99mtc示踪法初步研究注射ngf家兔药代动力学(1)

99mTc99mTc 示踪法初步研究注射示踪法初步研究注射 NGFNGF 家兔药家兔药 代动力学代动力学(1)(1) 作者：付昌文，吕天润，曹小建，刘军 【摘要】目的使用 99mTc 示踪初步研究注射用 NGF 在 家兔体内药代动力学。方法将 NGF 用 99mTc 标记，利用同 位素示踪法和 TCA 沉淀法测得 NGF 含量与放射性计数的线 性关系，并由静脉注射至家兔体内，通过上述检测方法得 到不同时段血浆中微量 NGF 浓度，使用 3P87 软件分析药代 动力学参数并初步分析组织分布。结果 NGF 静脉注射后的 家兔体内代谢符合二隔室分布模型；按剂量 40g/kg 静注 后，测得 T1/2=、T1/2=、AUC=hml。结论 99mTc 具有较好的示踪效果，适用于体内药代动力学研究。 【关键词】99mTc-NGF；药代动力学；TCA 沉淀法 【Abstract】ObjectiveTostudythepharmacokineticsofNG Finrabbitbyisotopictracing.MethodsNGFwaslabeledwith 99mTc，andits- raycountswasdetectedbyisotopictracingandtrichloroac eticacidprecipitationmethod.Fromcpmof- rayandNGFcontentofsamples，thestandardcurvewasdrawn anditwasnearlyawasinjectedintorabbitbodyfromvenaaur is.Samplesofrabbitbloodwerecollectedindifferenttime.T hetechniquesabovewereusedtodetectNGFconcentrationin rabbitbloodanddatawereinputtedintocomputertoanalysi sthepharmacokineticparameterbysoftware.ResultsTheme tabolisminvivoconformsthedouble- compartmentsmodel.Withthedoseof40g/kg，thepharmac okineticsparameterswereasthefollows：T1/2=、T1/2 =、AUC=hml。ConclusionThemarkof99mTChasbe ttereffectonpharmacokineticresearchofnervegrowthfac tor. 【Keywords】99mTc-NGF；pharmacokinetics；TCA 神经生长因子（NGF）是神经营养因子家族中最重要的生物 活性物质，其对神经元的生长、发育、分化、再生和功能 表达具有重要的调控作用。现阶段其在应用上已经公认对 脑和脊髓损伤、早老性痴呆13 、糖尿病周围神经性疾 病4等有很好效果。发现者 StanleyCohen 和 RitaLevi- Montalcini 于 1986 年获得诺贝尔医学奖5 。有关 NGF 的 血药浓度检测已有很多报道，但都比较复杂。本文将 NGF 用 99mTc 标记，利用同位素示踪法和 TCA 沉淀法测得 NGF 含量，从而初步研究 NGF 脂质体在家兔体内药代动力学， 以期为其他相关试验及今后的临床应用提供必要的参考资 料。 1 材料与方法 仪器与试剂 仪器 GC-911 射线计数仪（中国科技大学仪器厂） ； UltrospecXX 紫外分光光度仪；DFM-96 多排放射免疫计数 仪（众成电机技术公司） ；FJ-391A1 型活度仪（北京放射性 仪表厂） ；3P97 软件；FA1004 电子天平（上海精科天平） 。 试剂 小鼠颌下腺 NGF（南京军事医学研究所提纯，纯度 98%，文章另发） ；99mTcO4；亚锡（上海化学试剂三厂） ； Kieselgel60F254 硅胶板（德国 EMscience） ；柠檬酸缓冲 液（南京森科医药公司） ；三氯乙酸（南京生兴生物技术公 司分装） ；SephadexG-25。 实验动物实验用新西兰兔。 方法 同位素示踪法与 TCA 沉淀法检测血浆中微量 NGF 用放射性 元素 99mTc 标记 NGF，对 99mTc-NGF 用 TCA 沉淀6 ，然后 对沉淀物进行 计数仪计数，数值与 NGF 的含量存在线性 关系，从而测定在血浆中微量 NGF 的浓度。 标准曲线的制备 99mTcNGF 的制备：配制亚锡 （Sn2）柠檬酸缓冲液（cit） 。取 NGF20ml（含 20mgNGF） 、cit 溶液 100ml 及配制的Sn2-cit 溶液 20ml，将其置于小瓶中，充入氮气 35min，即制备完药箱 置于 4冰箱待标记时取出。加 10mgVitC 于 cit 溶液中， 制备成 10mg/mlVitC 溶液；取出制备的药箱，在其小瓶中 加高锝酸（99mTcO4） ，然后加入配制的 10mg/mlVitC 溶液， 混匀。即制备完 99mTcNGF。 样品经 SephadexG-25 凝胶柱分离纯化，收集各组分，测量 每管的 计数，合并各峰收集组分并取出 60l，加考马 斯亮蓝 R-250 染色，用紫外分光光度仪测定 595nm 处的吸 光度，计算 NGF 的化学量。以收集 99mTc-NGF 峰的总放射 性除以上样层析时的总放射性，即得 99mTc-NGF 的标记率。 99mTc-NGF 峰的总放射性除以该峰的总蛋白质量，即得比活 度。纸层析法测定 99mTc-NGF 的放化纯度。 配制 10ng/ml、50ng/ml、100ng/ml、500ng/ml 及 1000ng/ml99mTc-NGF 溶液各 1 份，各吸取 20ml 于试管中， 加 150l 生理盐水及 30l 兔血清，加 20三氯乙酸 200l，5000rpm 离心 3min。去上清，测定各试管中沉淀 物放射性计数，绘制标准曲线，求回归方程及回归系数。 测定方法的确证通过检测回收率及重复性试验研究证明该 方法的可行性。回收率的测定：配置 99mTc-NGF 浓度为 250、500、750ng/ml 各 5 份，然后按照上述方法（标本处 置同标准）测定实测 99mTc-NGF 的浓度；共进行 5 次计算 该方法及线性关系回收率。每次测定前同时测定标准品沉 淀物的放射性计数并绘制标准曲线以去除核素衰变影响。 精确度的测定：配制成浓度为 250、500、750ng/ml 的 99Tc-NGF 样品各 5 份，按照上述方法（标本处置同标准） 测定 NGF 浓度，每个浓度一天内重复测定 5 次，计算日内 相对标准偏差；每天测定 1 次，连续 5 天测定，计算日间 相对标准偏差，测定当日重新标记和配制标准液。 实验方法 操作当日标记 99mTcNGF，按上述方法测定 放化纯度和比活度。取 5 只等重健康家兔（，雌雄各半） ， 静脉注射 NGF，剂量均为 40mg/kg。快速于一侧耳缘静脉注 射后，压迫止血，立即于另外一侧耳缘静脉用采血针头从 近心端向远心端分别于 30s、1min、3min、5min、10min、15min、30min、1h、 、2