ab-8大孔吸附树脂分离小叶榕叶水提物中黄酮类化合物的研究(1)

AB-8AB-8 大孔吸附树脂分离小叶榕叶水提物大孔吸附树脂分离小叶榕叶水提物 中黄酮类化合物的研究中黄酮类化合物的研究(1)(1) 作者：冯丹丹，王立升，刘力恒，龚福忠，李鑫 【摘要】 目的考察 AB-8 大孔吸附树脂对小叶榕叶水 提物黄酮的吸附解吸性能。方法采用树脂柱进行动态吸附 和解吸小叶榕叶水提物中的黄酮类化合物，用紫外-可见分 光光度法测吸光度，得出吸附率和解吸率。结果 AB-8 大孔 吸附树脂对小叶榕叶水提物黄酮有较高的吸附率和解吸率， 能达到分离纯化的目的。结论 AB-8 能有效富集小叶榕叶中 黄酮类化合物，适用于分离纯化小叶榕叶浸膏以提高其有 效成分。 【关键词】 小叶榕；黄酮；大孔吸附树脂；动态吸附； 动态解吸 Abstract：ObjectiveTostudytheabsorptionanddesorptio nquantityofAB- 8MacroporousResinwithflavonesinaqueousextractsofFic usmicrocarpaspectrophotometrytocheckabsorbanceofsam plewhichdynamicabsorbanddesorbflavonesinaqueousextr actsofFicusmicrocarpaL.f.byresincolumntogettheaborp tionrateanddesorptionMacroporousResinwhichhasprefer ableabsorptionanddesorptioncapacityforflavonoidsina queousextractsofFicusmicrocarpacoudbeusedtopurityth eResinhasthecapabilityofenrichingflavonoidsinFicusm icrocarpavaliditily.ItisfeasibletoappliesAB- 8ResintoraisecompositionsofFicusmicrocarpa Keywords：Ficusmicrocarpa; Flavonoids; Macroporou sresin; Dynamicabsorbing; Dynamicdesorption 小叶榕 Ficusmicrocarpa 为桑科植物榕树，异名落 地金线，是热带雨林中的关键种类。我国榕属植物约一百 种，主要分布在福建、广东、广西、海南、台湾和浙江等 地。研究表明小叶榕叶中主要含黄酮、三萜类、齐墩果酸、 脂肪族化合物和甾体化合物等1 。其中黄酮类等有效成 分对治疗冠心病、老年性痴呆、脑血栓、神经系统疾病和 消除自由基、抗炎、抑菌、抗癌等方面有显著效果，无毒 副作用，并以此开发出多种药品和保健食品。已正式上市 的部颁标准中哮喘和慢性支气管炎治疗药咳特灵胶囊就是 以小叶榕叶浸膏作为主成分的24 。 大孔吸附树脂具有物理化学稳定性高，吸附选择性 强，富集效果好,解吸条件温和，再生简便，使用周期长等 优点，因此，近年来，树脂吸附法得到了长足的发展，被 广泛应用于天然产物的分离纯化511 。郭菁等12 考察了 AB-8 树脂对红花桑寄生总黄酮的饱和吸附量可达 mg/g，动态洗脱率达%，获得产品中黄酮纯度为%，得率为% 。林秋凤等13研究了 AB-8 大孔吸附树脂对金莲花总黄 酮的吸附和解吸特性，纯化后的总黄酮纯度为%，比粗提物 的总黄酮纯度提高了倍，纯化能力与聚酰胺相当。目前国 内外对小叶榕叶总黄酮提取分离的报道较多，但都是采用 石油醚、乙醇、水等溶剂直接浸提或辅以超声波提取 1418 ，未见有使用大孔吸附树脂进行纯化的报道。本 文以小叶榕叶水提物为原料液，选择对植物黄酮类化合物 有较好吸附选择性的 AB-8 大孔吸附树脂1924 ，通过 对小叶榕叶水提物黄酮的动态吸附和动态解吸研究，发现 AB-8 吸附树脂能有效提高小叶榕叶水提物浸膏的黄酮含量， 是一种性能优良、价格低廉、可实现工业化生产的吸附剂。 1 材料与仪器 小叶榕叶水提物浸膏，购于广西南宁市内。标准品 芦丁，南京青泽医药科技开发有限公司（批号：XX0211） ； 其他试剂均为分析纯；AB-8 大孔吸附树脂 天津南开大学化 工厂。2550 紫外可见分光光度计（日本岛津） ；RE-52C 旋 转蒸发仪；BQ50-1J/WX10 恒流泵（保定兰格恒流泵有限公 司） ；分析天平梅特勒-托利多仪器（上海）有限公司 AL204 。 2 方法 树脂的预处理2527将新树脂加水浸泡 24h，用 砂芯柱进行反洗，除掉小颗粒树脂。先用乙醇浸泡充分溶 胀，然后用乙醇洗至流出液加适量水无白色浑浊现象，再 用蒸馏水洗尽醇味，最后转入酸碱处理。即用 5%HCl 浸泡 4h，滤过后蒸馏水洗至近中性。再用 4%NaOH 浸泡 4h，滤过 后蒸馏水洗至近中性。最后用含 4%NaCl 和 4%NaCO3 的混合 溶液浸泡 4h，用蒸馏水反复清洗至中性，备用。 吸附树脂的物理性能树脂吸附性能的优劣是由其化学 和物理结构所决定的，AB-8 大孔吸附树脂的结构性能见表 1。表 1 吸附树脂的物理性能（略） 供试液的制备称取小叶榕叶水提取物 g（含水量为%）,加 8869ml 蒸馏水溶解,静置 4h 以上，减压抽滤，滤液收集备 用。 检测方法 28称取芦丁标准品 mg，用 60%乙醇溶解并定容于 500ml 容量瓶中,摇匀得浓度为 g/ml 的芦丁标准溶液，备 用。分别精取 0， ， ， ， ， ， ，ml 芦丁标准溶液于 8 只 25ml 容量 瓶中，各加入 mol/LNaNO2 溶液 ml，混匀，放置 6min 后加 入 mol/LAlCl3 溶液 ml，摇匀，放置 6min，加入 1mol/LNaOH 溶液 5ml，用 60%乙醇稀释至刻度，以芦丁标准 品为参比，于波长 500nm 处比色测定各吸光度。其结果见 图 1。 数据用最小二乘法进行线性回归，得芦丁溶液 Y 与 吸光度值 X 的关系曲线的回归方程式：Y=9X+3，r=4。用同 种方法，相同条件下测定各样品的吸光度，由对应的吸光 度标准曲线查出相应浓度，并计算样品黄酮浓度。 AB-8 大孔吸附树脂的吸附性能和解吸性能测定 树脂的吸附量和吸附率测定 29测定方法为：准确称取经预处理的树脂各 10g， 含水量均为%，装入 30cmcm 玻璃柱中，控制上样流速为 ml/min,柱底活塞全打开，过柱液流速与上样液流速一致， 收集过柱液，重吸附 1 次使样品液得以与树脂充分接触， 测定最后过柱液中黄酮浓度，按下式计算树脂室温下的吸 附量。 Q=（Co-Cr）V/W 式中：Q 为吸附量，C0 为上样液黄酮浓度，Cr 为过 柱液黄酮浓度，V 为溶液体积，W 为树脂重量。 按下式计算树脂室温下的吸附率（%） 。 q（%）=/C0100% 式中：q 为吸附率，C0 为上样液黄酮浓度，Cr 为过 柱液黄酮浓度。 树脂的解吸率测定按“”方法对充分吸附后的树脂， 控制流速为 ml/min，分别用蒸馏水冲洗至流出液清亮，再 用 50%乙醇水溶液进行洗脱，收集洗脱液，测定醇洗脱液中 黄酮浓度，并根据吸附量计算室温下的解吸率。 树脂解吸率=C2/100% 式中：C0 为上样液黄酮浓度，C1 为过柱液黄酮浓度 C2 为洗脱液黄酮浓度。 AB-8 大孔吸附树脂对小叶榕叶黄酮的动态吸附实验对 AB-8 大孔吸附树脂进行洗脱流速、上样液的 pH 值、上样浓 度、解吸流速、解吸液 pH 以及洗脱剂的浓度、用量等进行 动态吸附实验，将预处理好的树脂装入 cm30cm 玻璃层析 柱中，将已制备好的供试液按一定比例稀释后作为上样原 液上柱，控制一定流速，分步收集过柱液，当流出液黄酮 浓度达泄漏点即上样液的 2/3 时，认为已透过，停止上样， 计算吸附量。 吸附量=上样液浓度流出液体积 3 结果 AB-8 大孔吸附树脂对小叶榕叶黄酮的动态吸附结果 10，11 流速的影响样品溶液通过树脂的流速对工作效率及其 有效成分的吸附均有较大影响。通过调节恒流泵的流速对 上柱溶液进行吸附流速的选择，应以泄漏点最迟出现的吸 附流速为宜19 。因此在样液黄酮浓度均为 4mg/ml，样液 体积均为 100ml 的条件下，控制流速分别为， ， ， ，ml/min 进 行动态吸附。5 种吸附流速下的泄漏情况见图 2 所示。 通过计算可知，若流速为 ml/min 时，泄漏点出现在 80ml 附近，若流速为 ml/min 时，泄漏点出现在 55ml 附近， 若流速为 ml/min 时，泄漏点出现在 45ml 附近，若流速为 ml/min 时，泄漏点出现在 30ml 附近，若流速为 ml/min 时， 泄漏点出现在 20ml 附近。流速为 ml/min 时，虽然泄漏点 出现的最迟，但导致循环周期延长。另对吸附树脂而言， 不仅要求其吸附性能良好，还要追求其良好的洗脱性能， 单一吸附泄漏点的后移，并不代表洗脱的效果也很好，洗 脱效果是决定最佳吸附条件的另一关键。综合考虑吸附效 果及生产周期，建议采用上样流速为 ml/min 进行吸附。 样品液 pH 值的影响提取液的 pH 值是影响树脂纯化效 果的重要因素，其基本原理是中药有效成分在不同 pH 值条 件下溶解性能不同，因而易于吸附或解吸。在样液浓度均 为 mg/ml,样液体积均为 40ml 的条件下，用酸或碱将稀释后 的小叶榕叶供试液调成不同的 pH 值 2，3，4，5，6，7，在 吸附流速为 ml/min 时，分别对其泄漏情况进行比较。结果 见图 3。 通过计算可知，6 种条件下的泄漏点分别为 30，25，20，18，16，14ml。可见，AB-8 对供试液有较大 的吸附量。从吸附量上考虑，pH=的条件下进行吸附比较适 宜。这是由于黄酮类化合物为多羟基酚类，呈弱酸性，因 而，要达到较好的吸附效果，必须在弱酸性条件下吸附。 上样浓度的影响原液浓度也是影响吸附的重要因素， 如果原液浓度过低提纯时间增加，效率降低；原液浓度过 高则泄漏早，处理量小，树脂的再生周期短。各取小叶榕 叶水提物供试液 34，50，67，83ml，分别加