生物信息的传(下)

生物信息的传递（下）生物信息的传递（下） 从从 mRNA 到蛋白质到蛋白质 1 主要内容主要内容 4.1 遗传密码遗传密码三联子三联子 4.2 tRNA 4.3 核糖体核糖体 4.4 蛋白质合成的生物学机制蛋白质合成的生物学机制 4.5 蛋白质转运机制蛋白质转运机制 4.1 遗传密码遗传密码三联子三联子 密码（三联子密码，密码（三联子密码，codon） mRNA 上每上每 3 个个 nt 翻译成蛋白质多肽链上的翻译成蛋白质多肽链上的 1 个个 AA，这，这 3 个个 nt 就成为密就成为密 码。码。 ORF（可译框架）（可译框架） 由起始密码子开始到终止密码子结束的由起始密码子开始到终止密码子结束的 nt 序列序列 4.1.1 三联子密码及其破译三联子密码及其破译 2 4.1.1 三联子密码及其破译三联子密码及其破译 1. 以均聚物、随机共聚物和特定序列的共聚物为模板指导多肽合成以均聚物、随机共聚物和特定序列的共聚物为模板指导多肽合成 1）1961 年，年，Nirenberg: polyU 做模板，做模板，UUUPhe polyC 做模板，做模板，CCCPro polyA 做模板，做模板，AAALys 2） Nirenberg 和和 Ochoa：随机共聚物和特定序列的共聚物为模板：随机共聚物和特定序列的共聚物为模板 以只含以只含 A、C 的共聚物为模板，任意排列可出现的共聚物为模板，任意排列可出现 8 种三联子：种三联子： CCC、CCA、CAC、ACC、CAA、ACA、AAC、AAA 获得获得 Asn、His、Pro、Gln、Thr、Lys 等等 6 种种 AA 组成得多肽。组成得多肽。 以多聚二核苷酸做模板可合成由以多聚二核苷酸做模板可合成由 2 个个 AA 组成的多肽：组成的多肽：PolyUG 5.UGU GUG UGU GUG UGU GUG 3 CysValCysValCysVal 以多聚三核苷酸做模板：以多聚三核苷酸做模板：polyUUG 5UUG UUG UUG UUG UUG 3 Trp- Trp- Trp- Trp- Trp 5 UGU UGU UGU UGU UGU 3 Cys- Cys- Cys- Cys- Cys 5 GUU GUU GUU GUU GUU3 Val- Val- Val- Val- Val 2. 核糖体结合技术核糖体结合技术 Nirenberg 和和 leder 以人工合成的三核苷酸如以人工合成的三核苷酸如 UUU 等为模板，在含有核糖体、等为模板，在含有核糖体、AA-tRNA 的适当的适当 离子强度的反应液中保温，然后使反应液通过硝酸纤维素滤膜。离子强度的反应液中保温，然后使反应液通过硝酸纤维素滤膜。 游离的游离的 AA-tRNA 可通过滤膜，与模板和核糖体结合的可通过滤膜，与模板和核糖体结合的 AA-tRNA 留在滤膜上留在滤膜上 将游离的将游离的 AA-tRNA 与结合到核糖体上的与结合到核糖体上的 AA-tRNA 分开分开 用用 20 种种 AA-tRNA 作作 20 组实验，每组含有组实验，每组含有 20 种种 AA-tRNA 和和 1 种三核苷酸，种三核苷酸， 只有只有 1 种种 AA 用用 14C 标记。标记。 3 4.1.2 遗传密码的性质遗传密码的性质 1.密码的连续性：无间断也无重叠密码的连续性：无间断也无重叠 2.密码的简并性（密码的简并性（degeneracy） 由一种以上密码子编码同一由一种以上密码子编码同一 AA 的现象。的现象。 编码同一个编码同一个 AA 的密码子称为同义密码子的密码子称为同义密码子 3.密码的通用性与特殊性密码的通用性与特殊性 通用性：无论在体内还是在体外，无论对病毒、细菌、动物、植物都是通用通用性：无论在体内还是在体外，无论对病毒、细菌、动物、植物都是通用 的的 特殊性：少数例外特殊性：少数例外 支原体：支原体：UGATrp 四膜虫：四膜虫：UAA Gln 人、牛及酵母线粒体也有例外人、牛及酵母线粒体也有例外 线粒体与核线粒体与核 DNA 密码子使用情况比较密码子使用情况比较 生物生物密码子密码子线粒体线粒体 DNA 编码编码 的的 AA 核核 DNA 编码的编码的 AA 所有所有UGATrp终止子终止子 酵母酵母CUAThrLeu 果蝇果蝇AGASerArg 哺乳动物哺乳动物AGA/G终止子终止子Arg 4 哺乳动物哺乳动物AUAMetIle 4. 密码子与反密码子的相互作用密码子与反密码子的相互作用 摆动假说摆动假说 在密码子与反密码子的配对中，前两对严格遵守碱基配对原则，第三个碱基在密码子与反密码子的配对中，前两对严格遵守碱基配对原则，第三个碱基 有一定的自由度，可以摆动，可使某些有一定的自由度，可以摆动，可使某些 tRNA 识别识别 1 个以上的密码子。个以上的密码子。 4.2 tRNA 结构：结构： 1）受体臂（受体臂（acceptor arm）杆状结构，）杆状结构， 3端为端为 CCA， 其余手臂由杆状结构和套索状结构组成其余手臂由杆状结构和套索状结构组成 反密码子的第一位碱基反密码子的第一位碱基ACGUI 密码子的第三位碱基密码子的第三位碱基UGU,CA,GA,U,C 5 2)TC 臂（臂（ 表示拟尿嘧啶）表示拟尿嘧啶） 3）反密码子臂）反密码子臂 4）D 臂，含二氢尿嘧啶（臂，含二氢尿嘧啶（D） 4.2.1 tRNA 的的 L 型三级结构型三级结构 tRNA 三级结构与三级结构与 AA-tRNA 合成酶对合成酶对 tRNA 的是别有关，靠三级氢键维持。的是别有关，靠三级氢键维持。 4.2.2 tRNA 的功能的功能 是是 mRNA 和和 AA 之间的接合体，起解码作用之间的接合体，起解码作用 4.2.3 tRNA 的种类的种类 1. 起始起始 tRNA 和延伸和延伸 tRNA 起始起始 tRNA：特异识别：特异识别 mRNA 模板上起始密码子模板上起始密码子 原核生物：原核生物：fMet-tRNA 真核生物：真核生物：Met-tRNA 2. 同工同工 tRNA（cognate tRNA）：代表相同）：代表相同 AA 的的 tRNA 同工同工 tRNA 均专一于相同的均专一于相同的 AA-tRNA 合成酶合成酶 3. 校正校正 tRNA 无义突变（无义突变（nonsense mutation）：在）：在 DNA 序列中任何导致编码序列中任何导致编码 AA 的三联的三联 密码子转变为终止密码子的突变，它使蛋白质合成提前终止，合密码子转变为终止密码子的突变，它使蛋白质合成提前终止，合 成无功能的或无意义的多肽。成无功能的或无意义的多肽。 错义突变（错义突变（missense mutation）：由于结构基因中某个核苷酸的变化使一）：由于结构基因中某个核苷酸的变化使一 种种 AA 的密码变成另一种的密码变成另一种 AA 的密码。的密码。 无义突变的校正：无义突变的校正： 无义突变的校正无义突变的校正 tRNA 通过改变反密码子区校正无义突变通过改变反密码子区校正无义突变 6 错义突变的校正错义突变的校正 错义突变的校正错义突变的校正 tRNA 通过反密码子区的改变把正确的通过反密码子区的改变把正确的 AA 加到肽链上，加到肽链上， 合成正常的蛋白质合成正常的蛋白质 例子：大肠杆菌细胞中例子：大肠杆菌细胞中 Trp 合成酶中合成酶中 GGA（Gly 密码子）密码子）AGA（编码（编码 Arg） 校正：校正： Gly 校正校正 tRNA 校正基因使其反密码子校正基因使其反密码子 CCU UCU 野生型野生型 突变型突变型 大肠杆菌大肠杆菌 5 GGA（Gly）3 5 AGA（Arg） 3 校正校正 tRNA 3 CCU 5 3 UCU 5 影响校正效率的因素影响校正效率的因素 1）无义突变的校正）无义突变的校正 tRNA 必须与释放因子竞争识别密码子必须与释放因子竞争识别密码子 无义突变的校正无义突变的校正 tRNA 不仅能校正无义突变，还会抑制该基因不仅能校正无义突变，还会抑制该基因 3正常的终正常的终 止密码，导致翻译的通读，合成更长的蛋白质，对细胞造成伤害！止密码，导致翻译的通读，合成更长的蛋白质，对细胞造成伤害！ 2）错义突变的校正）错义突变的校正 tRNA 必须与该密码的正常必须与该密码的正常 tRNA 竞争竞争 可能导致另一个基因的错误翻译！可能导致另一个基因的错误翻译！ 校正效率不会超过校正效率不会超过 50% 7 4.2.4 氨酰氨酰-tRNA 合成酶合成酶 催化催化 AA 与与 tRNA 结合的特异性酶结合的特异性酶 AA+tRNA+ATPAA-tRNA+AMP+PPi 两步反应：两步反应： 1）AA+ATP+酶（酶（E） E-AA-AMP+PPi 2） E-AA-AMP+tRNA AA-tRNA+ E+AMP 氨酰氨酰-tRNA 合成酶既能识别合成酶既能识别 AA 又能识别又能识别 tRNA 如何去识别结构非常相似的如何去识别结构非常相似的 AA? 仍无定论！仍无定论！ 4.3 核糖体核糖体 核糖体核糖体 RNA（rRNA） 1）5S rRNA 两个高度保守的区域：两个高度保守的区域： CGAAC5S rRNA 与与 tRNA 相互识别的序列，相互识别的序列， 与与 tRNA 分子分子 TC 序列相互作用的部位序列相互作用的部位 GCGCCGAAUGGUAGU5S rRNA 与与 50S 大亚基相互作用的位点大亚基相互作用的位点 与与 23S rRNA 互补互补 2）16S rRNA 3端一段端一段 ACCUCCUUA 保守序列，与保守序列，与 mRNA5翻译起始区富含嘌呤的序列翻译起始区富含嘌呤的序列 互补互补 3端还有一段与端还有一段与 23S rRNA 序列互补，在序列互补，在 30S 与与 50S 亚基结合中起作用亚基结合中起作用 3）23S rRNA 第第 1984-2001nt 存在一段能与存在一段能与 tRNAMet 序列互补的片段序列互补的片段 表明大亚基表明大亚基 23S rRNA 可能与可能与 tRNAMet 的结合有关的结合有关 第第 143-157nt 存在一段存在一段 12nt 序列与序列与 5S rRNA 第第 72-83nt 互补互补 表明在表明在 50S 大亚基上这两种大亚基上这两种 RNA 之间存在相互作用之间存在相互作用 4）5.8S rRNA真核核糖体大亚基特有真核核糖体大亚基特有 含有与原核含有与原核 5S rRNA 中的保守序列中的保守序列 CGAAC 相同的序列，识别相同的序列，识别 tRNA 说明说明 5.8S rRNA 可能与原核可能与原核 5S rRNA 功能相似功能相似 5）18S rRNA 8 4.4 蛋白质合成的生物学机制蛋白质合成的生物学机制 1）AA 的活化的活化 2）肽链合成的起始、延伸、终止）肽链合成的起始、延伸、终止 核糖体循环核糖体循环 3）多肽合成的折叠和加工）多肽合成的折叠和加工 9 4.4.1 AA 的活化的活化 原核生物原核生物 1） Met+tRNAMet+ATPMet-tRNAfMet+AMP+PPi 2）N10-甲酰四氢叶酸甲酰四氢叶酸 + Met-tRNAfMet四氢叶酸四氢叶酸+ fMet-tRNAfMet 真核生物真核生物 有两类有两类 tRNA 1）起始）起始 tRNAi：Met-tRNAiMet 2）延伸）延伸 tRNA： Met-tRNAMet 4.4.2 翻译的起始翻译的起始 原核生物：分三步原核生物：分三步 1)30S+IF-1+IF-2 通过通过 SD 序列与序列与 mRNA 结合结合 SD 序列：原核序列：原核 mRNA 起始密码子起始密码子 AUD 上游上游 7-12nt 处的一种保守片段处的一种保守片段 （5-AGGAGGU-3 ，富含嘌呤），富含嘌呤） ，它与，它与 16S rRNA 3端反向互补（端反向互补（5- GAUCACCUCCUUA-3，富含嘧啶），富含嘧啶） 10 1)30S+IF-1+IF-2 2） fMet-tRNAfMetP 位位 3）30S 起始复合物起始复合物 （tRNA、mRNA、起始因子）与、起始因子）与 50S 大亚基结合形成大亚基结合形成 70S 起始复合物（翻译起始复合物（翻译 起始复合物）起始复合物） （70SmRNA fMet-tRNAfMet ） 2.真核生物翻译的起始真核生物翻译的起始 与原核生物的区别：与原核生物的区别： 1）40S 先与先与 Met-tRNAiMet 结合，再与结合，再与 mRNA 结合，最后与结合，最后与 60S 结合生成结合生成 80SmRNA Met-tRNAiMet 起始复合物起始复合物 2）核糖体较大；）核糖体较大； 起始因子较多；起始因子较多； 11 mRNA 具有帽子结构；具有帽子结构； Met-tRNAiMet 不甲酰化；不甲酰化； mRNA 分子的分子的 5端的端的“帽子帽子”和和 3端的端的 PolyA 都参与翻译起始复合物的形成都参与翻译起始复合物的形成 40S 起始复合物的形成需帽子结合蛋白起始复合物的形成需帽子结合蛋白 （eIF-4E）识别帽子）识别帽子 40S 亚基识别起始密码：扫描模式亚基识别起始密码：扫描模式 4.4.3 肽链的延伸肽链的延伸 1. 后续后续 AA-tRNA 与核糖体结合与核糖体结合 12 2. 肽键的生成肽键的生成 13 3. 移位移位 14 4.4.4 肽链的终止肽链的终止 当终止密码当终止密码 UAA、UAG 或或 UGA 出现在核糖体的出现在核糖体的 A 位时，释放因子位时，释放因子 （release factor, RF）识别终止密码并与之结合，水解）识别终止密码并与之结合，水解 P 位上多肽链与位上多肽链与 tRNA 之之 间的二酯键，导致新生的肽链和间的二酯键，导致新生的肽链和 tRNA 从核糖体上释放，核糖体大小亚基解体，从核糖体上释放，核糖体大小亚基解体， 蛋白质合成结束。蛋白质合成结束。 释放因子的种类：释放因子的种类： 类释放因子：识别终止密码，催化新生的肽链从类释放因子：识别终止密码，催化新生的肽链从 P 位的位的 tRNA 中水解释放中水解释放 原核生物：原核生物： 1）RF1：识别：识别 UAA，UAG 2）RF2：识别：识别 UAA，UGA 真核生物：真核生物：eRF1识别三个终止密码识别三个终止密码 类释放因子：刺激类释放因子：刺激类释放因子从核糖体中解离出来类释放因子从核糖体中解离出来 原核生物：原核生物： RF3 真核生物：真核生物：eRF3 15 4.4.5 蛋白质前体的加工蛋白质前体的加工 1）N 端端 fMet 或或 Met 的切除的切除 2）二硫键的形成）二硫键的形成 3）特定）特定 AA 的修饰的修饰 磷酸化：核糖核蛋白（磷酸化：核糖核蛋白（a） 糖基化：各种糖蛋白糖基化：各种糖蛋白 甲基化：（甲基化：（c） 羟基化：胶原蛋白羟基化：胶原蛋白 羧基化：（羧基化：（b） 糖基化：在内质网中进行糖基化：在内质网中进行 4）切除新生肽链中的非功能片段（）切除新生肽链中的非功能片段（P139 图）图） 16 4.4.6 蛋白质的折叠蛋白质的折叠 分子伴侣（分子伴侣（molecular chaperone） 是一类序列上没有相关性但有共同功能的保守蛋白，它们在细胞内帮助其是一类序列上没有相关性但有共同功能的保守蛋白，它们在细胞内帮助其 他他 多肽正确的折叠、组装、运转和降解。多肽正确的折叠、组装、运转和降解。 1. 热休克蛋白（热休克蛋白（heat shock protein） 是一类应激蛋白，包括是一类应激蛋白，包括 HSP70、HSP40 和和 GrpE 三个家族三个家族 促使某些能自发折叠的蛋白质正确折叠成天然空间构象促使某些能自发折叠的蛋白质正确折叠成天然空间构象 2. 伴侣素伴侣素 包括包括 HSP60 和和 HSP10 为非自发性折叠蛋白提供能折叠成天然结构的微环境。为非自发性折叠蛋白提供能折叠成天然结构的微环境。 4.4.7 蛋白质合成的抑制剂蛋白质合成的抑制剂 主要是一些抗生素主要是一些抗生素 机制机制 阻止阻止 mRNA 与核糖体结合：氯霉素与核糖体结合：氯霉素 阻止阻止 AA-tRNA 与核糖体结合：四环素类与核糖体结合：四环素类 干扰干扰 AA-tRNA 与核糖体结合而产生错读：链霉素、新霉素、卡那霉素与核糖体结合而产生错读：链霉素、新霉素、卡那霉素 作为竞争性抑制剂抑制蛋白质合成：嘌呤霉素作为竞争性抑制剂抑制蛋白质合成：嘌呤霉素 嘌呤霉素是嘌呤霉素是 AA-tRNA 的结构类似物，无需延伸因子即可结合在核糖体的的结构类似物，无需延伸因子即可结合在核糖体的 A 位上，抑制位上，抑制 AA-tRNA 的进入。的进入。 17 4.5 蛋白质转运机制蛋白质转运机制 蛋白质的合成位点与功能位点常常被一层或多层细胞膜隔开蛋白质的合成位点与功能位点常常被一层或多层细胞膜隔开 合成的蛋白质需运转合成的蛋白质需运转 蛋白质转运分为两大类蛋白质转运分为两大类 1）翻译）翻译-转运同步机制转运同步机制 蛋白质的合成和转运是同时发生的蛋白质的合成和转运是同时发生的 如分泌蛋白如分泌蛋白 2）翻译后转运机制）翻译后转运机制 蛋白质从核糖体上释放后才发生的蛋白质从核糖体上释放后才发生的 4.5.1 翻译翻译-转运同步机制转运同步机制 信号肽假说信号肽假说 蛋白质跨膜转运信号由蛋白质跨膜转运信号由 mRNA 编码。在起始密码子后，有一段编码疏水性编码。在起始密码子后，有一段编码疏水性 AA 序列的序列的 RNA 区域，被称为信号序列。信号序列在结合核糖体上合成后便与区域，被称为信号序列。信号序列在结合核糖体上合成后便与 膜上特定受体相互作用，产生通道，允许这段多肽在延长的同时穿过膜结构。膜上特定受体相互作用，产生通道，允许这段多肽在延长的同时穿过膜结构。 信号肽信号肽 该序列常位于蛋白质的该序列常位于蛋白质的 N 端，长度在端，长度在 13-36 个残基，有如下特点个残基，有如下特点 1）一般带有）一般带有 10-15 个疏水个疏水 AA； 2）在靠近该序列）在靠近该序列 N 端常常有端常常有 1 个或数个带正电荷的个或数个带正电荷的 AA； 3）在其）在其 C 端靠近蛋白酶切割位点处常常带有数个极性端靠近蛋白酶切割位点处常常带有数个极性 AA，离切割位点最近的，离切割位点最近的 那个那个 AA 往往带有很短的侧链（往往带有很短的侧链（Ala 或或 Gly） 蛋白质跨膜转运的信号肽假说及其运输过程蛋白质跨膜转运的信号肽假说及其运输过程 18 新生蛋白通过同步转运途径进入内质网内腔的主要过程新生蛋白通过同步转运途径进入内质网内腔的主要过程 SRP：信号识别蛋白：信号识别蛋白 DP：停靠蛋白（：停靠蛋白（SRP 受体蛋白）受体蛋白） 4.5.2 翻译后转运机制翻译后转运机制 1. 线粒体蛋白跨膜转运线粒体蛋白跨膜转运 1）转运前以蛋白前体存在）转运前以蛋白前体存在 蛋白前体蛋白前体=成熟蛋白成熟蛋白+前导肽前导肽 前导肽（前导肽（leader peptide）位于）位于 N 端端 蛋白前体跨膜时被多肽酶水解，蛋白前体跨膜时被多肽酶水解， 成熟蛋白释放成熟蛋白释放 2）转运过程需能）转运过程需能 3）转运时先由外膜上的）转运时先由外膜上的 Tom 受体复合蛋白识别与分子伴侣（受体复合蛋白识别与分子伴侣（Hsp70 或或 MSF） 结合的待转运多肽；再通过结合的待转运多肽；再通过 Tom 和和 Tim 组成的膜通道进入线粒体内腔。组成的膜通道进入线粒体内腔。 19 2. 前导肽的作用与性质前导肽的作用与性质 前导肽的特征：前导肽的特征： 1）带正电荷的碱性）带正电荷的碱性 AA（特别是（特别是 Arg） 含量较为丰富，分散于不带电荷的含量较为丰富，分散于不带电荷的 AA 之间；之间； 2）缺少带负电荷的酸性）缺少带负电荷的酸性 AA； 3）羟基）羟基 AA（特别是（特别是 Ser）含量较高；）含量较高； 4）有形成两亲）有形成两亲 -螺旋结构能力螺旋结构能力 20 3.叶绿体蛋白质的跨膜转运叶绿体蛋白质的跨膜转运 叶绿体定位信号肽的组成叶绿体定位信号肽的组成 1）第一部分决定该蛋白能否进入叶绿体基质；）第一部分决定该蛋白能否进入叶绿体基质； 2）第二部分决定该蛋白能否）第二部分决定该蛋白能否 进入类囊体进入类囊体 叶绿体蛋白转运过程的特点叶绿体蛋白转运过程的特点 1）活性蛋白水解酶位于叶绿体基质中）活性蛋白水解酶位于叶绿体基质中鉴别翻译后转运的标志之一。而翻译鉴别翻译后转运的标志之一。而翻译-转转 运同步机制的活性蛋白酶位于转运膜上。运同步机制的活性蛋白酶位于转运膜上。 2）叶绿体膜能特异与叶绿体蛋白（受体蛋白）的前体结合，保证叶绿体蛋白只）叶绿体膜能特异与叶绿体蛋白（受体蛋白）的前体结合，保证叶绿体蛋白只 能进入叶绿体内。能进入叶绿体内。 3）叶绿体蛋白前体内可降解序列）叶绿体蛋白前体内可降解序列 因植物和蛋白质种类不同而不同因植物和蛋白质种类不同而不同 21 4.5.3 核定位蛋白的转运机制核定位蛋白的转运机制 真核生物核糖体蛋白在细胞质内合成真核生物核糖体蛋白在细胞质内合成细胞核，在核仁中装配成细胞核，在核仁中装配成 40S 和和 60S 细胞质细胞质,合成蛋白质合成蛋白质 核定位序列（核定位序列（nuclear localization sequence,NLS） 在核蛋白定位时不被切除在核蛋白定位时不被切除保证核蛋白的重复定位保证核蛋白的重复定位 转运过程所需的蛋白质因子转运过程所需的蛋白质因子 核运转因子（核运转因子（Importin）、 、 组成异源二聚体，是核定位蛋白的可溶性受体组成异源二聚体，是核定位蛋白的可溶性受体 GTP 酶（酶（Ran） 22 思考题思考题 一、概念一、概念 三联子密码三联子密码 简并简并 同义密码子同义密码子 同工同工 tRNA 无义突变无义突变 错义突变错义突变 分子伴侣分子伴侣 信号序列信号序列 信号肽信号肽 核定位序列（核定位序列（NLS） SD 序列序列 ORF 二、简答题二、简答题 1.遗传密码的特性遗传密码的特性 2.核糖体有哪些活性中心核糖体有哪些活性中心 3. 真核生物与原核生物在翻译的起始过程中有哪些区别真核生物与原核生物在翻译的起始过程中有哪些区别 4.信号肽的序列组成特点及功能信号肽的序列组成特点及功能 5.简述叶绿体蛋白的跨膜转运机制简述叶绿体蛋白的跨膜转运机制 6.核定位序列的功能核定位序列的功能 三、填空题三、填空题 1.生物体内有三个终止密码，分别为生物体内有三个终止密码，分别为、和和，他们的别名分别叫，他们的别名分别叫 、 和和。其中。其中是最常用的。是最常用的。 2.如果如果 tRNA 中的反密码子为中的反密码子为 I，则他可识别密码子中的，则他可识别密码子中的、和和。 3.tRNA 为三叶草形结构，由四个手臂组成：为三叶草形结构，由四个手臂组成：、和和。其中，。其中， 是是 tRNA 分类的主要依据。分类的主要依据。 23 4.将将 14C 标记的标记的 Cys 与与 tRNACys 结合生成结合生成 14C Cys- tRNACys ，经，经 Ni 催化催化 可生成可生成 14C Ala- tRNACys ，再把，再把 14C Ala- tRNACys 加进含血红蛋白加进含血红蛋白 mRNA、其他、其他 tRNA、AA 及兔网织细胞核糖体的蛋白质合成体系中，结果发现及兔网织细胞核糖体的蛋白质合成体系中，结果发现 14C Ala- tRNACys 插入了血红蛋白分子通常由插入了血红蛋白分子通常由 Cys 占据的位置上，这说明占据的位置上，这说明 。 5.无论是无义突变还是错义突变都可通过无论是无义突变还是错义突变都可通过得以校正得以校正 6.无义突变的校正无义突变的校正 tRNA 必须与必须与竞争识别密码子，错义突变的校正竞争识别密码子，错义突变的校正 tRNA 必须与必须与竞争识别密码子。竞争识别密码子。 7.AA-tRNA 合成酶对合成酶对和和都有高度的专一性。都有高度的专一性。 8.在原核生物的在原核生物的 5S rRNA 中有两个高度保守的序列，其中一个区域可与中有两个高度保守的序列，其中一个区域可与 tRNA 分子上分子上环相互作用，是环相互作用，是 5S rRNA 与与 tRNA 相互是别的部位；另一序列可相互是别的部位；另一序列可 与与 23S rRNA 中的一段序列互补，是中的一段序列互补，是 5S rRNA 与与相互作用的位点。而相互作用的位点。而 16S rRNA 可与可与 mRNA 的的序列结合。序列结合。