细菌的简单染色法和革兰氏染色法 1

细菌的简单染色法和革兰氏染色法细菌的简单染色法和革兰氏染色法 陈慧霞陈慧霞 食品食品 13102 班班 201313040201 一 引言 1.学习并掌握细菌简单染色法的原理和方法。 2. 掌握革兰氏染色法的原理和操作技术，进一步巩固显微镜（油 镜）的使用方法和无菌操作技术。 二 实验原理 1.简单染色法 用单一染料进行细菌染色，操作简便，适于菌体一般形状和细菌 排列的观察。 一般情况下，细菌细胞通常带负电荷，易于和带正电荷的碱性染 料结合而被染色。因此，常用碱性染料进行简单染色。 常见的碱性染料有亚甲蓝、甲基紫、结晶紫、碱性复红、中性红、 孔雀绿和番红等。 2.革兰氏染色法 革兰氏染色反应是细菌分类和鉴定的重要性状。革兰氏染色的原 理主要是因为两类细菌的细胞壁成分和结构不同。革兰氏阴性细 菌的细胞壁中肽聚糖含量低，而脂类物质含量高，当用乙醇处理 时， 脂类物质溶解，细胞壁的通透性增加，使结晶紫碘复合物易被 乙醇抽出而脱色，然后又被染上了番红的颜色，因此呈现红色。 而革兰氏阳性细菌的细胞壁主要是肽聚糖的含量多且交联度大， 类脂质含量少，当用乙醇处理时，肽聚糖层的孔径变小，通透性 降低，使结晶紫碘复合物被保留在细胞内而不易着色，因此， 细胞仍保留初染时的颜色即呈现紫色。 细菌先经碱性染料结晶紫染色，再经碘液媒染（以增加染料与细 胞的亲和力）后，用乙醇脱色，再用番红染色。不被脱色而保持 原颜色者为革兰氏阳性菌（G+） ；被脱色后又被染上复染剂的颜色 者为革兰氏阴性菌（G-） 。 三 实验材料 1 简单染色法 菌种：枯草芽孢杆菌 试剂与器材：复红，接种环，酒精灯，打火机，载玻片，吸水纸。 2 革兰氏染色法 菌种：大肠杆菌，金黄色葡萄球菌 染液：结晶紫染液，碘液，95%乙醇，番红染液，香柏。 器材和试剂：洗净的载玻片，显微镜，酒精灯，接种环，擦镜纸， 吸水纸，镊子，玻璃废液缸，蒸馏水等。 四 实验步骤 1.无菌操作： 1.关闭窗户和风扇 2.用酒精棉双手表面消毒 3.接种环取菌前后焚烧灭菌 4. 棉塞靠近火焰不离手 5.实验在酒精灯附近进行 6.少说话 2.简单染色法： 准备玻片：取清洁干净的载玻片。 涂片：滴一小滴无菌水于玻片中央，用接种环取枯草芽孢杆菌 少许，与玻片上无菌水混匀，并涂成适当大小的薄层涂片。 干燥：将涂片在酒精灯火焰上方小心的轻微挥动使其干燥。 固定：将干燥涂片（涂菌面向上）以适当的温度的从酒精灯火 焰上通过 2 至 3 次。 染色：滴 1 至 2 滴复红于涂片部位，染色 1 至 3min。 水洗：用洗瓶从玻片上端轻轻冲洗，直到下端流出的水无色， 水流不宜太大。 干燥：用吸水纸吸干玻片上的水 镜检：用显微镜观察玻片。 2 革兰氏染色法：革兰氏染色 制片：取两块载玻片，在第一块玻片两个地方各滴一滴无菌水， 用接种环分别取大肠杆菌和金黄色葡萄球菌混在其中，再拿第 二块玻片，用接种环取玻片 1 两处液体制作一个混合菌的玻片。 干燥：将载玻片放在酒精灯火焰上方小心地轻微挥动使其干燥 固定：将干燥涂片不快不慢地从酒精灯火焰上方通过 23 次。 染色：1 初染：在混合菌的玻片上滴加结晶紫，染色 1min; 2 媒染：用碘液媒染 1min; 3 脱色：用 95%乙醇脱色 18s20s; 4 复染：滴加番红复染 2min5min。 水洗：用洗瓶从玻片上端轻轻冲洗，直到下端流出的水无色。 干燥：用吸水纸轻轻的将玻片上的水吸干。 镜检：用显微镜观察玻片。 五 结果与分析结果与分析 1) 枯草芽孢杆菌的形态是杆状的，经简单染色菌体变成红色 2) 大肠杆菌的形态是杆状的，经革兰氏染色菌体颜色变成红色， 说明大肠杆菌是革兰氏阴性（G）细菌。金黄色葡萄球菌的 形态是球状的，经革兰氏染色菌体颜色变成蓝色，说明金黄色 葡萄球菌是革兰氏阳性（G）细菌。 革兰氏染色 简单染色 六 作业与思考 1 细菌染色法的原理是什么？ 答：一般情况下，细菌细胞通常带负电荷，易于和带正电荷的碱 性染料结合而被染色。 2 染色前细菌涂片为什么要用火焰固定？ 答：杀死了细菌,失细胞膜失去选择透过性,利于染液进入细胞中 进行染色。 七讨论与结论七讨论与结论 1.革兰氏染色成败的关键是酒精脱色。如脱色过度，革兰 氏阳性菌也可