肌钙蛋白和肌红蛋白课件

肌钙蛋白和肌红蛋白 测定试剂盒介绍 胶乳增强免疫比浊法 太原川至生物工程有限公司 技术背景 n心脑血管病现已成为我国人口死亡的主 要原因，名列第一位，心血管疾病特别 是心肌损伤的发病率逐年增加。因此早 期进行诊断和积极的治疗，对挽救病人 的生命有重要意义。 技术背景 nWHO 1979年制订的AMI的诊断标准 n1.有剧烈而持久的胸痛史： 2.明确的心电图改变，包括ST段抬高和异 常的Q波出现： 3.系列酶的水平的改变，早期浓度升高， 随后恢复正常浓度。 技术背景 n随着医学科学研究的进展，心肌损伤的血液 生化标志物已从早先的以酶活性为主的检测 发展到目前的以蛋白质质量浓度为主的检测 ，包括多种标志物 。 nAST、LD及其同工酶以及-羟丁酸脱氢酶等 以酶活性为主的检测项目在诊断心脏疾病时 已逐渐少用以至不再应用。 技术背景 n25%的AMI病人发病早期没有典型的临 床症状； n约30%的AMI病人缺乏心电图（ECG） 的特异改变； nCK-MB的敏感性和特异性也不尽如人意 。 心肌损伤理想的生化标志物 n在心肌细胞中的浓度很高；而在其它组织中的浓度 很低。特异性强 n在心肌损伤后能很快释放入血。敏感性高 n在多日内保持异常。窗口期长 n检测所需时间短。 肌钙蛋白是迄今为止，基本符合上述标 准的标志物。 心肌损伤理想的生化标志物 n国际临床化学联盟（IFCC）的心肌标志物标 准化委员会（CSCM）和美国临床生化学院（ NACB）建议： n在临床工作中运用两类心肌损伤标志物：一 是有胸痛发生后几小时即增高的早期标志物 ；二是发病后持续增高的具有高度专一性的 确定标志物。 早期标志物（心肌损伤后6h内血中就升高） 肌红蛋白（Mb） n优点 n出现早（2h），敏感性高。阴性有助于排除AMI。 n血中半衰期短，观察有无再梗死以及梗死有无扩 展。 n是AMI溶栓中评价再灌注与否的较敏感准确的指标 。 n缺点 n特异性不高 早期标志物（心肌损伤后6h内血中就升高） C反应蛋白 n优点 n早期即出现异常增高且“窗口期”较短，在心肌 损伤的早期诊断和预后估计有较好的临床价值。 n超敏CRP对心梗有一定预报价值。 n缺点 n特异性不高 晚期标志物（发病后6-9h血中增高并持续数天， 对心肌损伤的敏感性和特异性都较高） 心肌肌钙蛋白（cTn） n 有cTnI和cTnT两种亚型。因cTn灵敏 度高、特异性强、发病后持续时间长， 是目前诊断心肌损伤较好的确定标志物 。 新修订MI的诊断标准 nESC和ACC于2000年联合发表文件，重新修 订MI的诊断标准，最重要的是将检测到心肌 损伤标志物（主要是cTn）的异常变化作为诊 断MI急性发病的必要条件。 新修订MI的诊断标准 n心肌损伤标志物升高 n有剧烈而持久的胸痛史 n明确的心电图改变 1 + 2 or 3 即可诊断 胶乳增强免疫比浊法原理 n使用特异抗体结合于胶乳颗粒表面，标本与 胶乳试剂在缓冲液中混合，标本中的cTnI与 胶乳颗粒表面的抗体结合，使相邻的胶乳颗 粒彼此交联，在500600 nm附近测量溶液 浊度的增加，其增加的程度与标本中的cTnI 浓度相关。 胶乳增强免疫比浊法原理 方法学特性 （cTnI） n该试剂灵敏度为0.3ng/ml; n线性范围为25ng/ml; n批内及批间精密度均小于10%； n以99%单侧界值1.7 ng/ml，敏感性86% ，特异性99%，阳性结果预示值97.7% ，临床符合率96%。 线性范围 n校准曲线： n采用速率法多点校准，多参数曲线方 程（如logit/log）拟合。线性范围达 25ng / ml。校准曲线至少稳定30天， 测试条件变化时应重新校准，以免试 验结果出现偏差。 线性范围 n图1 cTnI浓度与吸光度线性相关图 方法学特性 （cTnI） n精密度： 水平质控1质控2 均值（ng/ml）5.316.7 % CV（批内）4.01.4 % CV（批间）4.72.0 方法学特性 （cTnI） n回收实验 不含Tn I的血清加入已知浓度的cTn I混合，n=5, 加入的Tn I（ ng/ml） 实测Tn I（ ng/ml） 回收率（ %） 44100 99.3103 2020.8104 方法学特性 （cTnI） n灵敏度 n用0.00 ng/ml校准品重复测定20次，计算结 果如下： n X=0.067 SD=0.019 X + 2.58 SD = 0.1ng/ml 方法学特性 （cTnI） n稳定性 n37放置5天后，测定值变化10% 试剂有良好的稳定性，实测效期为两年 。 方法学特性 （cTnI） n抗凝剂及VC影响 抗凝剂浓度测定值（x）(ng/ml)回收率(%) -15.0- 肝素 12.5U/ml14.395.1 枸橼酸钠3.2mg/ml15.1100.2 EDTA-K23.2ng/ml 13.2 87.6 Vc50ug/dl 15.099.8 Vc 100 ug/dl 15.2101.1 方法学特性 （cTnI） n抗干扰容量： 在以知浓度血清中，加入下列物质对cTn I的干 扰 10%。 n人血清白蛋白 3000 mg/dl n甘油三脂 25 mg/dl n -球蛋白 5000 mg/dl 严重溶血或黄疸可造成负干扰，应予避免 。 临床评价 n预期值： 149例健康成人血清标本经本法测定， 95%单侧分布为1.1 ng/ml， 99%单侧 分布为1.7 ng/ml，此范围仅供参考。 各试验室应确定自己的参考值及诊断标 准。 临床评价 n不同分布下的诊断界值 单侧上限（%） 临界值 ( ng/ml) 86.5 0.80 95.0 1.10 97.5 1.36 99.01.68 99.51.89 不同诊断界值的临床诊断效率 n50例确诊心梗病人和149例对照标本 临界值( ng/ml) 特异性 （% ） 灵敏性（% ） 符合率（% ） 0.8089.39691.0 1.1094.69494.5 1.3697.39095.5 1.6899.38696.0 1.8999.38696.0 ROC 曲线 注意事项 n标本处理 n用血清或血浆标本（肝素抗凝），在4小时内 测定。标本于使用前离心，4000转/分，15 分钟。28贮存的标本应在24小时内测定 ，如标本存放超过24小时，应于20以下 冻存，融化后必须离心，避免反复冻 融。 注意事项 n标本避免溶血及黄疸。 n血清分离胶有明显负干扰。 n慎用抗凝剂。 n胶乳试剂避免冰冻。 方法学特性 （Myoglobin） n试剂灵敏度为1.0 ng/ml; n线性范围为500 ng/ml; n批内及批间精密度小于5.6 %； n95%临界值 为57 ng/ml时，敏感性 96.1%，特异性93.0%，阳性结果预示 值94.6%，临床符合率94.7%。 方法学特性 （Myoglobin） n校准曲线 方法学特性 （Myoglobin） n精密度 方法学特性 （Myoglobin） n灵敏度 n用0.00 ng/ml校准品重复测定20次，计算结 果如下： n X=0.020 SD=0.007 X + 2.58 SD = 0.037 ng/ml 回收试验：（Myoglobin） n血清中加入已知浓度的纯化Mb，20次重复试 验，计算结果如下： 加入（ng/ml）实测(ng/ml）回收率（%） 500484.997 250245.898 125122.798 62.56299 31.231.5101 抗干扰容量 （MYO） n在以知浓度血清中，下列物质I的干扰 10%。 方法学特性 （Myo） n稳定性 n37放置5天后，测定值变化10% 试剂有良好的稳定性，实测效期为两年 。 方法比较 校准曲线比较 两法相关性 临床评价 n预期值： 100例非相关人血清标本经本法测定， 95%单侧分布为57 ng/ml， 99%单侧 分布为79 ng/ml，此范围仅供参考。 各试验室应确定自己的参考值及诊断标 准。 临床评价 n不同分布下的诊断界值 单侧上限（%）界值 ( ng/ml) 88.9 50.0 95.0 57.0 97.5 62.6 99.070.0 99.575.6 不同诊断界值的临床诊断效率 n127例已确诊心梗病人和100例对照标本 界值( ng/ml)特异性 （% ） 灵敏性（% ） 符合率（% ） 50.0 88.0 97.6 93.4 57.0 93.096.1 94.7 62.6 95.0 93.7 94.3 70.0 98.0 91.3 94.3 75.6 98.0 87.4 92.1 ROC 曲线 允许的生物学变异 n肌红蛋白： 5.6% nCK-MB质量： 9.3% ncTn： 10% 标准化问题 标准化问题 肌红蛋白、CK-MB质量、cTn均尚未标准化 讨论 cTnI测定标准化问题 n结构稳定性 、 n释放形式 n蛋白