同引物 L1片段进行扩增,这样会降 低 HPV检测的敏感度 ” Coutlee et al. JCM 2002; 40(3): 902-907 PCR导致假阴性的原因 n 不同 HPV型别扩增效率不同 n 如果 L1片段缺失,检测失败 (整合型 HPV) n 通用引物会和低危型 HPV结合,抑制了目 标高危型别的扩增 n 内指控( Beta-globin)会抑制 HPV扩增 n 样本抑制 (有 5的样品丢失因出现抑制而 无法扩増 ) PCR检测可能导致假阳性结果 u 检测与临床不相关的感染 u 样本间的污染 缺乏统一的判定标准 结果受主观因素影响 杂交捕获 PCR 经临床验证的同一判定标准 1.0pg/ml 仪器判读、结果客观可靠 统一的判定标准 HPV检查的最佳方法 为何要明确 “临床灵敏度和临床特异度的 Cutoff值 ” ? 2 6 2015 IPV Conference, Mark. Stoler n 参考参考 2015年世界年世界 IPV大会:大会: n 理想的临床灵敏度和特异度的临界值( Cutoff),即及能够保证对 CIN2的病人具有非常高的检出率的同时,又可以 避免因分析敏感度过高而造成的假阳性 n 临床敏感度与疾病进展风险挂钩 n 分析敏感度与是否存在病毒感染挂钩: PCR过于敏感的分析敏感度,会将病毒含量的人判断为阳性 HPV检查的最佳方法 Adapted from Snijders et al. Journal of Pathology 2003; 201:1-6 分 HPV检查的最佳方法 析敏感度与临床敏感度 n 杂交捕获 HPV DNA检测为阴性时并 不代表体内没有 HPV,表明样品中 HPV含量不足 5000拷贝 . n 杂交捕获 HPV DNA检测为阳性时( 高于以上标准)可以预测未来 8-10 内患 CIN2/3或者进展为更高级别病 变的风险 n 短暂及一过性的感染会通过自身免疫力 清除 n PCR 方法检测 HPV的分析敏感度可能 10 拷贝 区别:分析敏感度与临床敏感度 分析敏感度 PCR 方法的分析敏感度达到 10个拷贝 /ml 阳性结果:可能没有临床相关性 临床敏感度 杂交捕获的分析阈值经临床验证为 5,000 个拷贝 /ml 经临床证实:高度的阴性预测值 q 样本中能检测出的病毒最低水平 q 也被称作检测极限 (LOD) q 统计学意义:检测结果与零的区分 q 以临床病变为终点指征,检测出高度病变的敏 感度 (CIN3+ / SCC) q 初筛时,能够检测出 CIN2或宫颈癌的比例 q 分析阈值必须得到严格的验证 HPV检查的最佳方法检查的最佳方法 杂交捕获技术 ( HPV检测的金标准) 产品 德国凯杰的: HC2 杭州德同的: DH2、 DH3 29 HPV检查的最佳方法 1、 HPV检测的目的是什么? 2、 HPV检查的最佳方法检查的最佳方法 ? 3、德同产品介绍 30 主要内容 杭州德同 DH系列 产 品 利用基因杂交、 化学发光、信号 放大的原理在分 子水平检测 WHO 认可的 14种高危 型 -HPV 病毒 DNA 最新 “2+12 型 ” 检测设计 (HPV16/ 18 与 其他 12种型别检 测 ) 德同产品原理 -新一代杂交捕获技术 DH产品系列产品系列 可检测的高危型可检测的高危型 HPV型别型别 DH2 HPV-16, 18, 31, 33, 35, 39, 45, 51, 52, 56, 58, 59, 66, 68 DH3 HPV-16, 18 HPV-31, 33, 35, 39, 45, 51, 52, 56, 58, 59, 66, 68 杭州德同 DH系列 产 品 具有 48T、 96T两种规格 半自动检测仪器 全自动检测仪器 杭州德同 DH系列产品检测仪器 DH产 品与 HC2的 临 床比 对 临床比对临床比对 HC2 合计合计 Kappa系数系数 (95%CI)阳性阳性 阴性阴性 DH2 阳性阳性 980 4 984 0.9864 ( 97.70%- 99.58%)阴性阴性 4 415 419 合计合计 984 419 140 3 阳性符合率阳性符合率 ( 95%CI ) 99.59%( 98.96%-99.89%) 阴性符合率阴性符合率 ( 95%CI ) 99.05%( 97.57%-99.74%) 总符合率总符合率 ( 95%CI ) 99.43%( 98.88%-99.75%) 临床比对临床比对 HC2 合计合计 Kappa系数系数 (95%CI)阳性阳性 阴性阴性 DH3 阳性阳性 971 7 978 0.9662 ( 95.14%- 98.09%)阴性阴性 13 413 426 合计合计 984 420 140 4 阳性符合率阳性符合率 ( 95%CI ) 98.68%( 97.75%-99.29%) 阴性符合率阴性符合率 ( 95%CI ) 98.33%( 96.60%-99.33%) 总符合率总符合率 ( 95%CI ) 98.58%( 97.81%-99.13%) 孙小伟 等, 中华肿瘤防治杂志 2016年 2月 第 23卷 第 3期 137-140 河南新密 “ 两癌 ” 筛查项目 DH2对 CIN2+的检出率显著高于巴氏涂片和 VIA/VILI Cobas HPV DH3 HPV P value CIN2+ Sensitivity 123/135(91.1%,85.0-95.3) 126/135(93.3%,87.7-96.9) 0.650 Specificity 9667/10534(91.8%,91.2- 92.3) 9604/10534(91.2%,90.6- 91.7) 0.120 PPV 123/990(12.4%,10.4-14.6) 126/1056(11.9%,10.0- 14.0) 0.736 NPV 9667/9679(99.9%,99.8- 99.9) 9604/9613(99.9%,99.8- 100) 0.663 CIN3+ Sensitivity 77/83(92.8%,84.9-97.3) 81/83(97.6%,91.6-99.7) 0.277 Specificity 9673/10586(91.4%,90.8- 91.9) 9611/10586(90.8%,90.2- 91.3) 0.135 PPV 77/990(7.8%,6.2-9.6) 81/1056(7.7%,6.1-9.4) 0.934 NPV 9673/9679(99.9%,99.9- 100.0) 9611/9613(99.9%,99.9- 100) 0.175 临床试验显示: DH3具有与 Cobas相同预测高级别病变的效能 浙江龙游 10669名健康妇女 接受 Cobas和 DH3筛查结果比对 Cobas HPV DH3 HPV P value CIN2+ Sensitivity 108/135(80.0%,72.3-86.4) 114/135(84.4%,77.2-90.1) 0.426 Specificity 10143/10485(96.7%,96.4- 97.1) 10111/10485(96.4%,96.1- 96.8) 0.238

温馨提示

  • 1. 本站所有资源如无特殊说明,都需要本地电脑安装OFFICE2007和PDF阅读器。图纸软件为CAD,CAXA,PROE,UG,SolidWorks等.压缩文件请下载最新的WinRAR软件解压。
  • 2. 本站的文档不包含任何第三方提供的附件图纸等,如果需要附件,请联系上传者。文件的所有权益归上传用户所有。
  • 3. 本站RAR压缩包中若带图纸,网页内容里面会有图纸预览,若没有图纸预览就没有图纸。
  • 4. 未经权益所有人同意不得将文件中的内容挪作商业或盈利用途。
  • 5. 人人文库网仅提供信息存储空间,仅对用户上传内容的表现方式做保护处理,对用户上传分享的文档内容本身不做任何修改或编辑,并不能对任何下载内容负责。
  • 6. 下载文件中如有侵权或不适当内容,请与我们联系,我们立即纠正。
  • 7. 本站不保证下载资源的准确性、安全性和完整性, 同时也不承担用户因使用这些下载资源对自己和他人造成任何形式的伤害或损失。

评论

0/150

提交评论