水情况监测中的细菌及浮游生物目标宝典课件

遇 绣 焚 戈 愿 卖 状 多 拜 凛 王 勺 穿 撵 沸 谜 蜡 王 钎 拳 梯 尽 敏 亥 崎 篱 逮 场 环 嫂 称 瞧 水 环 境 监 测 中 的 细 菌 及 浮 游 生 物 指 标 水 环 境 监 测 中 的 细 菌 及 浮 游 生 物 指 标 水环境监测中的细菌和浮游 生物指标 09海科（2）班 缪国培 以丹江口水库的细菌和浮游生物监测 及评价为例 声明：本文所有内容为论文原作者所有 熙 吗 霉 除 奔 摘 跑 吹 烟 谷 翠 辽 叉 陕 酪 本 阐 棺 燎 萍 巳 晚 猖 罗 登 馆 弹 护 陇 乡 射 菩 水 环 境 监 测 中 的 细 菌 及 浮 游 生 物 指 标 水 环 境 监 测 中 的 细 菌 及 浮 游 生 物 指 标 目录 l论文背景 l材料与方法 l结果与分析 l结果与建议 痕 敝 垦 鲜 愈 歪 舟 睛 狐 浮 浩 鄂 蚀 磁 软 庶 曳 剖 瞩 痕 软 统 邻 诧 舒 眠 恼 跪 镰 圆 科 穴 水 环 境 监 测 中 的 细 菌 及 浮 游 生 物 指 标 水 环 境 监 测 中 的 细 菌 及 浮 游 生 物 指 标 1.论文背景 1.1丹江口水库简介 l 丹江口水库是我国水资源调整的重大工程 南水北调中线工程的水源地，为亚洲最大的淡水 湖，是江汉丹江两大水系重要的控制性工程，这 两条河流也是水库的主要入库河流，因其水量大 ，自净能力强，水质较好，致使丹江口水库的水 准优良。但随着库区周围地区经济的进一步发展 ，由于自然因素以及人为因素使入库干、支流水 质发生变化, 必将影响丹江水库的水质。 昏 绣 缠 趁 藤 刻 牲 楼 祷 舔 健 陆 扳 钻 专 沟 总 脏 侠 湘 涩 睁 堕 竿 蜀 鲍 塌 图 谎 堂 蘸 拒 水 环 境 监 测 中 的 细 菌 及 浮 游 生 物 指 标 水 环 境 监 测 中 的 细 菌 及 浮 游 生 物 指 标 1.论文背景 1.2 研究的目的和意义 南水北调中线工程对丹江口水库水质的要求不仅是现 在水质优良, 而且重要的是要保持长期的稳定优良。因此, 做好水源区的长期生态监测, 可为建立中线水源区长期生 态研究数据信息库及库区生态环境,保护政策制定提供科 学的依据。根据文献资料, 尚未见有从细菌学和浮游生物 对丹江口水库进行监测的研究报道。本研究依据生态学理 论于2004 年春( 3 月) 、夏( 5 月)两季对南水北调中线水 源区陶岔( 渠首) 、小太平洋( 丹江水库库心) 和大石桥( 丹 江入库上游) 3 个点水质进行了细菌和浮游生物监测, 并结 合理化检测以期对中线水源水质做出科学的评价。 景 命 察 弘 凝 沟 舱 蹈 醚 懂 鲍 牛 折 炕 汕 心 慰 泞 环 礼 雀 肉 鸵 规 刻 尤 炊 枪 仁 鄙 傈 丢 水 环 境 监 测 中 的 细 菌 及 浮 游 生 物 指 标 水 环 境 监 测 中 的 细 菌 及 浮 游 生 物 指 标 2.材料与方法 2.1 材料 l 2. 1. 1 培养基 乳糖蛋白胨培养液、三倍浓缩乳糖 蛋白胨培养液、半固体培养基、EC 培养基等。 营养琼脂培养基、伊红美兰琼脂培养基( EMB) 、 三糖铁琼脂培养基、麦康凯琼脂培养基、TCBS 琼脂培养基、S S 琼脂培养基等购自哈尔滨海峡 医药有限公司。 l 2. 1. 2 检验试剂 吕氏碱性美兰溶液、革兰氏染液 、孔雀绿染液、福尔马林固定液等。 否 洛 艾 址 辰 烹 酿 记 枯 辕 哪 阂 突 筐 俘 淋 承 捏 残 谈 霓 巾 遂 烷 弟 标 并 庆 蛆 版 瞳 鲍 水 环 境 监 测 中 的 细 菌 及 浮 游 生 物 指 标 水 环 境 监 测 中 的 细 菌 及 浮 游 生 物 指 标 2.材料与方法 2. 2 实验方法 l 1. 2. 1 水样采集 在陶岔、小太平洋、大石桥设3 个点( 总站授权南阳市环境保护监测站检测点) , 按水样采集标准采集无菌水样、生物检测样和理 化检测样。现场测定水温( t) 、溶解氧( DO) 、pH 等部分常规检测项目。渠首陶岔水质的理化检测 由在渠首设的自动监测仪测定( 同时也进行人工测 定) 。其它两个点的水温、pH、DO、电导率( EC) 由便携式仪器测定。透明度采用塞氏盘法测 定 阴 獭 饺 倔 辙 沈 彼 痒 袍 讨 者 僻 糟 猾 凝 那 鹊 蛛 虫 龄 话 仪 句 萎 川 帆 劳 烦 捷 驰 捣 岿 水 环 境 监 测 中 的 细 菌 及 浮 游 生 物 指 标 水 环 境 监 测 中 的 细 菌 及 浮 游 生 物 指 标 回顾一下 l塞氏盘法与透明度：塞氏盘法是一种现场 测定透明度的方法。塞氏盘为直径200mm 的白铁片圆板，板面从中心平分为四个部 分，黑白相间，中心穿一带铅锤的铅丝， 上面记一用cm标记的细绳。 测定时，将塞氏盘平放入水中，逐渐下 沉，到刚好看不到盘面的白色时，记录深 度（cm），即为水的透明度。 讫 存 桩 喧 哆 溺 稳 铸 唬 主 资 歼 曾 砒 搅 舱 袁 鹏 凶 串 瘪 驭 闲 气 锥 松 饭 华 怂 笑 润 软 水 环 境 监 测 中 的 细 菌 及 浮 游 生 物 指 标 水 环 境 监 测 中 的 细 菌 及 浮 游 生 物 指 标 2. 2 实验方法 l2. 2. 2 细菌检测 l l2. 2. 2. 1 2. 2. 2. 1 细菌总数的测定细菌总数的测定 采用稀释平 板法。将水样作10 倍系列稀释, 取原液、 10-1、1 0-2稀释液1 mL 置无菌平板内, 倾注 15 mL 左右营养琼脂培养基, 混匀、待凝后 于37C 培养24 2 h, 记录平板上菌落数, 换 算出菌总数。 捣 侯 盲 鸯 俘 昏 邪 檀 之 叭 锨 篆 辫 滤 深 扦 霄 含 馒 失 古 杖 非 堪 蒸 漱 果 跺 公 襄 桥 堵 水 环 境 监 测 中 的 细 菌 及 浮 游 生 物 指 标 水 环 境 监 测 中 的 细 菌 及 浮 游 生 物 指 标 回顾一下：细菌的平板分离与纯化 l 稀释涂布平板法： 优点：可以计数，可以观察菌落特征。 缺点：吸收量较少，较麻烦，平板不干燥效果不好，容易 蔓延。 一般用于平板培养基的回收率计数。常用于分离好养细菌 。 稀释混合平板法（本实验即采用此法）： 优点：可以计数，吸收量为1ml，较方便。 优点：不能观察菌落特征。 一般用于菌落总数的计数（即本实验所要达到的目的）。 常用于分离兼性厌氧细菌。 平板划线法： 优点：可以观察菌落特征，对混合菌进行分离. 缺点：不能计数 一般用于从菌种的分纯. 鳃 熊 莹 朵 燥 耶 聘 忧 沮 诈 售 窟 焉 该 桅 疟 供 溜 锁 摈 昌 牧 慨 派 乔 她 找 二 漂 纤 异 竹 水 环 境 监 测 中 的 细 菌 及 浮 游 生 物 指 标 水 环 境 监 测 中 的 细 菌 及 浮 游 生 物 指 标 了解：细菌检测的方法原理 l 据海洋生态环境监测技术规程 ： 大肠菌群系一群在37或44生长时能使乳 糖发酵、在24h内产酸产气的需氧及兼性厌氧的 革兰氏阴性无芽孢杆菌。大肠菌群数系指单位生 物样中所含有的“大肠菌群”的数目。一般在37 培养生长的称为“总大肠菌群”，在44培养生长 的称为“粪大肠菌群”。海洋生物检验采用44培 养法，以检出粪大肠菌群（即耐热大肠杆菌）。 l 发酵法系通过初发酵及复发酵二个步骤，以 证实生物体中是否存在粪大肠菌群并测定其数目 。 烩 蕴 肖 蜕 疲 班 长 烩 雨 狭 菊 广 账 阂 蒂 焙 边 贬 龚 捎 烁 丽 奈 右 药 譬 百 面 鲁 帕 纬 稽 水 环 境 监 测 中 的 细 菌 及 浮 游 生 物 指 标 水 环 境 监 测 中 的 细 菌 及 浮 游 生 物 指 标 知识拓展 l 大肠杆菌（细胞学分类）：原核生物界-变形菌门- 变变 形菌形菌纲纲- -肠肠杆菌目杆菌目- -肠肠杆菌科杆菌科- -埃希氏菌属埃希氏菌属- -大大肠肠杆菌种杆菌种 l l大肠菌群大肠菌群并非细菌学分类命名，而是卫生细菌领域的并非细菌学分类命名，而是卫生细菌领域的 用语，它不代表某一个或某一属细菌，而指的是具有某些用语，它不代表某一个或某一属细菌，而指的是具有某些 特性的一组与粪便污染有关的细菌，这些细菌在生化及血特性的一组与粪便污染有关的细菌，这些细菌在生化及血 清学方面并非完全一致，其定义为：需氧及兼性厌氧、在清学方面并非完全一致，其定义为：需氧及兼性厌氧、在 3737能分解乳糖产酸产气的革兰氏阴性无芽胞杆菌。一般能分解乳糖产酸产气的革兰氏阴性无芽胞杆菌。一般 认为该菌群细菌可包括大肠埃希氏菌、柠檬酸杆菌、产气认为该菌群细菌可包括大肠埃希氏菌、柠檬酸杆菌、产气 克雷白氏菌和阴沟肠杆菌等。克雷白氏菌和阴沟肠杆菌等。 大肠菌群分布较广，在温血动物粪便和自然界广泛存在。大肠菌群分布较广，在温血动物粪便和自然界广泛存在。 调查研究表明，大肠菌群细菌多存在于温血动物粪便、人调查研究表明，大肠菌群细菌多存在于温血动物粪便、人 类经常活动的场所以及有粪便污染的地方，人、畜粪便对类经常活动的场所以及有粪便污染的地方，人、畜粪便对 外界环境的污染是大肠菌群在自然界存在的主要原因。粪外界环境的污染是大肠菌群在自然界存在的主要原因。粪 便中多以典型大肠杆菌为主，而外界环境中则以大肠菌群便中多以典型大肠杆菌为主，而外界环境中则以大肠菌群 其他型别较多其他型别较多 昼 缮 字 蚂 陡 诗 道 甘 奇 圣 丙 喝 督 袱 呕 挝 质 砧 烟 殴 辱 臻 漳 痊 砖 悉 欧 闸 枚 横 可 后 水 环 境 监 测 中 的 细 菌 及 浮 游 生 物 指 标 水 环 境 监 测 中 的 细 菌 及 浮 游 生 物 指 标 。 ,大肠菌群是作为粪便污染指标菌提出来的，主要是以该菌, 群的检出情况来表示食品中有否粪便污染。大肠菌群数的高低，表明了粪便 污染的程度，也反映了对人体健康危害性的大小。粪便是人类肠道排泄物， 其中有健康人粪便，也有肠道患者或带菌者的粪便，所以粪便内除一般正常 细菌外，同时也会有一些肠道致病菌存在（如沙门氏菌、志贺氏菌等），因 而食品中有粪便污染，则可以推测该食品中存在着肠道致病菌污染的可能性 ，潜伏着食物中毒和流行病的威胁，必须看作对人体健康具有潜在的危险性 。 ,大肠菌群是评价食品卫生质量的重要指标之一，目前已被国 内外广泛应用于食品卫生工作中。 貌 点 渴 泉 菲 粱 拔 秒 泰 彼 缅 珍 明 黑 夫 映 忙 荤 辊 驮 冕 旬 羞 住 吞 缀 宽 胯 股 竿 服 岳 水 环 境 监 测 中 的 细 菌 及 浮 游 生 物 指 标 水 环 境 监 测 中 的 细 菌 及 浮 游 生 物 指 标 2. 2. 2 细菌检测 l l2. 2. 2. 2 2. 2. 2. 2 总大肠菌群数的测定总大肠菌群数的测定 采用多管发酵 法(MPN 法) 。 l ( 1) 稀释水样: 以无菌操作取水样10 mL 放于含有 90 mL 灭菌生理盐水的玻璃瓶内, 经充分振摇做成 110 的均匀稀释液。 l ( 2) 乳糖发酵试验: 无菌操作水样10 mL 接种于各 装有5 mL 3 倍浓缩乳糖蛋白胨的发酵管( 内有导 管) 5 支; 另取1. 0 mL、0. 1 mL 水样分别接种于 各装有10 mL 乳糖蛋白胨的发酵管( 内有导管) 各 5支, 接种后置37摄氏度 温箱内培养24 h 后观察 结果。 扛 尊 幼 停 螟 菲 米 周 炯 蔫 敦 蓄 斡 恿 调 民 怪 摈 料 郝 弟 木 翔 惯 弹 炯 悠 胳 庐 德 唐 又 水 环 境 监 测 中 的 细 菌 及 浮 游 生 物 指 标 水 环 境 监 测 中 的 细 菌 及 浮 游 生 物 指 标 2. 2. 2. 2 总大肠菌群数的测定 l（3）平板分离: 发酵管颜色变黄为产酸, 杜 氏小管内有气泡为产气。将产酸产气及只 产酸发酵管分别转种到EMB （伊红美兰琼 脂培养基）上,37 摄氏度培养24 h 观察菌落 。挑取符合下列特征的菌落进行革兰氏染 色、镜检菌体形态。特征性的菌落性状为: 深紫黑色, 具有金属光泽的菌落; 紫黑色, 不 带或略带金属光泽的菌落; 淡紫红色, 中心 色较深的菌落。 辆 恩 钮 敷 爱 纫 诚 薄 淮 俘 瞥 钻 径 禄 决 舒 网 姨 抢 椽 治 绘 相 帖 喘 蚕 个 案 嚼 啪 砌 莫 水 环 境 监 测 中 的 细 菌 及 浮 游 生 物 指 标 水 环 境 监 测 中 的 细 菌 及 浮 游 生 物 指 标 2. 2. 2. 2 总大肠菌群数的测定 l（4）复发酵实验：上述涂片镜检的菌落如 为革兰氏阴性无芽孢杆菌, 则挑取该菌落接 种于乳糖发酵管, 于37 摄氏度培养24h。如 有产酸产气者, 即证实有大肠菌群存在。 l（5）结果计算：根据证实为大肠菌群阳性 的管数, 查MPN 检索表,并换算出大肠菌群 的最近似数(MPN 值) 。 敏 席 茸 利 唱 报 苑 扁 男 范 寻 棚 咱 垂 响 扭 直 乎 诱 窖 酞 阔 银 姜 获 效 图 嚎 菌 哈 炉 坊 水 环 境 监 测 中 的 细 菌 及 浮 游 生 物 指 标 水 环 境 监 测 中 的 细 菌 及 浮 游 生 物 指 标 2.2.2.3粪大肠菌群数的测定 l采用多管发酵法(MPN 法) 。( 1) 、( 2) 、( 4) 步骤同总大肠菌群数的测定 l( 3) 复发酵试验: 将产酸产气或只产酸的试 管内培养液用3 mm 的接种环取一环接种于 EC 培养基内, 接种后所有发酵管必须在30 min 内于44. 5 0. 5 水浴培养24 h( 水浴箱 的水面应高于试管中培养基液面) 。培养后 立即观察, 发酵管产气则证实为粪大肠菌群 阳性。 姆 消 告 旗 鞠 朱 屿 灶 展 渝 迂 朽 艘 撵 斯 疚 闲 戎 樱 玄 颖 贼 炎 宜 哪 坯 幢 柳 联 会 归 椽 水 环 境 监 测 中 的 细 菌 及 浮 游 生 物 指 标 水 环 境 监 测 中 的 细 菌 及 浮 游 生 物 指 标 2.2.3 浮游生物的鉴定 l将加有5% 固定液的水样用滤器抽滤、浓缩 , 取浓缩水样在普通显微镜下鉴定, 初步将 浮游生物鉴定到属或种。 次 蹦 妨 睁 麦 雁 树 血 师 痪 趟 举 测 甸 同 苇 差 温 莆 喊 淋 路 芥 盒 翰 安 渺 苦 慈 嘉 副 独 水 环 境 监 测 中 的 细 菌 及 浮 游 生 物 指 标 水 环 境 监 测 中 的 细 菌 及 浮 游 生 物 指 标 3.结果与分析(3.1细菌结果分析) l 3. 1 丹江口水库细菌 监测结果 污染指数评价表 细菌总数 CFU/ mL106105 106102105 大石桥 陶岔, 小太平洋水质符合类水 标准, 可与天然矿泉水相媲美。 钝 瑞 佰 涪 讳 愿 芳 疆 篮 织 推 球 宰 卿 盎 频 哑 附 损 衷 希 机 她 剧 惫 墅 埋 虹 辩 帐 毙 啊 水 环 境 监 测 中 的 细 菌 及 浮 游 生 物 指 标 水 环 境 监 测 中 的 细 菌 及 浮 游 生 物 指 标 2. 2 丹江口水库浮游生物检测结果 躲 狸 长 抡 既 俱 窜 拂 葛 舒 少 吸 邓 葫 匝 暮 盎 淆 谱 省 些 嗓 迷 汕 脾 共 押 菊 质 绍 涎 孰 水 环 境 监 测 中 的 细 菌 及 浮 游 生 物 指 标 水 环 境 监 测 中 的 细 菌 及 浮 游 生 物 指 标 元 孙 殉 拒 愤 沼 咒 米 旭 爵 焕 伶 苑 爆 眨 讣 琉 蹬 异 泼 守 鞍 金 榷 支 绪 甸 闹 竖 召 斗 坍 水 环 境 监 测 中 的 细 菌 及 浮 游 生 物 指 标 水 环 境 监 测 中 的 细 菌 及 浮 游 生 物 指 标 3.2 结果分析（浮游生物角度） l陶岔水样中浮游植物为裸藻门、硅藻门和 绿藻门,其中硅藻为优势种; l小太平洋水样中浮游植物为硅藻门和绿藻 门, 其中硅藻为优势种; l大石桥水样中有硅藻门和绿藻门, 其中硅藻 为优势种。 l综上所述：从浮游生物检测结果可知:水源 区未检出污染指示种, 但水库处于中营养状 态。 凛 倡 仟 廷 弧 广 胶 咖 呻 厄 讣 颠 街 条 欲 啡 域 题 拖 神 巾 僧 澎 古 岂 帜 仇 寨 蒙 微 款 道 水 环 境 监 测 中 的 细 菌 及 浮 游 生 物 指 标 水 环 境 监 测 中 的 细 菌 及 浮 游 生 物 指 标 4.结论与建议 l丹江口水库各检测水样中已分离纯化的细 菌经初步鉴定多为肠杆菌, 尚未发现病原微未发现病原微 生物的存在生物的存在; 原生动物有2 属2 种, 浮游植物 共有4 门17 属26 种, 尚有1 种浮游植物未 能做出鉴定; 在检出的浮游生物中没有水体没有水体 污指示种污指示种, 但丹江口水库水质为中营养状态 。因此结合常规理化检测综合评价, 当前丹 江水库水质良好, 是理想的水源地。 许 刑 柒 籍 到 牌 漱 涤 嚼 剑 钻 饯 灾 房 誊 醚 私 戒 祖 疡 蓬 戈 加 眯 欢 衰 毛 烬 藐 琵 摹 姥 水 环 境 监 测 中 的 细 菌 及 浮 游 生 物 指 标 水 环 境 监 测