自动生化分析仪操作方法

四四 血液临床酶学诊断血液临床酶学诊断 1 1 血清酶的总活性测定血清酶的总活性测定 酶是由组织细胞合成的具有特殊催化功能的蛋白质，是对化学反应具有强化的催化性，对 作用物由严格选择性的生物催化剂。酶的活性是对酶的催化能力大小的度量。酶活性的测定就 是酶催化某一化学反应的反应速度。由于酶是蛋白质，其催化的反应速度受温度，PH，离子 强度，底物浓度等多种因素的影响，故酶的活性都是用在特定条件下，单位时间内，酶促反应 中低物的消耗量或产物的生成量来进行测定。 酶活性的测定采用手工或自动生化分析仪的两种方法进行测定。自动生化分析仪分为半自动分 析仪和全自动分析仪两种。半自动分析仪由手工完成样品及反应混合体递送，部分操作由仪器 自动完成。全自动生化分析仪则是从加样到出结果的全过程完全由仪器自动完成。按仪器复杂 的程度及功能分类分为小型，中型，大型自动分析仪。小型一般分为单通道，中型为多通道， 常同时可测 210 各项目，大型多通道的仪器可同时测 10 个以上项目，分析项目可自由选择。 MD100 型半自动分析仪简介： 本仪器是由美国 Sysmtey 生化仪器公司生产。该仪器采用单一通道，可连程测试 20 个以上的 项目。该仪器主要分为计算机控制系统，吸样泵，光学系统比色池三个部分。 MD-100 型半自动分析仪操作： 1接通电源，约 30 分钟。 2用专用清洗液或自配 3%84 消毒液清洗仪器。如仪器久未使用需打开仪器侧小门，取下 吸样泵小管，用注射器来回推入清洗液，清洗吸样通道。 3进入所测项目的界面，点击轻轨鼠标右键编辑项目参数。 4点击轻轨鼠标左键进入运行项目。 5按仪器提示的方法进行下一步操作，依次吸取空白试剂、标准试剂、样本试剂测试。 6本项目测试完毕，需用专用清洗液或自配 3%84 消毒液清洗。 7退出项目测试，在根目录下关闭电源。 乳酸脱氢酶（乳酸脱氢酶（LDH-LLDH-L）测定）测定 a a 原理原理 L-乳酸+NAD 正离子丙酮酸+NADH+氢离子 b b 试剂试剂 原装诊断试剂盒 c c 方法方法 取一定量的 R2（Tris 缓冲液 PH8.9，100mmol/L;KCl 100mmol/L;L-乳酸锂 52mmol/L）加入 R1（NAD 6.5mmol/L）轻轻摇动，并倒置几次，完全溶解后，即为工作液。 空白管样品管 工作液1.00ml1.00ml 蒸馏水0.02ml- 样品-0.02ml 混合均匀，在 37保温 30 秒钟，读取初始吸光度（波长 340nm） ，同时开始计时，在精确的 1，2，3 分钟时，分别读取吸光度，确定每分钟平均吸光度的变化（A/分） d d 上机操作程序上机操作程序 1按试剂盒说明书编辑参数：点右键进入编辑参数界面。移动鼠标至温度设置处，设定温 度为 37 度；再次移动鼠标至试剂吸入量处，设定试剂吸入量为 1.00ml;移动鼠标至样品吸入量 处，设定样品吸入量为 0.02ml;移动鼠标至保存处，按键点击保存。移动鼠标至读数时间处， 设定读数时间为 1min，延迟时间 30 秒。 2点击轻轨鼠标左键，进入运行界面，按仪器提示，先行清洗吸入空白试剂，仪器自动测 试空白管，再按提示吸入测定试剂，仪器自动测试样品管。 3仪器自动计算结果，人工记录或仪器自动输出结果。 4本项目测试完毕，点击退出键，仪器提示清洗，清洗完毕，仪器自动退出界面。 e e 计算计算 LDH（U/L）=（A 样品/分A 空白/分）F F=V1（V2消光系数）1000=8095 V1=反应总体积 V2=样品体积 NADH 在 340nm 的毫克分子消光系数=6.3 f f 注意事项注意事项 1当A/分超过 0.19 时，用 0.3ml 生理盐水稀释 0.1ml 样品，在重新测定，结果乘以 4。 2复溶后溶液变混浊，或初始吸光度大于 0.5,则不能使用。 g g 临床意义临床意义 乳酸脱氢酶总活性升高见于急性心肌梗死、充血性心力衰竭、肺梗死、肝炎、贫血、肌营养不 良、肾病综合症。 天门冬氨酸氨基转移酶（天门冬氨酸氨基转移酶（AST/GOTAST/GOT）测定）测定 a a 原理原理 L-天冬氨酸+-酮戊二酸草酰乙酸+L-谷氨酸 草酰乙酸+NADH+氢离子L-苹果酸+NAD 正离子+水 b b 试剂试剂 原装诊断试剂盒 c c 方法方法 波长：340nm 温度：37 比色杯光径：1cm 取一定量 R2（Tris 缓冲液 PH7.8,80mmol/L;L-天门冬氨酸 240mmol/L）复溶 R1（-酮戊二酸 12mmol/L;NADH0.18mmol/L;苹果酸脱氢酶1000U/L；LDH5000U/L） 空白管样品管 工作液1.00ml1.00ml 蒸馏水0.10ml- 样品-0.10ml 混合均匀，在反应温度保温 1 分钟，读取初始吸光度，同时开始计时，在精确的 1，2，3 分钟 时，分别读取吸光度，确定每分钟平均吸光度的变化（A/分） 。 d d 上机操作程序上机操作程序 1按试剂盒说明书编辑参数：点右键进入编辑参数界面。移动鼠标至温度设置处，设定温 度为 37 度；再次移动鼠标至试剂吸入量处，设定试剂吸入量为 1.00ml;移动鼠标至样品吸入量 处，设定样品吸入量为 0.1ml;移动鼠标至保存处，按键点击保存。移动鼠标至读数时间处，设 定读数时间为 30 秒，延迟时间 30 秒。 2点击轻轨鼠标左键，进入运行界面，按仪器提示，先行清洗吸入空白试剂，仪器自动测 试空白管，再按提示吸入测定试剂，仪器自动测试样品管。 3仪器自动计算结果，人工记录或仪器自动输出结果。 4本项目测试完毕，点击退出键，仪器提示清洗，清洗完毕，仪器自动退出界面。 e e 计算计算 AST（U/L）=（A 样品/分A 空白/分）F F=V1（V2消光系数）1000=1746 V1=反应总体积 V2=样品体积 NADH 在 340nm 的毫克分子消光系数=6.3 f f 注意事项注意事项 1测定时间 1 分钟，A/分大于 0.400；测定时间 3 分钟，A/分 大于 0.200 时，样品用生理盐水稀释后重新测定，结果乘稀释倍数。 2若试剂空白吸光度小于 1.000，勿用。 3仅用于体外诊断，内含迭氮钠，避免直接接触皮肤和眼睛，切勿吞咽。 4应在 28条件下贮存，避免在 28以上及 0下存放。 g g 临床意义临床意义 GOT 酶总活性升高，见于急性肝中毒、钩端螺旋体、流行性出血热、副伤寒、上呼吸道感 染、急性心肌炎、慢性肾盂肾炎。 葡萄糖（葡萄糖（GluGlu）测定）测定 a a 原理原理 Glu+氧气+水葡萄糖酸+双氧水 双氧水+4-氨基安替吡啉+酚醌亚胺+水 b b 试剂试剂 原装诊断试剂盒 c c 方法方法 波长：505nm 温度：37 比色杯光径：1cm 将 10 mlR1（葡萄糖氧化酶13000U/L；过氧化物酶900U/L）与 90mlR2 混合均匀，为工作液。 空白管标准管样品管 工作液 1.50ml1.50ml1.50ml 蒸馏水 0.01ml- 标准 -0.01ml- 样品 -0.01ml 分别混匀，37保温 10-15 分钟，用半自动生化分析仪检测，读取 A 标准和 A 样品操机 d d 上机操作程序上机操作程序 1按试剂盒说明书编辑参数：点右键进入编辑参数界面。移动鼠标至温度设置处，设定温 度为 37 度；再次移动鼠标至试剂吸入量处，设定试剂吸入量为 1.50ml;移动鼠标至样品吸入量 处，设定样品吸入量为 0.01ml;移动鼠标至保存处，按键点击保存。移动鼠标至读数时间处， 设定读数时间为 2 秒，延迟时间 2 秒。 2点击轻轨鼠标左键，进入运行界面，按仪器提示，先行清洗吸入空白试剂，仪器自动测 试空白管，再按提示吸入标准试剂，仪器自动测试标准管，接下来按提示吸入测试试剂， 仪 器自动测试样品管。接下来按提示吸入测试试剂， 仪器自动测试样品 3仪器自动计算结果，人工记录或仪器自动输出结果。 4本项目测试完毕，点击退出键，仪器提示清洗，清洗完毕，仪器自动退出界面。 e e 计算计算 葡萄糖浓度=A 样品A 标准标准浓度 葡萄糖标准液 5.55mmol/L(100mg/dl) f f 注意事项注意事项 1样品葡萄糖浓度超过 22.2mmol/L(400mg/dl)时，样品量可减半，改为 5ul，标准量不变， 重新测定，结果乘以 2。 2仅用于体外诊断，内含迭氮钠，避免直接接触皮肤和眼睛，切勿吞咽。 3应在 28条件下贮存，避免在 28以上及 0下存放。 g g 临床意义临床意义 1血糖升高见于糖尿病、应激、暂时性高血糖症、内分泌紊乱、慢性肝脏疾病、马疝痛。 2血糖降低见于仔猪低血糖、牛酮血症、肾上腺皮质功能减退、甲状腺功能降低、进行性 肝病、严重肾性糖尿病。 总蛋白（总蛋白（TPTP）测定）测定 a a 原理原理 在碱性条件下，蛋白质多肽链中的肽键与铜离子络合形成紫红色化合物。 b b 试剂试剂 原装诊断试剂盒 c c 方法方法 波长：546nm 温度：25 比色杯光径：1cm 空白管标准管样品管 试剂1.00ml1.00ml1.00ml 生理盐水 12.5ul- 标准 -12.5ul- 样品 -12.5ul 混匀，保温 10 分钟，用半自动生化分析仪检测，读取 A 标准和 A 样品。 d d 上机操作程序上机操作程序 1按试剂盒说明书编辑参数：点右键进入编辑参数界面。移动鼠标至温度设置处，设定温 度为 37 度；再次移动鼠标至试剂吸入量处，设定试剂吸入量为 1.00ml;移动鼠标至样品吸入量 处，设定样品吸入量为 12.5l 移动鼠标至保存处，按键点击保存。移动鼠标至读数时间处， 设定读数时间为 2 秒，延迟时间 2 秒。 2点击轻轨鼠标左键，进入运行界面，按仪器提示，先行清洗吸入空白试剂，仪器自动测 试空白管，再按提示吸入标准试剂，仪器自动测试标准管，接下来按提示吸入测试试剂， 仪 器自动测试样品管。接下来按提示吸入测试试剂， 仪器自动测试样品 3仪器自动计算结果，人工记录或仪器自动输出结果。 4本项目测试完毕，点击退出键，仪器提示清洗，清洗完毕，仪器自动退出 e e 计算计算 总蛋白浓度= A 样品A 标准标准浓度（g/L） f f 注意事项注意事项 1样品蛋白浓度超过 100g/L，可用生理盐水稀释样品，再重新测定，结果乘以稀释倍数。 2温度高于 25，测定值偏高。 白蛋白（白蛋白（A A）测定）测定 a a 原理原理 在 PH4.2 环境中，溴甲酚绿在有非离子去垢剂聚氧乙烯月桂醚存在时，可与蛋白形成蓝绿色复 合物。 b b 试剂试剂 原装诊断试剂盒 c c 方法方法 波长：630nm 温度：37 比色杯光径：1cm 空白管标准管样品管 试剂 1.50ml1.50ml1.50ml 生理盐水 5ul- 标准 -5ul- 样品 -5ul 混合均匀，保温 5 分钟后，用半自动生化分析仪检测，读取 A 标准和 A 样品。 d d 上机操作程序上机操作程序 1按试剂盒说明书编辑参数：点右键进入编辑参数界面。移动鼠标至温度设置处，设定温 度为 37 度；再次移动鼠标至试剂吸入量处，设定试剂吸入量为 1.50ml;移动鼠标至样品吸入量 处，设定样品吸入量为 5.00l;移动鼠标至保存处，按键点击保存。移动鼠标至读数时间处， 设定读数时间为 2 秒，延迟时间 2 秒。 2点击轻轨鼠标左键，进入运行界面，按仪器提示，先行清洗吸入空白试剂，仪器自动测 试空白管，按提示吸入测试试剂，仪器自动测试样品管。 3仪器自动计算结果，人工记录或仪器自动输出结果。 4本项目测试完毕，点击退出键，仪器提示清洗，清洗完毕，仪器自动退出界面。 e e 计算计算 白蛋白浓度= A 样品A 标准标准浓度（g/L） f f 注意事项注意事项 1样品白蛋白浓度超过 60g/L 可用生理盐水稀释样品，再重新测定，结果乘以稀释倍数。 2仅用于体外诊断，内含迭氮钠，避免直接接触皮肤和眼睛，切勿吞咽。 3应在 28条件下贮存，避免在 28以上及 0下存放。 g g 临床意义临床意义 1血清总蛋白，白蛋白及球蛋白/球蛋白比值减低者见于肝功能损害如脂肪肝、肝硬化、肾 炎、恶性贫血、恶病质。 2 总蛋白、球蛋白升高、白蛋白/球蛋白比值下降者见于各种感染及慢性肝脏疾病。 3血清总蛋白升高，但白蛋白/球蛋白比值不变者见于各种原因的腹水。 2 2 血清同工酶的测定血清同工酶的测定 催化功能相同而结构不同的一类酶，称为同工酶。同工酶具有适应生物进化需要、符合器官的 代谢功能、协调各细胞器的代谢反应、理顺病理异常代谢等功能。 LDHILDHI 聚丙烯酰氨凝胶电泳：聚丙烯酰氨凝胶电泳： LDH 主要存在于骨骼肌、心脏、肾脏，其次是肝脏、胰腺、肺脏、肿瘤组织等，红细胞内含量 也很丰富。 乳酸脱氢酶至少有 5 种同工酶： LDH1-存在与心脏、红细胞、脑和睾丸。 LDH2-存在于平滑肌、心肌、脑、肾、骨骼和甲状腺。 LDH3-存在于肺、胰脏、肾上腺、脾、胸腺、甲状腺、淋巴结、白细胞。 LDH4-存在于皮肤、肝脏和肠道。 LDH5-存在于骨骼肌、肠道、皮肤和小肠。 a a 原理原理 以聚丙烯酰胺作电泳介质，经电泳后分离后显色，用光密度计扫描，以确定各型同工酶的相对 百分率。 b b 试剂的配制试剂的配制 PH8.9 凝胶缓冲液： Tris:6g EDTA:1.17g NaCl:1.0g 加重蒸馏水溶至 100ml ,4 摄氏度保存。 丙烯酰胺贮藏液 丙烯酰胺：30g 双丙烯酰胺：0g 加重蒸馏水溶至 100ml,4保存。 2.28的过硫酸铵(每周新配): 过硫酸铵:4.0g 加水溶至 100ml。 4三乙醇胺 电泳缓冲液（PH8.3） Tris:0.6g 甘氨酸:2.88g 加水至 100ml,4保存 。临用时 10 倍稀释。 40的蔗糖 溴酚兰 0.1 1mol 乳酸钠: DL-乳酸钠:9.35ml(浓度 60g/dl)加水至 50ml。 NAD 溶液： NND：100mg 加水至 10ml，4；保存，可用两周。 0.1NaCl 溶液: NaCl:584mg 加水至 100ml。 5mM MgCl2 MgCl26H2O：100mg 加水至 100ml。 0.5M 磷酸盐缓冲液（PH7.4） KH2PO4 68g 溶于水,以 NaOH 调节 PH7.4(约需 50g/ml,NaOH 22ml)加水至 1000ml。 NBT（氯化硝基四氯唑蓝）：NBT 50ml 加水至 50ml，4保存。 PMS（酚秦甲脂硫酸盐）：1mg/ml，4保存暗处。 7.5的冰醋酸:冰醋酸 75ml。加水至 100ml。 c c 操作：操作： 1制凝胶：PH8.9 的缓冲液 1.8ml,丙烯酰胺贮存液 1.8ml,4的硫酸胺 0.8ml,水 5.1ml,4 的三乙醇胺 0.5ml,混匀注入玻管内(高度 5-7cm,点 5cm 即可)。 2点样：血清用 40蔗糖作 1：2 稀释后点 5ul，羊血 1：1