mbp在不同时间窗贴敷式头部亚低温对新生仔兔hie治疗时的意义研究(1)

MBPMBP 在不同时间窗贴敷式头部亚低温对在不同时间窗贴敷式头部亚低温对 新生仔兔新生仔兔 HIEHIE 治疗时的意义研究治疗时的意义研究(1)(1) 摘要目的通过贴敷式头部亚低温对新生仔兔缺氧缺血 性脑病（HIE）治疗前后血中髓鞘碱性蛋白（MBP）的测定， 揭示贴敷式头部亚低温对新生仔兔 HIE 有保护作用。方法 采用酶联免疫法测定血清中 MBP。贴敷式头部亚低温实施 6h 治疗。结果 HIE 后不同时间组及假手术组（正常组）组 间比较，血清中 MBP 含量差异有非常显著性（P） ，经 Q 检验进行两两比较发现，HIE 后 3h 组 MBP 含量与正常组差 异无显著性（P） ，而 HIE 后其他组与正常组间均差异有 显著性。结论贴敷式头部亚低温对缺氧缺血性脑病有保护 作用，且在 HIE 后 3h 脑保护作用最强；血中 MBP 含量可作 为缺氧缺血致脑损伤早期诊断的敏感指标。 关键词贴敷式头部亚低温；髓鞘碱性蛋白；脑保护 新生儿缺氧缺血性脑病（HIE）是导致儿童神经系统后遗症 的主要原因，是我国围生期新生儿的主要疾病之一。如何 有效地防治 HIE 及其后遗症、降低死残率是关键。本研究 通过建立病理性新生仔兔 HIE 动物模型，监测 HIE 后不同 时间窗实施亚低温治疗后，血中脑保护指标髓鞘碱性蛋白 （MBP）的变化，分析并确定 MBP 在不同时间窗贴敷式头部 亚低温对新生仔兔 HIE 治疗时的意义。 1 资料与方法 一般资料生后 23 天纯系新西兰仔兔 60 只，自然分娩，重 量为 60100g，不限雌雄，购自我院动物中心。正常假手术 组（对照组）仔兔 10 只。缺氧缺血性脑病仔兔 10 只。亚 低温治疗组共 40 只。 实验分组 A：正常假手术组 10 只（仅做颈部正中切口，游 离左侧颈总动脉，不结扎） 。B：常温创伤组（缺氧缺血性 脑病）10 只。C：亚低温治疗组共 40 只；C1：HIE 后 30min 亚低温治疗 6h 组 10 只；C2：HIE 后 3h 亚低温治疗 6h 组 10 只；C3：HIE 后 6h 亚低温治疗 6h 组 10 只；C4：HIE 后 12h 亚低温治疗 6h 组 10 只。AC4 组均于相应时间点处死， 取血。 方法（1）缺氧缺血性脑病仔兔动物模型的建立1 。 （2） 血清中 MBP 的测定采用酶联免疫方法；将冰冻血清移至 4 冰箱缓慢解冻后测定 NSE，整个过程严格按试剂盒使用说明 操作。 （3）贴敷式头部亚低温治疗的实施。打开亚低温治 疗仪，设置温度（8） ，检查仪器功能实验动物于相应时 间点（发病后 h、3h、6h、12h）实施亚低温，将动物头颅 病变侧头皮与局部亚低温治疗仪的探头紧密接触，身体进 行保温，实施贴附式亚低温的时间为 6h，治疗后取血。 HDB-01 贴敷式局部亚低温脑保护仪哈尔滨工业大学制造， 专利号：ZLXX2；注册号：黑药器械（准）字 XX 第 2580019 号 。 （4）制冷及脑温测量：预设医用半导体局部亚低温脑 保护仪的制冷器温度分别为 10、8和 2。在立体定向 仪引导下将 SL4 型针状（=mm）点温传感器（同济大学研 制）分别垂直送达壳核、丘脑中心点，壳核处进针 19mm、 丘脑处进针 23mm。制冷器均匀涂导热膏后进行头部贴敷的 同时，记录脑温随时间变化的情况。脑温平衡后以 1mm 为 1 个点测量脑内温度梯度。更换不同制冷器温度时动物需完 全复温后再测量下一组数据。实验过程中监测动物肛温及 呼吸等重要生命体征。取血：于相应时间点自腹主动脉取 血，立即以 3000r/min 离心 15min，取上血清，-80保存 备测。 统计学方法用 Foxpro 在计算机上建立数据库，双份录入数 据并进行逻辑检核后，应用统计软件（SPSS）进行统计分 析。分别进行描述性分析、方差分析及 Q 检验等。 2 结果 不同时间点动物亚低温 6h 后血清中 MBP 的含量，见表 1、 图 1。表 1 不同时间点动物亚低温 6h 后血清中 图 1HIE 不同时间点与正常假手术组 BMBP 均值比较 从表 1 可见，HIE 后不同时间组及假手术组组间比较， 血清中 MBP 含量差异有非常显著性（P） ，经 Q 检验进行 两两比较发现，HIE 后 3h 组 MBP 含量与正常组差异无显著 性（P） ，而 HIE 后其他组与正常组间均差异有显著性。 图 1 为不同时间状态下，血清中 MBP 的含量，可以看出， HIE 后 3h 组，MBP 含量最接近正常组。 3 讨论 亚低温疗法在儿科应用还很少，尤其在新生儿疾病方面的 应用，更被视为禁区。贴敷式局部亚低温治疗新生儿 HIE 的研究国内外尚未见报道。如何有效应用亚低温治疗新生 儿 HIE，确定一个可行的亚低温治疗方案，是研究的热点。 亚低温有确切的神经保护作用2，3 ，这一观点已逐渐得 到公认。贴敷式头部亚低温是指头部或血管附近施以降温 手段来达到脑内亚低温的方法。实现了 16min 内使脑部病 灶区降到亚低温保护温度。贴敷式头部亚低温发挥脑保护 作用的机制是：降低脑组织的代谢率；保护血-脑屏障；减 低脑水肿，降低颅内压；促进神经系统的功能恢复。 亚低温的治疗存在时间窗，而且时间窗比较窄，亚低温治 疗时间窗的选择和治疗的可能性是神经细胞恢复的关键。 很多学者认为，应该在脑缺血缺氧后尽快地实施亚低温， 亚低温治疗越早越好。因此寻找合适的亚低温开始干预时 间成为现今研究的一项重要任务。本研究探索了新生仔兔 HIE 发生后的最佳亚低温开始治疗时间的研究，即在 HIE 发 生后 24h 内最早的时间给予亚低温治疗，可使病变处脑温 达到亚低温水平而发挥脑保护治疗作用。 MBP 是中枢神经系统髓鞘膜的主要蛋白4 ，具有神经组织 特异性。MBP 位于髓磷脂浆膜面，与髓鞘脂质紧密结合，维 持 CNS 髓鞘结构和功能的稳定，在神经纤维中起着绝缘和 快速传导的作用。其水平变化可反映脑白质少突胶质细胞 髓鞘损伤的严重程度，是中枢神经系统损害和急性脱髓鞘 的有效生化指标5，6 。当中枢神经系统受损伤脱髓鞘时， 血清或脑脊液中 MBP 含量增高，因此，血清或脑脊液 MBP 的浓度在一定程度上反映了脑白质少突胶质细胞髓鞘损伤 的严重程度7 。且 MBP 的含量增高与髓鞘的破坏程度平 行，故 MBP 可作为判断中枢神经