生物安全与防护（用）课件

生物安全与防护 河北省疾病预防控制中心 性病艾滋病防治所 赵翠英 我国实验室生物安全的 法规与标准 1、全国艾滋病检测工作管理办法 2、病原微生物实验室生物安全管理条例 3、医疗废物管理条例及配套文件 4、实验室生物安全通用要求 5、生物安全实验室建筑技术规范 病原微生物实验室生物安全管 理条例及其配套文件 病原微生物实验室生物安全管 理条例 国务院第424号令 2004年11月12日起实施 人间传染的病原微生物名录 卫生部（卫科教发200615号） 2006年1月11日发布 病原微生物实验室生物安全管理 条例及其配套文件 可感染人类的高致病性病原微生物菌（毒）种 或样本运输管理规定 卫生部第45号令 2006年2月1日起施行 人间传染的高致病性病原微生物实验室和实验 活动生物安全审批管理办法 卫生部第50号令 2006年8月15日起施行 一、病原微生物的分类 及管理 国家根据病原微生物的传染性、感染后对个体或者 群体的危害程度，将病原微生物分为四类： 第一类病原微生物 第二类病原微生物 第三类病原微生物 第四类病原微生物 第一类、第二类病原微生物统称为高致病性病原微生 物。 （一）病原微生物的分类 （二）病原微生物样样本采集 n 具有与采集病原微生物标本所需要的生物安全防护 水平相适应的设备； n 具有掌握相关专业知识和操作技能的工作人员； n 具有有效的防止病原微生物扩散和感染的措施； n 具有保证病原微生物样本质量的技术方法和手段。 n 样本的来源、采集过程和方法等作详细记录。 （三）高致病性病原微生物菌（毒） 种或者样本运输 u陆路、水路和航空 u具备的基本条件：符合规定、运输容器、生 物危险标识 u运输审批权限：省级卫生（兽医）部门（省 内），部级（省际和国际），出入境检疫机 构、航空主管部门 u运输过程：不少于2人，不得使用公共电（汽 ）车和城市铁路 u承运单位：批准文件和安全措施 卫生部第45号令 可感染人类的高致病性病原微生物菌 （毒）种或样本运输管理规定 2006年2月1日起施行 国务院卫生主管部门或者兽医主管部门指定的菌 （毒）种保藏中心或者专业实验室保藏机构 u集中储存并提供病原微生物菌（毒）种和样本 u严格的安全保管制度 u储存、提供菌（毒）种和样本不得收取任何费用 u保藏机构管理办法由部级主管部门制定 u保藏机构凭条例规定的批文接受、提供 u实验室依条例规定提交、销毁 （四）病原微生物菌（毒）种和样本的 储存和管理 （五）高致病性病原微生物菌（毒） 种或者样本发生意外 u高致病性病原微生物菌（毒）种或者 样本在运输、储存中被盗、被抢、丢失 、泄漏的，承运单位、护送人、保藏机 构应当采取必要的控制措施。 u事故报告 ！2 小时内 1 小时内 事故报告： 承运单位、护送人、保藏机构 v在小时内分别向承运单位的主管部门、护送人 所在单位和保藏机构的主管部门报告，同时向所 在地的县级人民政府卫生主管部门或者兽医主管 部门报告 v县级人民政府应当在接到报告后小时内向设区 的市级人民政府或者上一级人民政府报告；设区 的市级人民政府应当在接到报告后小时内向省 、自治区、直辖市人民政府报告。 v省、自治区、直辖市人民政府应当在接到报告后 小时内，向国务院卫生主管部门或者兽医主管 部门报告。 二、实验室的设立 与管理 （一）实验室分级 国家根据实验室对病原微生物的生物安全 防护水平，并依照实验室生物安全国家标准 的规定，将实验室分为一级、二级、三级、 四级。 （二）实验室的设立 v新建、改建、扩建三级、四级实验室或者生 产、进口移动式三级、四级实验室应当遵守 下列规定： v三级、四级实验室应当通过实验室国家认可 。 v相应级别的生物安全实验室证书 v有效期5年 三、实验室生物安全 生物安全危害评估概念 (Risk assessment) 生物安全危害评估是指实验室工 作人员处理致病微生物及其毒素时 ，对可能给人或环境带来的危害所 进行的评估，包括对微生物危险性 和防护屏障的评估。 目 的 危害评估是为了确定某种微生物 实验过程中的危险所在，危险性大 小，以及如何避免和防护危险的发 生，达到保护人、物和环境的目的 。 危害评估的主要方法 v专家判断是危害评估的主要方法 v危害评估是生物安全的精髓 v相关领域的专家共同负责完成危害评估 v专家要了解微生物的特性、所用仪器设备和 操作步骤、动物模型和可用的隔离设备设施 微生物危险性分组依据 1、致病性， 2、传播途径， 3、宿主范围， 4、群体免疫力 5、有效药物治疗 微生物划分为4类 1、第一类病原微生物，是指能够引起人类 或者动物非常严重疾病的微生物，以及我 国尚未发现或者已经宣布消灭的微生物。 2、第二类病原微生物，是指能够引起人类 或者动物严重疾病，比较容易直接或者间 接在人与人、动物与人、动物与动物间传 播的微生物。 微生物划分为4类 3、 第三类病原微生物，是指能够引起人类或者动物 疾病，但一般情况下对人、动物或者环境不构成严 重危害，传播风险有限，实验室感染后很少引起严 重疾病，并且具备有效治疗和预防措施的微生物。 4、 第四类病原微生物，是指在通常情况下不会引 起人类或者动物疾病的微生物。 第一类、第二类病原微生物统称为高致病性病原微 生物 艾滋病毒 序 号 病原菌名称 危害程 度分类 实验活动所需生物安全实验室级别 运输包装分类 e 备 注 学名中文名 大量活 菌操作a 动物感 染实验b 样本检 测c 非感染性 材料的实 验d A/B UN 编号 7Mycobacterium tuberculosis 结核分枝 杆菌 第二类 BSL-3 ABSL-3BSL-2BSL-1AUN 2814 结核分枝杆菌 生物安全防护评估 v生物安全防护的内容主要包括三道屏障 。 v各级实验室的生物安全防护要求分为四 级，一级最低，四级最高。不同级别生 物安全防护对三道屏障的要求标准不一 样。 生物安全防护实验室 通过三道屏障： 第一：生物安全设备和个体防护装置； 第二：实验室设施。实验室特殊设计和建 设要求； 第三：实验室管理制度（软件部分）。包 括标准化操作程序和严格实验室管理。 生物安全防护实验室 达到三个目的： v确保操作生物危险因子的工作人员不受 实验对象的伤害-人 v确保周围环境不受其污染-环境 v确保实验因子保持原有本性（不受污染 ）-物 二级生物安全实验室 要求 第一道屏障 ( Safety Equipment- Primary Barriers) 1、生物安全柜（II级）。除了生物安全I级的 安全设备，还要有生物安全柜（II级） 用于涉及下列传染物的危险操作： 气溶胶和溅洒物 数量大的污染物 浓度高的污染物 第一道屏障 ( Safety Equipment- Primary Barriers) 2、消毒装置： 应设置实施各种消毒方法的设施，如 高压灭菌锅、化学消毒装置等对废弃物进行处理 3、应设置洗眼装置。 4、防护衣： 在实验室中应穿着工作服或罩衫等防 护服。离开实验室时，防护服必须脱下并留在实验 室内。不得穿着外出，更不能携带回家。用过的工 作服应先在实验室中消毒，然后统一洗涤或丢弃。 第一道屏障 ( Safety Equipment -Primary Barriers) 5、手套：当手可能接触感染材料、污 染的表面或设备时应戴手套。如可能 发生感染性材料的溢出或溅出，宜戴 两副手套。不得戴着手套离开实验室 。工作完全结束后方可除去手套。一 次性手套不得清洗和再次使用。 6、一次性帽子、口罩、隔离衣等 第二道屏障 (Laboratory Facilities - Secondary Barriers) 1、洗手池：每个实验室 应设洗手池，宜设置在靠 近出口处 2、表面要求：实验室围 护结构内表面应易于清洁 。地面应防滑、无缝隙， 不得铺设地毯。 第二道屏障 (Laboratory Facilities - Secondary Barriers) 3、台表面要求：实验台表面应不透水，耐腐 蚀、耐热。实验室中的家具应牢固。为易于 清洁，各种家具和设备之间应保持一定间隙 。应有专门放置生物废弃物容器的台(架)。 第二道屏障 (Laboratory Facilities -Secondary Barriers) 4、三区分开：实验室的设施结构和通风 设计构成二级防护屏障。一般把实验 室分为清洁区、半污染和污染三个区 。 5、应通风，如使用窗户自然通风，应有 防虫纱窗 第二道屏障 6、实验室门宜带锁、可自动关闭 7、实验室出口应有发光指示标志 8、实验室宜有不少于每小时34次 的通风换气次数。 第三道屏障 实验室管理制度（软件部 分）构成生物安全防护的第三 道屏障。包括标准化操作程序 和严格实验室管理制度。 必须在生物安全二级(BSL2) 实验室或全排式生物安全柜 中进行 l、含漱液、血清和血液等样品的诊断检测； 2、溶解、固定或用其他方法处理灭活的病毒和( 或)无传染性 的病毒基因片段； 3、常规的细菌和毒素检查； 4、可能产生气溶胶的样品处理： 5、临床样品的包装、分装； 6、离心管和离心机转头的封闭和开启 必须在生物安全3级(BSL3) 以上级实验室中进行 l、用细胞培养方法分离病毒； 2、收集或浓缩病毒或其培养产物； 3、用活病毒或病毒的全基因接种动 物； BSL-1 1.实验中门应关闭，对外人进入不特别禁止 2.可按普通微生物实验进行 BSL-2 1.禁止外人进入实验区域 2.可能发生气溶胶的实验在级生物安全柜中进行 3.备有高压灭菌器 BSL-3 1.设有双重门或气闸室和外部隔离的实验区域 2.非本处工作人员禁止入内 3.实验室内全部负压 4.使用级生物安全柜进行实验 5.经高效过滤器把室内空气过滤后排到室外 BSL-4 1.采用在独立建筑物内用隔离区和外部隔断的构造 2.室内保持负压 3.使用级生物安全柜进行实验 4.设置空气隔断装置、淋浴室 5.操作工作人员应穿防护服 6.非本处工作人员禁止入内 各级实验室物理学隔离要点 物理学隔离 一次隔离：把危险微生物隔离在一定空间内的 措施，危险微生物与操作者的隔离，其目的是防 止操作者被感染。 二次隔离：防止危险微生物泄露到外部环境的 措施，实验室与外界之间的隔离，其目的是防止 实验室外人员被感染。 微生物和生物医药实验室中 ，生物安全柜是最重要的安全 设备，形成了最主要的防护屏 障 。 四、生物安全柜 生物安全柜 Biological safety cabinets (BSCs) 操作危险性微生物 时所用的箱形空气净化 安全装置，保护使用者 和环境不受因为操作产 生的有害危险物质和微 生物气溶胶的伤害。生 物安全柜按防护水平分 为I级、II级、III级。 生物安全柜分类 型 式 构造 分类 级别 适用 级别 开口面风速 （m/s） 防护 对象 部 分 隔 离 1.排气侧带高效过滤器； 2.从前面开口处流入高速空气以防止 气溶胶逸出； 3.柜内空气不循环 BSL-1 BSL -3 0.38操作者 1.层流方式； 2.前门开口处有空气幕，防止气溶胶 外逸，确保操作人员安全； 3.送入柜内空气经高效过滤器，防止 污染实验 -A -B BSL-1 BSL -3 0.38 0.50 操作者 和产品 1.手套箱方式； 2.在柜内保持负压，通过手套操作 BSL-41首先操 作人员 同时兼 顾产品 Class I 生物安全柜 v可开启前窗在负压下操作 v表面风速在0.38m/s v排出的气体经HEPA 过滤 v保护操作人员和环境 v适用于要求生物安全等级 1、2、3的工作 适用于样品不需保护的 实验工作 Class II 生物安全柜 Type A1 不带排风 管路 最小流速为 0.38 m/s 满足生物安全等级 1、2、3的要求 不涉及放射性 物质 不涉及挥发性有 害化学品 建议不应有明火 A1型生物安全柜不适于操作挥发性有毒化学物质 和挥发性放射性核素 Class II 生物安全柜 满足生物安全等级 1、2、3的要求 工作区域的后部可使用 少量的放射性物质 工作区域的后部可使用 少量的挥发性有害化学 品 Type B1Type B1 最小表面风速 100 fpm 建议不应有明火 适用于： 含有微量挥发性有毒化学物质或痕量放射性核素的微生物学研究 Class II生物安全柜 满足生物安全等级 适用于放射性物质 适用于挥发性有害 化学品 建议不应有明火 Type B2 全排风 适于于： 进行含有挥发性有毒化学物质和放射性核素的微生物学研究工作 III级生物安全柜 III级生物安全柜 生物安全柜类型 I 级：气流向内保护工作者 排风排到室外 （经过/不经过高效过滤） II 级：保护工作者、产品和环境。创造“无菌” 工作区 用于使用气溶胶传播微生物的工作 还用来进行组织培养/滤过性微生物实验 III 级：完全封闭、通风、气密 用于使用生物安全III/IV级物质的工作 II 级生物安全柜 A型：30排风排到房间 B3型：30排风排到室外 B1型：70排风排到室外 B2型：100排风排到室外 生物安全柜 操作位置 与其他工作区隔离 远离过道 远离风道。 远离实验室进门。 生物安全柜 操作步骤 1.将所需物品装入生物安全柜。 2.启动生物安全柜让其运行1015分钟。 3.使用一片薄纸检查进入气流。 4.直接进入生物安全柜完成工作，工作时动作要慢，要 有条不紊。 5.工作最后，将所有要拿出生物安全柜的物品消毒。 6.对生物安全柜内部消毒。 7.让生物安全柜运行1015分钟。 8.关机。 生物安全柜 安全运行 始终是直接进入安全柜，不要有吹扫行动。 在柜内将原料放好，不要放在前部格栅上。 将废弃物丢在柜内废物缸内。 将原料移出安全柜之前要消毒。 生物安全柜 安全运行 不要设计用来使用化学药品。 可以用于非挥发性有毒化学药品或者低 能级放射性材料。 可以用于小剂量挥发性化学药品。 保证每年验证。 启动之前将所有原料放入安全柜。 生物安全柜安全 运行警告 q化学药品会损害高效过滤器。 接触风险化学/感染物质 q高效过滤器不能捕捉挥发性化学药品 如果排不出去就会接触到人 q 生物安全柜风机不能防火花。 化学药品的使用会导致失火/爆炸 组织管理 管理责任制 单位法人责任制 成立领导小组 制定管理制度 监督有关法规和操作规程的执行 实验室主任（项目负责人责任制） 有权决定本部门进入实验室的工作人员 孕妇、不健康者和无关人员不得进入实验室 所有人员经培训、考核合格后方可从事此项工作 实验室入口处贴上生物安全实验室标志和负责人的姓 名和电话号码 规章制度 通风空调净化系统、灭菌系统设施的验证与验 收规程 实验室准入制度 实验室高压、消毒规程 实验室突发事故处理规程 实验室设施、设备的监测、检测和维护制度 严格的更衣程序 健康医疗监督 实验人员须身体健康，实验前进行体检 ，采集并保留血清 健康体检制度，要定期进行健康体检 操作人员培训要求 涉及危险微生物菌毒种操作的实验室工作人 员、外来合作者、进修和学习人员在进入实验 室及其岗位之前经过书面批准； 上述实验室的工作人员受过专业教育的技术人 员，有档案（学历证书）记录； 工作人员在独立进行工作前进行上岗培训并有 培训记录以及合格证明； 实验室的工作人员被告知实验室工作的潜在危 险并接受实验室安全教育，自愿从事实验室工 作并有书面知情同意书。 五、艾滋病实验室操作 注意事项 尽力减少利器的使用 v 利器包括注射器、针头、刀片、玻璃制品、 载玻片等，它们在接触传染性材料后非常危 险，应用时需特别小心。如果有可能最好不 要在HIV实验室使用这些利器或使用替代品 ，如塑料移液管。 严格而又不断更新的培训 所有工作人员都必须经过培训（包括上 岗培训和复训），并要接受实验室管理人员 的监督，实验室的上级专家要对工作安全及 整洁安全的工作环境负责，所有工作人员均 有责任保证自己和他人的工作安全。 高标准的个人保健 v1、高标准的个人保健对于减少感染的危险性很重 要。皮肤受损、患病都会增加感染的危险性。 v2、很小的伤口和擦伤都应以防水的敷料覆盖。 v3、患有急性疾病和严重慢性疾病的工作人员不应 进入P3实验室。 v4、在进入HIV检测实验室时，要穿侧面和背面能系 紧的隔离衣，戴一次性手套，如接触物传染性危险 大，可戴两付手套以增加保护。 5、进实验室前要摘除首饰，修剪长的、带刺 的手指甲，以免刺破手套。 v6、在脱去隔离衣、离开实验室前必须洗手 。 v7、在实验室工作的人员应尽量避免用可能 已受到污染的手套触摸面部。 v8、在有危险化学品溅出或爆炸可能时，应 配戴安全眼镜和面罩，例如把样品管移出液 氮时。 9、严禁在HIV和相关实验室用嘴吸取液体 。严禁在实验室内吃、喝、吸烟。 10、HIV检测实验室工作人员应享有职业安 全保险。 11、HIV检测实验室工作人员一旦因工作中 意外事故可能造成感染时，国家将按照医 务人员艾滋病病毒职业暴露防护工作指导原 则（试行）和中国疾病预防控制中心关 于下拨艾滋病病毒职业暴露防护用药的通知 等的有关规定为其提供免费抗病毒药物治 疗。 完善实验室管理制度 v严格执行实验室工作人员年度采血检测HIV 抗体和备案制度。 v所有工作人员应佩戴一目了然的标志。包括 照片、姓名和在岗有效期。 v来访的客人应分发身份标牌，对于陪同人员 和进出的清洁工也应和正常的工作人员一样 佩戴醒目的标志。 监控存放生物试剂和有毒物区域 v所有进入实验室的人员（包括来访者、维护工人、 修理工和其它只进入一次或偶尔进入的人员）都应 作记录，可以持钥匙卡或在记录本上签名。 v冷藏柜、冰箱、培养箱和存放生物试剂、化学危险 品、放射性物质的容器置于工作人员视线之外的地 点时应上锁 v应设有专门储存阳性血的低温冰柜，并应上锁。 掌握有效的消毒方法 v污染材料或可能造成污染的材料在被带出实 验室前应进行消毒。 v消毒不能代替灭菌或整个清洁活动,消毒通常 被用作表面清洁或作为使用前做的安全工作 。主要采用的消毒方法如下: v1、化学消毒 v2、熏蒸消毒 v3、高压蒸汽消毒（高压消毒） 艾滋病病毒职业 暴露防护 一、定义 v职业职业 暴露是指在从事艾滋病防治工作 及执行相关工作的过程中，意外被艾滋 病病毒感染者或艾滋病患者的血液、体 液污染了破损的皮肤或粘膜，或被含有 艾滋病病毒的血液、体液污染了的针头 及其它锐器刺破皮肤，从而可能被艾滋 病病毒感染的情况。 二、危险性评估 v发生艾滋病病毒职业暴露后，应对 暴露级别和暴露源病毒载量水平进 行评估和确定。 （一）暴露级别 v根据与暴露源（含有艾滋病病毒的体液 、血液或者含有体液、血液的医疗器械 、物品）的接触方式的不同，将艾滋病 病毒职业暴露级别分为三级。 1、一级暴露： 有损伤的皮肤或者粘膜沾染了暴露 源，暴露量小且暴露时间较短。 2、二级暴露： 有损伤的皮肤或者粘膜沾染了暴露源， 暴露量大且暴露时间较长； 或者暴露类型为暴露源刺伤或者割伤皮 肤，但损伤程度较轻，为表皮擦伤或者 针刺伤。 3、三级暴露： 暴露源刺伤或者割伤皮肤，且损伤程度 较重，为深部伤口或者割伤物有明显可 见的血液。 （二）暴露源病毒载量水平 1、暴露源为艾滋病病毒阳性，但 滴度低、艾滋病病毒感染者无临床 症状、CD4计数正常者，为轻度类 型。 （二）暴露源病毒载量水平 2、暴露源为艾滋病病毒阳性，且 滴度高、艾滋病病毒感染者有临床 症状、CD4计数低者，为重度类型。 3、不能确定暴露源是否为艾滋病病 毒阳性者，为暴露源不明型 三、暴露后的应急处理 （一）紧急局部处理措施 v1、用肥皂和水清洗沾污的皮肤，用生 理盐水冲洗粘膜。 v2、如有伤口，应轻轻挤压，尽可能挤 出损伤处的血液，用肥皂水或清水冲洗 。 （一）紧急局部处理措施 v3、受伤部位的消毒：伤口用消毒液（ 如70%酒精，0.2-0.5%过氧乙酸，0.5% 碘伏等）浸泡或涂抹消毒，并包扎伤口 。被暴露的粘膜，应用生理盐水或清水 冲洗干净。 （二）预防性用药 1、用药时间 预防性用药应当在发生艾滋病病毒职 业暴露后尽早开始，最好在4小时内实 施，最迟不得超过24小时；超过24小时 的，也应当实施预防性用药。 2、用药原则 v发生一级暴露且暴露源病毒载量水平为 轻度时，可以不使用预防性用药； v发生一级暴露但暴露源病毒载量水平为 重度或者发生二级暴露但暴露源病毒载 量水平为轻度时，使用基本用药程序。 2、用药原则 v发生二级暴露且暴露源病毒载量水平 为重度或者发生三级暴露且暴露源病 毒载量水平为轻度或重度时，使用强