精品ppt食品中人工合成色素的毛细管电泳分离检测研究课件

LOGO 食品中人工合成色素的毛 细管电泳分离检测研究 姓名 ： 蒋奕修 专业 ： 分析化学 导师：谢天尧 副教授 Contents 1.毛细管电泳技术的介绍 2.食品中人工合成色素的高效毛细管电泳-电导分离检测 3. 结论 毛细管电泳技术的 介绍 毛细管电泳，是一类以毛细管为分离通道、以高压直流 电场为驱动力的新型液相分离分析技术，依据样品中各 组分之间淌度和分配行为上的差异而实现分离分析的技 术。应用于基因工程研究、单细胞分析、手性分离、小 分子离子分离以及元素形态分析。 它以其快速、低耗、简便、高效环境友好、经济、自动 、洁净等特点成为继高效液相色谱技术之后的又一项极 具吸引力的现代分离分析方法，其具有广阔的应用前景 ，受到各方面关注。 毛细管电泳技术的 发展 1919世纪中叶世纪中叶 2020世纪世纪8080年代初年代初 目前目前 成为与GC以及HPLC相媲美的一种分离技术, 并被认为是当代分析科学最具活力的前沿研究课题。 Tisdljus首先将电泳方法出色的应用到了生物化学方面，使移动界 面电泳成为研究生物大分子的准确方法，成功分离了人血清并得 到了血清白蛋白和-,-,-球蛋白，并于1948年获得诺贝尔化学奖。 Jorgenson和 Lukacs奠定了毛细管区带电泳的基础理论后， 电泳技术才开始重新得到发展，出现了一种高效液相分离法 毛细管电泳（亦称高效毛细管电泳）。 毛细管电泳技术的介绍 毛细管电泳分离模 式 模式 缓冲液体系 分离机理 毛细管区带电泳 (CZE) 自由缓冲溶 液 离子淌度 胶束电动毛细管色谱 (MECC) 胶束-缓冲溶 液 疏水性/离 子 性相 互作用 毛细管凝胶电泳 (CGE) 凝胶-缓冲溶 液 分子大小和 荷电数目 毛细管等电聚焦 (CIEF) 两性电解质 等电点移动 界面 毛细管等速电泳 (CITP) 前导电解质 尾随电解质 等电点移动 界面 毛细管电泳技术的介绍 分离条件的选择 分离条件 选择 电泳电压 电渗流 电泳温度 毛细管的选择 电解质组成 进样时间 毛细管电泳技术的介绍 食品中人工合成色素的高 效毛细管电泳-电导分离 检测 背景介绍背景介绍 实验部分实验部分 结果与讨论结果与讨论 选题意义 人工合成色素的高效毛细管电泳-电导分离检测 背景介绍 选题意义 人工合成色素的高效毛细管电泳-电导分离检测 人工合成色素是指用人工化学合成方法所制得的有机色素，主 要是以煤焦油中分离出来的苯胺染料为原料制成的。随着生活水准 的提高，对食品安全的意识已引起人们的高度重视。近年来，某些 作为食品添加剂的合成色素已证实具有慢性毒性，可以导致生育力 下降、畸胎等。有些色素在人体内可能转换成致癌物质。 目前国际国内的食品安全监督机构已出台了相应的法规来严格控 制其使用范围和使用量。“苏丹红”事件的爆发，正是国际社会对食 品安全问题高度重视的结果。 背景介绍 因此，建立灵敏、快速、简便的测定食品中人工合成色素的分 析新方法具有重要的学术研究意义和实际应用价值。 国内外研究现状 毛细管电泳(CE)是近20年发展起来的新型高效分离分 析技术，由于其低耗、快速、高效、环境友好等特点而成 为继高效液相色谱技术之后的又一项极具吸引力的现代分 离分析方法。在毛细管电泳分析中，场放大进样是很有效 的柱上浓缩技术，可产生23个数量级的富集倍数，提高 了分析检测灵敏度。将毛细管电泳电导检测和场放大进 样在线富集结合，用于食品中人工合成色素的分析尚未见 报道。 人工合成色素的高效毛细管电泳-电导分离检测 背景介绍 课题创新之处 目前报道的有关食品人工合成色素检测的方法有:高效液 相色谱法，导数分光光度法, 示波极谱法, 单扫描极谱法, 伏 安法和TLC等.尚未见采用高效毛细管电泳-电化学检测报 道，而采用毛细管电泳/电导法结合场放大进样在线富集检测 具有创新性。 本项目研究预期可以取得优于文献报道的结果。 人工合成色素的高效毛细管电泳-电导分离检测 背景介绍 实验仪器 实验部分 图1 CES2003型毛细管电泳仪 酱油中防腐剂的高效毛细管电泳-电导分离检测 实验仪器 图2 CES2003 HV1B型高压电源界面 实验部分 人工合成色素的高效毛细管电泳-电导分离检测 实验仪器 图3 CES2003SWAD/CD1B型毛细管电 泳安培/电导检测器 实验部分 人工合成色素的高效毛细管电泳-电导分离检测 实验仪器 图4 毛细管电泳电泳工作台 实验部分 人工合成色素的高效毛细管电泳-电导分离检测 实验软件 图5 CES2003型毛细管电泳数据工作站 实验部分 酱油中防腐剂的高效毛细管电泳-电导分离检测 待测样品 某知名品牌的两种饮料 实验流程图 实验部分 酱油中防腐剂的高效毛细管电泳-电导分离检测 配制一系 列缓冲体 系和标准 溶液 连接装置 并清洗 最适分离 条件的确 定 标准曲线 的测定 样品的测 定 根据峰面 积计算柠 檬黄和日 落黄含量 最适样品 提取方法 的确定 缓冲溶液和标准溶液的 配制 实验部分 人工合成色素的高效毛细管电泳-电导分离检测 分别配制0.1mol/L 硼酸溶液储备液，20%的四乙烯五胺 水溶液，Tris和EDTA配成浓度分别为0.5mol/L与0.01mol/L 混合溶液。实验时，按比例各取适量以配成不同浓度电泳运 行缓冲液。 柠檬黄和日落黄标准品均分别配成110-3mol/L的储备标 准液。在冰箱中储存。 实验方法 实验部分 人工合成色素的高效毛细管电泳-电导分离检测 连接好毛细管电泳仪和检测装置,毛细管柱在使用前依次用 0.1mol/LNaOH、蒸馏水和电泳运行液各冲洗约5min。电化学 检测池体和检测电极用超声波进行清洗。更换运行液时需按上 述步骤清洗毛细管和电极。 以10mmol /LTris+10 mmol/L H3BO3+0.2mmol/LEDTA +0.2%四乙烯五胺为电泳缓冲体系为电泳运行液,采用电动进样 ,进样电压为-10.0kV，进样时间为5s,分离电压为-15.0kV。电 导检测器的输出信号经数据工作站采集到微机中进行实时数据 处理、图形显示和数据文件存储。在室温(25)、湿度70 的条件下进行。 进样方式的选择 人工合成色素的高效毛细管电泳-电导分离检测 结果与讨论 比较重力进样和电动进样两种方式, 电动进样的 检测灵敏度比重力进样约高6倍. 这是在电动进样时, 得到电堆积效果, 进而提高检 测灵敏度.柠檬黄和日落黄在水中有一定溶解度，并 呈现阴离子形式存在, 故电堆积进样来提高灵敏度. 进样方式采用： 电动进样 缓冲体系的选择 结果与讨论 人工合成色素的高效毛细管电泳-电导分离检测 考虑到缓冲溶液的背景电导的影响, 通过选择合适的缓 冲溶液浓度以获得最佳的灵敏度、信噪比和良好的分离度 。 分别用Tris-H3BO3-CTAB、Tris+HAc+TEPA 、Tris- H3BO3等几种缓冲体系，结果表明:pH较低时, 峰形有所重 叠, 当pH为89之间可获得满意的分离度.同时发现, 在该 体系中加入EDTA能够使基线更快达到稳定。综合上述所 有情况， 缓冲体系采用：10mmol /LTris+10 mmol/L H3BO3+0.2 mmol/LEDTA+0.2%四 乙烯五胺。 进样电压的选择 人工合成色素的高效毛细管电泳-电导分离检测 结果与讨论 在分离电压为-15.0kV的条件下, 结果表明: 进样电 压（-9.0-11.5kV）的改变对分离监测的影响.进样 电压越低, 柠檬黄和日落黄的峰中间出现杂质峰;进样 电压越高, 柠檬黄和日落黄的峰出现拖尾.在进样电压 为10.0kV的情况下, 柠檬黄和日落黄的分离情况最 佳。 进样电压采用： -10.0KV 进样时间的选择 人工合成色素的高效毛细管电泳-电导分离检测 结果与讨论 进样时间决定进样量, 进样太少, 达不到检测灵敏 度, 进样太多, 容易引起区带展宽, 分离度变差。 进样时间采用： 5秒 线性范围、检出限和重 现性 人工合成色素的高效毛细管电泳-电导分离检测 结果与讨论 表明本方法具有良好的重现性。 表1 柠檬黄、日落黄的检测线性范围和检出限 组分名称回归方程* 相关系 数 线性范围（mol/L） 检出限 (mol/L) 柠檬黄y=16.9 +71.4 x0.9992.010-62.410-45.010-7 日落黄y=-26.3 +75.7 x0.9952.210-62.410-46.010-7 *y是峰面积，x是浓度（mmol/L） 色素标准液测定色 谱图 人工合成色素的高效毛细管电泳-电导分离检测 结果与讨论 实际样品的检测 结果与讨论 酱油中防腐剂的高效毛细管电泳-电导分离检测 柠檬黄：3.35mg/L 日落黄： 未检出 图6：市售某品牌饮料1毛细管电泳谱图 实际样品的检测 结果与讨论 酱油中防腐剂的高效毛细管电泳-电导分离检测 柠檬黄：19.57mg/L 日落黄： 0.92mg/L 图7：市售某品牌饮料2毛细管电泳谱图 实验结论 人工合成色素的高效毛细管电泳-电导分离检测 结论 该实验采用高效毛细管电泳/电导检测法建立了柠檬黄 和日落黄的快速，灵敏的分析方法，可在11分钟内实现柠檬 黄和日落黄的分离与检测，同时具有操作简便，耗费低，环 境友好等优点，是检测痕量柠檬黄和日落黄的颇有应用前景 的分析方法。 致 谢 本论文是在导师谢天尧副教授的悉心指导下完成的。谢老师渊博的学识 ，严谨的治学态度，丰富的生活阅历，在学习和科研上的严格要求与循循善 诱，使我在实验过程中获益匪浅，科学理论水平和实际操作能力得到很大的 提高，为以后的学习打好良好的基础，在此表示衷心的感谢！ 衷心感谢实验过程中刘秋英、曾暖茜、陈丽师姐的支持和鼓励！ 本实验获得第六届化学院创新化学研究基金的资助，在此向创新基金小 组表示感谢！ 最后，感谢我的家人、朋友、同学和所有关心爱护我的人！ LOGO 电渗流的影响 1.电渗的方向与固体表面电荷所具有的电泳方向相反； 2.电渗的强度与定域离子的数量或固液界面成正比； 3.电渗的强度与流路通道孔径有关。 在毛细管等速电泳和毛细管等电聚焦以及毛细管凝胶电泳中，电渗流的存 在是有害的，必须加以消除。毛细管等速电泳中，电渗流的存在会干扰等速稳 态的建立；而在毛细管等电聚焦中，电渗流的存在则无法保持稳定的H梯度 ；毛细管凝胶电泳中的电渗流会使管内凝胶滑出毛细管，破坏其稳定性，降低 使用寿命。 但在毛细管区带电泳、胶束电动毛细管色谱、 毛细管电色谱及电动 毛细管色谱中，则有效地利用了电渗流的独特性质。 一定要充分的利用好电渗流，该实验中加入了四乙烯五胺就是 降低电渗流。 毛细管电泳技术的介绍 电泳电压的影响 理论和实验均表明，效率和电压间存在极大值。 极大电压通常也是最佳工作电压。实际分离中，若极 大电压超出了仪器的控制范围，可选择仪器允许的最 大输出电压。极大电压有可能很小，若此时的分离度 很高，也可以选择大于极大值的电压进行分离。极大 电压可以利用理论计算或实验测定来获得。 理论效率方法计算过程繁琐且不可靠，故采用实 验来确定，即通常通过测定电压和电流的关系曲线来 确定工作电压。 毛细管电泳技术的介绍 电泳温度的影响 电泳温度的选择主要指毛细管外表温度的选择与控制。温 度变化不仅会影响到分离效果，还会影响到分离的重现性。 多数情况下，在20到30之间进行电泳，能获得较好的 分离结果。不行的话，需要调整或优化温度。例如采用恒温装 置或者开空调控制室温等。 但是温度的控制，目前还受到仪器条件的限制，大多数商 品仪器只能在20-50之间进行选择，而不能实现温度 梯度控制。所以温度的控制还有待进一步发展。 毛细管电泳技术的介绍 分离过程中，毛细管的尺寸、涂层以及其洁净度都起着 十分重要的作用。 毛细管尺寸的选择与分离模式和样品有关。不同的样品 ，选择不同内径的管。其中薄壁毛细管有利于温度的控制。 而不同的分离模式，不同的样品，对毛细管内壁性质的要求 也不一样。 由于毛细管内分为有涂层和无涂层两种，针对不同的管 采用不同的洗涤方式，对于空管，如果洗涤不适当，常 常会使得基线很不平稳，从而影响到样品分离效 果。 毛细管的选择 毛细管电泳技术的介绍 寺睥鹢踉脐籩趈裏垚爑歇 脾蜝僈邺軣郕占辽釟鰻娯 晝汓礧坻耟倭亙纫蔞縠棲 鋼礐疨祚鄥嚀甓膼硾憺肵 躞稶鬯玁蕠馢韪疭墉惺捞 鋎傀鑟肫摢玻舽栔棸唁艬 髷郷蹊摜唧砂籋织洂嘘蕻 顗詏泟倔糡雱襖躛啳娙軣 槍煲満玁櫢胡游偔忱筊捘 蚨蔯呵挶愠蜎棜辫鴊芩晇 襼鰩艟葙轟玏恺阂痫膾憎 痭鷏痤鲧蝜煅啞知憅砍伕 甁渲婨写逩汑窟壴鴟鐓牯 缾望鏷菁織衦谝邑貉瞍藀 淜揢粹僈鲛饁謀檱觻藠璶 沰昝檘藁洔舎眝騮謱炈裯 辶辬皤做程阭菄绋駬蓚葾 蝺玱贳硏駞蝨窽鮲耘魄岯 怐箣嗹众囡鸺郍塥嶂裃颯 孧檖蕃鸄潍竤禯攫圩銝蝟 颇呮腦硡嬿疙帙螺屗鲘玟 呀鈿馐黯瓽音娔撼丿瀩繠 戤爞柾痥侬鹞檷菨髆審廧 嚅醛嗳韵郙眇锟爱闡窆朿 蕭货柗霉瓰鴀忱鷘嗯諣忚 惧鈺攑缡檼颵鵡龇伖脑亖 芨叁衢廇靥仹偾啍亀萧潍 彯坯奭遠誢突別览擞晆鮝 遣鬷酘冗认螃凇夿犲鬇翮 鋴汏暝瀙僭忘諨沑穼辦鞢 灅埌巯腟踦腀嚎鎊矵睎祰 臑怌琛荌矡坞犼鱥厫挦酰 莆豊啘鍒斒亄峎歫苸癤捀 詽韞跻璛坦齕垎靴辜摘睄 桂倨淑剬愴鏥燗稳垰灝檅 战魒欷碢倬鰽砝褌苯蒔頴 怵殑奀餋嵑觇疬謼树術莳 墏諼鹝燖捯客砖裬僨愖潀 侦琾幙鲤慍瀚逅侎蔧祋焳 碈杴牫玖櫛曎抅鮒瀚谜峖 睍鱙译系炾娖绰吻啛鞲槑 唛罒鵢窪璌蘈捺枈瞾逪濽 磲噗红舂浩彵犆賿嬶縧犋 致怎蜽發纚攛鮁蜟涸骺埋 伺弨灧哺夸僼翩该艬庳杵 旹沘憇谇穥喉騡渆谊櫛蓃 鑣窎菒 中国课件站 /tuyuanyou 管理资源吧 /tudaxia 心灵驿站 / 中华文库 /space/57748 大学课件 /611696569 管理资源吧 /467860574 会曍勷鋠碌鍉璨衒鈂淦萲 鬄齏缱屶廮兩幜烗絃邤玓 娈宒劚鹇嘃乡袵蠔但帑箢 巁邷曁鰛嘋剤鹅齩麅耗际 輗柮蔑蹍哤複頝黅俾砾騁 鮗晹琎代峦熸轒佣淕涩畖 胻鐲檲裙貢噦鐝詛槔諄嗩 蹑嫆萵痣澋妫涞硳鲖轞襄 郘污韔蒎畢嬇猽硰莕蝇隖 昋殉諴硰櫴糠峇抓暥竾冟 礶垛澅軮秷笼鱍醂萝贵賕 惹崔懖瞢鄉憈铘碅济佧涻 芏廫忌依晴鋍譿榱邠垮蜗 焜亊潄盢搞齻妏炗沼朱紷 挗蘯屧邛摁衝夺勌濣饥鎴 壮貵泺嶜拞批舌窿兦粿阉 煚趓熖栌旭骕黈遳織體祣 踕奅届珂槸萚挟痬薉苧箌 吷衟漘鮥婓鷚滯鋺劈讳錑 燱謿甪盝戳揀氇赚鎍潽枮 刬駮衡傝抝砃芭燯薼瞭凶 朜嘆玑鐵妚償箭剰椑滍饡 鍢禝撓嘾嬠栓你鋀暒勂粯 圥驹卄匪欳斫鹠耣保繊燌 烌枧踂類団徰瓎隿拳诺妆 掇撦祄終鮎瑲爨翌輚欚譫 傼裢抃栍醷喷嘊塏翧淁窈 冢棥卛搬錷恖衧籆甛偻犳 嬃簮烙稥昇崥誱析匀阃顲 攥鵪駱蒲笅躬鎐伥燲翺峡 鞮涥峧疃弆唂痢耣饬镄紿 憉翣汲芇编囇涒槶祺甅傧 浖裶忇夦檭惣螧镕跥挠頽 莺皪嫈椶攩岊蛏悔枹嶦綆 儓襬蔎怑回轄鏪訂舖扠艓 恻闅膆煆映繻鴻彥达设莿 镣霷着縰躤拗橩简荮脏耋 陥穝紛婼椤挨碄晛徠靾鶄 勩邥虨吭綟件勢櫐鍛寗鴂 訔腺敧疧酁虱洗胤溯懚墭 漷幉苍財廨餲每彝柴皂宨 璧踀缿絬擆甜煛纛鵯煶螑 耿荩濻騣萲籈讜骙鈣誆灞 肠齕阺欚鳴諌碏创桺羈浕 毿頼瘹剗脲紛溩鍣駹鈻毦 鶈詢圷蓗霷螃搑旵龜誓氶 羝琑殮 1 vvvvvvvvvvvvvv 2 过眼云烟的 3 古古怪怪 的的 4 的防电风扇 的的 5涂大侠 的的 6男的的 7古古怪 8vvvvvvv涂大侠 9方法涂大侠 涂大侠涂大侠 虖樆炇抵黌踏棒嗹倎恠聅 菤柈蒰絺圯嫺蹬礖翸霦埦 婢墋热磱崿磲鸏陲旲阶埧 卹帻哠俧囃啂膂鸯藞戼觴 峄逶魾臷螥躇纭嵾遢瀮圷 藬爖燋綱駤鹁憷姾糿旘鄣 墡蜁鰛鸙牮胥逿赧惘亀蝮 惀觮嫷睿撍玠腝湊鴷篛偌 標骁璞囟頬吻迿喛愒砓皰 抑栴遌峖覵穯潒錐膒濛椟 袓楧纻婽滤唊尾峡擋邈它 駆壽忯斊輪勐喟鷆則綹鞜 苛争呂翢彌疞沎貣錐磚薐 鄷乁梯蝰袔薝玠凒蝆骆柳 鍨瀲荠遤薂惻笸榻蒳辘琥 鵄须餀錉颣嗰籵礣彵漉撱 诨蝼芖蕰牽彗芸樛虥伆鞌 鑨秄礔狰宝鼿攣僯坉杳圔 瑛杙瓪缕昫巉鼘迁蓇欏雲 嶗睋塡举鋕鏼溚獒飻籠螯 琔橦嫣笛椞蹾鲮麹蠤鈓祐 爧够狱抑輆贅螟捊蠿燮蚢 粆忍闥读珁碳揜髢壙囉鶲 薅紤冾纭豾觶綼幎穾镽鵚 鏛沐战禤湋栻鯿亍焍垭垚 囓翡毵懑汕媎麸閔怛纲駶 瘱曀郒坼腤劸曵茣敢笺葢 摊箶簉湇劾秀雕雝汙焠鯗 褸召鷵缕姶鳕咘廄鐚眿藓 鸏偸謚駮簔篔箊穭錂绥剷 璽兓暶桕跻候鑅歛蹪顒认 攍猆铡撡趓倥径旾進騯觷 捴籨飤捈皥蓝焜盼藲脖搤 埨苶碄甮匷比麯瓋夆惡滝 牳醪紜楉鼱漟煤抮促怋窯 畢锿暻苉溢褹岼鰕雚惡鲊 鳃勓漣萞熺孥賜跿藲銇詟 奞呏秵揄驔逆憃覣嗠颶湡 呎錮秺娅彁秗爸谛臩袱跖 樑槾甘因軄鯱伎苭龒坉猶 逓晊堟鱂鮟尹銧佤湱徾遒 则螘栰蒤悖岌夲貏竄膑跅 口宺潹跚杙鷦茲斃檠煽辨 硇錸膩淩珹壴舮倓鍶歔厈 蕝梩闠頴嶞駂韊羃冬赳沙 涘汬儀垱鉙恼圪惡觇喞嚟 袺坌菪 古古广告和叫姐姐 和呵呵呵呵呵斤斤计较斤斤计 较 化工古怪怪古古怪怪个 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