抗体谱项目ppt课件

*1 单击此处编辑母版标 题样式 单击此处编辑母版副标题样式 幽门螺杆菌幽门螺杆菌 抗体谱检测抗体谱检测 杭州美联生物科技有限公司 一、幽门螺杆菌(HP) 二、HP与疾病的关系 三、HP诊断方法介绍 四、HP抗体谱检测 一、幽门螺杆菌(Helicobacter pylori，HP)概述 nHP是一种单极、多鞭 毛、末端钝圆、螺旋形 弯曲的细菌。 n寄居在胃幽门附近胃窦 黏膜上的革兰氏阴性杆 菌。 2005年的诺贝尔生理学或医 学奖授予了澳大利亚科学家 沃伦和马歇尔。因为他们发 现了导致胃炎和胃溃疡的细 菌-幽门螺杆菌。 该研究使人们认识到胃溃疡是一种细菌感染性疾病 。90%的十二指肠溃疡和80%的胃溃疡都是由幽门螺旋 杆菌引起的。 HP的生物学特性(一) nHP的尿素酶(Ure)极为丰富， 约含菌体蛋白的15%，活性相 当于变形杆菌的400倍。 nUre催化尿素水解形成氨云保 护细菌在高酸环境下生存。 HP导致的胃部疾病 nHP与胃炎 nHP与消化性溃疡 nHP与胃癌 西 欧 30-50% 东欧 70-90% 美国/加拿大 30-40% 亚洲 70-80% 拉丁美洲 70-90% 非 洲 70-90% 澳大利亚 20% 世界范围内HP流行病学调查结果 n我国HP感染率高达80%。在儿童期每年以3%-10%的 速度上升，至10岁时已达到40%-60%。 n据流行病学调查，浙江地区幽门螺杆菌感染率为74% 。 nHP感染越早，患胃癌的可能性越大。凡是儿童HP感染 率高的地区成人胃癌发病率也高。 国内HP感染情况 HP感染和胃癌 HP感染 慢性胃炎 萎缩型胃炎 肠上皮化生 不典型增生 胃癌 早诊早治是关键！ 医学专家认为： 对幽门螺杆菌感染的早期发现和及时 治疗是防治慢性萎缩性胃炎、胃癌的关 键环节。 三、HP诊断方法介绍 Hp感染诊断方法：侵入性方法 n侵入性检测方法：依赖于胃镜活检 快速尿素酶试验(RUT) 胃黏膜直接涂片染色镜检 胃黏膜组织切片染色镜检细菌培养 基因检测方法(如PCR、寡核苷酸探针杂交等) 免疫检测尿素酶 (IRUT) (内镜与活检钳消毒不严格可造成医源感染) Hp感染诊断方法：非侵入性方法 n非侵入性检测方法：不依赖内镜检查 13C或14C尿素呼气试验(UBT) 15尿氨排泄试验 粪便Hp抗原检测、 血清及分泌物（唾液、尿液等）抗体检测 基因芯片和蛋白芯片检测 (病人依从性较好) 组织细胞学：光镜法、电镜法 n光镜法 优点：直观，易确证HP感染。 缺点：技术要求较高，费用较贵，易出现假阴性结果。 n电镜法 优点：可观察幽门螺杆菌的形态、结构、特征及与胃黏膜 上皮细胞间的关系。 缺点：受到设备条件限制及费时、费事、费用很高。 微生物学：快速尿素酶试验、分离培养 n快速尿素酶试验(RUT) 优点：试剂价廉，反应迅速。 缺点：创伤性；取样要求高；有假阴性的可能。 n分离培养 优点：形态学和生化学方法鉴定，精确。 缺点：需要一些特殊条件，可致假阴性结果。 同位素跟踪：13C或14C尿素呼气试验(UBT) 优点：体内测定胃内感染幽门螺杆菌的总体情况，可做 定性和定量测定。 缺点：13C设备和试剂价格昂贵；14C有可能对机体造 成慢性、长期的内照射损伤，孕妇、小孩特别不 宜使用，成人亦应慎用。 受设备灵敏度制约存在假阴性结果，其他菌株产 生相关代谢产物导致假阳性。 血清学：抗体检测 优点：操作简单。 缺点：项目单一，耗时。 分子生物学：PCR 优点：高敏感性。 缺点：实验条件高，易出现假阳性结果。 生物芯片技术：蛋白芯片 优点：低创伤、适应广范群体、 特异性、灵敏性好、 高通量、多指标、 微型化和自动化。 缺点：除菌治疗后，阳性结果会持续一段时间。 建议复查时结合其他检测手段 四、HP抗体谱检测 HP抗体谱检测项目 检测项检测项 目临临 床 意 义义 CagA-IgG 阳性提示感染HP CagA+毒力株，致病力较强，需治疗 。 VacA-IgG 阳性提示感染HP VacA+毒力株，致病力较强，需治疗 。 Ure-IgG阳性提示感染HP。 Hsp60-IgG 阳性与胃炎的严重程度及胃癌发生关系密切，需治疗 。 RdxA-IgG阳性提示HP对甲硝唑类药 物敏感。 HP芯片快速检测 （200ul血清，同时检测5项指标） AgAg Ab G-H 加样反应结果 Ag 芯片工作原理示意图 HP抗体谱检测芯片特点： 快速 准确 简便 检测结果及意义 检测项检测项 目（IgG）检测结检测结 果 （+）（-） 1CagA 细胞毒素相 关蛋白 提示感染的Hp毒力较强，需根除 治疗。 无CagA菌株感染。 2VacA 空泡毒素相 关蛋白 提示感染的Hp毒力较强，需根除 治疗。 无VacA菌株感染。 3Ure尿素酶 提示曾经感染Hp，而从未治疗 者可视为现 症感染。参考项 目1、2进行治疗。 正常，无Hp感染。 4Hsp60 热休克蛋白 60 与胃炎严重程度及胃癌发生密切 相关，需根除治疗。 正常。 5RdxA硝基还原酶可用甲硝唑类药 物治疗。 甲硝唑类药 物耐药 。 检测项目 敏感性(%) (范围) 特异性(%) (范围) 细菌培养 45(3951)98(92100) 病理切片染色 70(6674)90(8594) 快速尿素酶试验 67(6470)93(9096) 尿素呼气试验 93(9095)92(8792) 血清HP抗体检测88(8590)69(6275) HP检测方法的敏感性和特异性比较 HP芯片的敏感性和特异性比较 （与传统ELISA法） 检测项目敏感性(%) 特异性(%) Ure-IgG99.798.8 CagA-IgG99.699.7 VacA-IgG99.499.7 Hsp60-IgG98.998.6 RdxA-IgG99.899.9 HP芯片检测临床意义 1、对于门诊常规检测(UBT或RUT)阳性病人进 行分流。 2、判断胃部病变的严重程度和预后。 3、判断是否进行常规疗程的抗HP治疗，使用何 种治疗方案。 4、判断治疗效果（治疗前后滴度数值改变）。 HP芯片检测适用范围： n急慢性胃炎、胃溃疡、胃癌等多种疾病的 诊断及辅助诊断； nHP感染治疗药物选择与疗效观察； n普通人群健康体检； nHP感染血清流行病学调查。 n 现有检测方法如镜检、培养、RUT、UBT、PCR等只 能查有无HP感染，而是否致病无法判断，故检测的临 床意义不大。 n流行病学调查显示，约40%的感染者体内HP并不致病， 无需治疗。 nHp的耐药性是HP根除治疗失败的主要原因。通过耐 药检测才能确保治疗效果。 n研究发现胃癌患者中Hsp60抗体阳性率超过70%，提 示Hsp60与癌症胃癌密切相关。 小结 小结 n生物芯片技术的高通量特点，改善了传统检测方法的劣势 。利用芯片技术可以同时快速检测幽门螺杆菌相关的多种 抗体，获得一个动态的、连续的抗体谱。 n不仅能提高