吉林医药学院大学生科研基金

吉林医药学院大学生科研资金 申 请 书 项 目 名 称： 马齿苋对肝脏的保护作用及有效成分分析 申 请 者： 所属单位及专业： 电 话：电子信箱(E-mail): 研 究 起 止 时间： 2009 年 10 月-2010 年 6 月 吉 林 医 药 学 院 二九年九月制 项目名称 马齿苋对肝脏的保护作用及有效成分分析 经费总概算 5850 元 所属学科 预防医学 姓名 专业 学历层次 （职称） 研究过程中所承 担的工作 签字 预防医学 大学本科 实验设计 预防医学 大学本科 技术处理 预防医学 大学本科 动物饲养 预防医学 大学本科 数据分析 教授 指导老师 项目组主要 研究人员及 指导老师 1 项目简介（字数不超过 300 字） 软 枣 猕 猴 桃 ， 俗称“软枣子” ，生 于 阔 叶 林 或 针 阔 混 交 林 中 。 分 布 于 我 国 黑 龙 江 省 、 吉 林 省 、 山 东 省 及 华 北 、 西 北 以 及 长 江 流 域 各 省 区 ， 朝 鲜 、 日 本 、 俄 罗 斯 也 有 分 布 。 果 实 可 食 用 ， 营 养 价 值 很 高 ， 此果 VC 含量高于其他水果， 可称 VC 之王，同时含人体所需的氨基酸，VB，铁，镁等，尤其软枣猕猴桃里含 有猕猴桃碱、皂甙、黄酮类，对人体很有益处。有 强 壮 、 解 热 、 健 胃 、 止 血 等 功 能 ； 根 及 根 皮 对 消 化 道 癌 有 一 定 治 疗 和 抑 制 作 用 。 通过查阅大量的文献和 指导老师的悉心帮助，我们了解到目前对软枣猕猴桃抗氧化的研究还有待进一 步深入，进而确立了我们的研究课题，即软枣猕猴桃的化学成分及抗氧化能力 的研究，探索软枣猕猴桃在日常生活中的保健作用。 本实验以软枣猕猴桃果实为原料,探索软枣猕猴桃果实提取物对小鼠肝脏甘 油三酯（TG ） 、胆固醇（TC） 、谷草转氨酶（AST） 、谷丙转氨酶（ALT） 、丙二 醛（MDA ）含量及超氧化合物歧化酶（SOD）活力的影响 2 立项依据（包括项目的研究意义、国内外研究现状分析、查新情况、主要参 考文献等） 。 基础研究：着重结合国际科学研究发展趋势，论述项目的科学意义；应用 基础研究： 着重结合学科前沿、围绕国民经济和社会发展中的重要科技问题 ， 论述其应用情景；应用研究：着重结合国内外相关领域技术现状和发展趋势， 论述项目的应用价值；开发研究：着重结合项目主要技术特点、先进性等，比 较国内外同类研究现状，进行知识产权分析和市场前景预测，论述项目的社会 效益和经济效益。 研究意义： 马齿苋是我国各地习见的野生植物，作为中药，马齿苋有清热解毒、凉血 滑肠、健胃消积、消炎及利尿的功效。还具有较高的营养价值，被营养学家誉 为 21 世纪最有发展前途的绿色食品之一 ，是一种珍贵的野生植物资源。作为新 型的食物源，越来越引起人们的关注。同时现代生活中的不合理饮食所引起的 肝脏损伤，如：脂肪肝、肝硬化、肝癌等严重影响了人们的生活质量。因此探 讨对肝脏的保护作用，有着十分重要的意义。 马齿苋不但营养价值高，而且具有多种药用功效，对促进人体健康和增强 体质等大有裨益，在医药、保健和食品领域具有广阔的发展前景。目前对野菜 马齿苋的研究多局限在抗菌、镇痛、消炎、抗病毒、抗肿瘤、降血糖等方面， 对肝脏保护作用的研究尚少。本次课题是在参考了大量文献和动物实验的基础 上设计的，进一步研究马齿苋对肝脏的保护作用及有效成分分析，为野菜马齿 苋的进一步开发提供参考依据。 研究现状： 国内： 目前有实验研究证实：麦胚、显齿蛇葡萄、银杏、广枣、黄芪、葛根、山 楂、荞麦、苦瓜等所含有的黄酮类化合物有预防或治疗脂肪肝的功效。现已有 推测马齿苋中的黄酮类化合物有同种功效，但是未经实验研究证实。 其中脂肪肝研究中，卢新华等经实验表明苦菜总黄酮对四氯化碳、乙醇所 致肝损伤有明显保护作用，提示可能与苦菜总黄酮减少肝脏 GSH 耗竭，抑制肝 脂质过氧化作用有关。荞麦种子总黄酮能抑制喂饲胆固醇和高脂食物大鼠血清 TC 和 TG 的升高，抑制肝脏脂质过氧化，说明黄酮类化合物对脂肪肝有一定的 疗效。而且有科研人员研究表明其提取物可诱导肝癌 HepG-2 细胞凋亡，改变 细胞周期分布，从而抑制细胞增殖。 国外： 英国科研人员研究揭示，马齿苋叶所含大量-3系列的不饱和脂肪酸，能使 血管内皮细胞合成的抗炎物-前列腺素增多，使血小板形成的血栓素A2 减少、 血液黏度下降、抗凝血脂增多，从而起到预防血栓形成的作用，从而有效地预 防冠心病的发生。 美国科学家小诺曼赛勒姆发现马齿苋的钾含量较高，而钾在人体内可以很 好地配合蛋白质修复被破坏的组织和血管，减少中风的发生。 美国农业部的一个研究所，对马齿苋进行长期的研究后，发现马齿苋的茎叶 中含有“SL3-脂肪酸“ ，这种脂肪酸是形成细胞膜，尤其是脑细胞和眼细胞膜的 重要成份。过去认为这种脂肪酸只储存在脂性海鱼，如沙丁鱼、鲭鱼、秋刀鱼 等的体内。这一意外发现，为人类食谱增加了一味新的高营养食品来源。 新情况： （1）马齿苋的应用价值 马齿苋作为一种药食两用的野生蔬菜,具有丰富的营养和保健作用，在食品、 医药、饲料等方面都有广泛的应用。在临床上可用于治疗肠炎、痢疾、百日咳、 阑尾炎、疮疡、肿毒等多种炎症疾病；外用可治丹毒及蛇毒咬伤，素有“天然 抗生素的美称” 。此外马齿苋还有防治心脏病、冠心病、心绞痛、糖尿病、白癜 风、白发病、抗癌、降血压等作用。 （2）马齿苋的开发利用及前景展望 马齿苋对气候土壤的环境条件适应性很强，具有耐干旱，抗病虫害，易繁 殖，生命力强和生长较快的特性。在我国各地均有野生分布，在民间已有数千 年的应用历史。在现代，马齿苋已被卫生部划定为药食同源食物之一，它的开 发利用作为一项绿色工程，其发展前景非常广阔。目前，对马齿苋开发的品种 还很少，资源尚未充分利用。因此，进一步深入开展马齿苋药理及化学成分研 究，探讨其有效成分及其作用机制，为现代生活中野菜的开发提供参考依据有 着重要意义。 参考文献（近 35 年） 1 高莉、刘婕、隋彦辉、李佳，河南工业大学化学化工学院，450052 2 丁怀伟、姚佳琪、宋少江。马齿苋的化学成分和药理活性研究进展。沈阳 药科大学学报。2008， 3朱丽等：马齿苋的研究现状与综合开发利用。河北林果研究 2006.21（2） 4段玉峰，韩果萍，马齿苋多糖组分的分离纯化及抗氧化活性研究 J食品科 学，2005，26（3）：225-228 5牛广财，朱丹，马齿苋化学成分及其药理作用研究进展 J安徽农业科学， 2005，33（6）：1090-1092，47-50 6耿敬章 冯君琪 黄酮类化合物生理功能与应用研究 陕西理工学院生物科学 与工程学院 汉中 723001 7张俊平 王淑英 李小萍等水飞蓟对小鼠肝脏炎症损伤和肿瘤坏死因子的产生 及活性的影响 药学学报 8孙希云等 马齿苋总黄酮抗氧化性质的研究 沈阳农业大学学报 2006 02 37（1）：108-110 9罗丽萍等 薯蔓黄酮对 SD 大鼠降血脂作用研究 2005-26（1） 211-215 10刘树军 黄静娟 车念聪 非乙醇性脂肪肝发病机制研究 首都医科大学学报 2007 28（2）：216 11刘峰，陈钢，中医药治疗脂肪肝的临床与实验研究进展 安徽中医学院院 报 Vol.23，No.3 59-62 12腾宇，张秋菊，齐治家，中医药抗脂肪肝的研究进展 北京中医药大学学报， 中医临床版 2004 年，3 月第 12 卷 第 2 期 97-101 3 研究方案（包括研究目标、研究内容、拟解决的关键问题、采用的研究方法、技术路线、 实验方案、可行性分析、本项目的创新之处） 研究目标：马齿苋对肝脏有保护作用，能降低脂肪肝肝脏中甘油三酯（TG） 、胆固醇 （TC） 、丙二醛（MDA ）的含量，增强超氧化合物歧化酶（SOD）活力。 研究内容： （1） 探索马齿苋对大鼠因高脂膳食所造成的脂肪肝的预防和治疗作用，测定大鼠肝脏 甘油三酯（TG） 、胆固醇（TC） 、谷草转氨酶（AST ） 、谷丙转氨酶（ALT） 、丙二 醛（MDA）含量及超氧化合物歧化酶（SOD）活力； （2） 测定马齿苋中的黄酮类化合物、维生素 C、多糖、氨基酸等成分含量； （3） 肝组织切片观察：大鼠处死后取肝进行切片制作，观察肝组织形态学变化 拟解决的关键问题：马齿苋对大鼠肝脏起保护作用时的有效剂量 解决方案：先做预实验，摸索马齿苋对大鼠肝脏起保护作用时的有效剂量 采用的研究方法：马齿苋有效成分测定、大鼠脂肪肝动物模型、灌胃实验、血清测定、肝 组织切片观察 技术路线： 实 实验分组 大鼠脂肪肝模型 的建立 灌 胃 血清测定 数据整理及分析 组织切片观察 得出结论撰写论 文 验方案： （1）分组：取标准大鼠 60 只。按体重随机分为六组：即正常对照组、大鼠高脂乳 剂组、脂肪肝模型+马齿苋高剂量组、高脂乳剂+马齿苋低剂量组、高脂 乳剂+马齿苋中剂量组、高脂乳剂+马齿苋高剂量组。 （2）动物模型建立：室温 20-23,相对湿度 51%-65%，垫料经高压灭菌,每周换窝两 次,自由饮用饮用水,水瓶每周高压灭菌一次。组喂食常规饲料， 组饲喂常规饲料并以高脂乳剂 1 ml /100g 灌胃，马齿苋水提物灌胃低剂量组： 按 0.8g/100g 体重给予灌胃，每日一次；马齿苋水提物灌胃中剂量组：按 1.6g/100g 体重给予灌胃，每日一次；马齿苋水提物灌胃高剂量组:按 3.2g/100g 体重给予灌胃，每日一次，持续 30 天。 注：第组是在脂肪肝模型建成之后再进行马齿苋水提物灌胃，探索马齿苋 对脂肪肝的治疗效果；第组是脂肪肝模型建立和马齿苋水提物灌胃同时 进行，探索马齿苋对脂肪肝的预防作用。 （3）血清测定：禁食 1 天(不禁水) ,第二天清晨末次给药 1 h 后，取血检测甘油三酯 （TG） ，胆固醇（TC） ，谷草转氨酶（AST） ，谷丙转氨酶（ALT）,丙二醛 （MDA）含量及超氧化合物歧化酶（SOD）活力，记录数据。 （4）组织切片：将大鼠处死，分别取出各组肝组织用中性甲醛固定,石蜡包埋, HE 染色, 光镜下观察肝组织学的改变情况。 可行性分析 ： （1） 人群中有食用马齿苋之后血脂降低的现象； （2） 在预实验中已对马齿苋的营养成分进行了初步分析； （3） 营养教研室已提供此次实验所需器材及实验室，并全力保证实验顺利完成。 创新点： （1） 目前主要研究马齿苋的提取物以药物方式进行应用，把马齿苋以食疗方式进行 应用的研究尚少。 （2） 目前临床主要应用马齿苋的有效药理成分进行抗菌、抗病毒、抗肿瘤等，较少 用于防治高血脂、脂肪肝等。因此探索马齿苋对肝脏的保护作用，做到未病先 防，既病防变是此课题的创新点之一。 4 研究计划及预期进展（以半年为单位详细填写） 2009 年 11 月-12 月：资料查询及实验仪器准备； 2010 年 3 月- 6 月：大鼠脂肪肝模型的建立及血清测定、肝组织切片观察等； 2010 年 9 月-10 月：数据分析，撰写论文。 5 预期研究成果 （1）马齿苋对肝脏有保护作用，能降低脂肪肝肝脏中甘油三酯（TG） 、胆固醇（TC ） 、 丙二醛（MDA）的含量，增强超氧化合物歧化酶（SOD ）活力。 （2）发表论文，为野菜马齿苋的进一步开发提供参考依据。 6 经费预算 合计 5850 元 支出科目 金额（元） 计算根据及理由 项目业务费： 400 各种仪器的使用 实验材料费 3750 大鼠：2000 元；饲料：500 元；马齿苋：100 元；生理盐水： 50 元；资料查询与打印费：100 元；高脂乳剂：4