精品获得性免疫接种的方式课件

获得性免疫接种的方式 那些方式应用于那些情况 不同方式免疫接种的优缺点 免疫接种的风险和益处 免疫接种免疫学预防 百日咳 白喉 腮腺炎 麻疹 Edward JennerLouis Pasteur Jenner 和 Pasteur , 著名的免疫学家，公认为免疫接种 和主动免疫的先驱。 患天花的小儿 （Infant with smallpox） 1979年WHO宣布在全球范围内消灭了天花病毒。 患脊髓灰质炎的儿童 （Child with polio sequelae WHO） WHO 宣称将在2003年在全球消灭脊髓灰质炎 Mycobacterium tuberculosis. HIV 许多引起高死亡率和高发病率的疾病的控制有了极大的进展，但是，仍迫 切需要大量的疫苗预防其他的疾病。每年，世界上仍有数以百万的人死于疟疾 (malaria), 结核(tuberculosis)和爱滋病 ( AIDS), 原因是没有有效的疫苗来控 制这些疾病。到九十年代末，已有40,000,000人死于爱滋病，9,000,000 的儿 童沦为孤儿。 Four Plasmodium species are responsible for human malaria, P. falciparum, P. vivax, P. ovale and P. malariae 需要增加现行疫苗的安全性和有效性， 还需寻找低成本的途径，使其有效的应用, 尤 其是发展中的国家。WHO估算，大约有20%- 30%的儿童死于能够用现行的疫苗预防的疾病 。 免疫接种 IMMUNIZATION 免疫接种（Immunization）是一种对常见的 和致病的病原提供特异性的保护作用（ specific protection ） 。特异性免疫可通过两种方式获得： 被动免疫（ passive ）或主动免疫（ active ），它 们都可通过天然 （natural ）和人工 （artificial ） 的途径获得 。 免疫Immunity 天然 Innate 获得性Acquired 被动 Passive 主动Active 人工Artificial天然Natural 人工Artificial天然Natural 免疫接种的方式 （Modes of immunization） Acquisition of passive and active immunity Type Acquired through 被动免疫来自母亲的抗体 免疫球蛋白 抗毒素 主动免疫 自然感染 疫苗 减毒的微生物 灭活的微生物 纯化的微生物的分子 克隆化的微生物抗原 (单独或与插入载体 ) 多价符合疫苗 类毒素 1. Diphtheria 白喉 2. Pertussis 百日咳 3 .Tetanus 破伤风 4. mohilus 流感 5. Poliovirus 脊髓灰质炎 6. Mumps 流行性腮腺炎 7. Measles 麻疹 8. Rubella 风疹 Pre and post vaccine incidence of common infectious diseases Post Pre 102 12345678 104 106 0 Number of cases 免疫接种的里程碑 Milestones in immunization 3000BC 2000BC 1500BC 1700AC 1780AC 1885AC *埃及 鼻吸 粉状天花痂 （sniffing powdered small pox crust ） *中国 鼻吸 天花痂 （ Sniffing of small pox crust ） *天花接种传入土耳其 *天花接种传入英国，后传入美国 *Edward Jenner 发现天花疫苗 *Pasteur 发现狂犬病减毒疫苗 （ rabies attenuated vaccine） Variolation：天花接种或牛痘接种 Emial von Behring and Hidesaburo Kitasato were the first to show that immunity elicited in one animal can be transferred to another by injecting it with serum from the first. von Behring 18-1 Passive Immunity 18-1 被动免疫（ Passive Immunity） 将一个免疫了的供体（immune donor） 的血清或免疫球蛋白（ gamma-globulins ）转入到一个未免疫的个体. 没有抗原刺 激免疫系统 天然naturally 人工artificially 被动免疫 Passive Immunity 免疫细胞 I 天然被动免疫: 母亲通过胎盘将IgG、通过 初乳将IgA传给婴儿。 Immunity is transferred from mother to fetus through placental transfer of IgG or colostral transfer of IgA. 急性感染 (diphtheria, tetanus, measles, rabies, etc.), 中毒 (insects, reptiles, botulism), 预防措施 (hypogammaglobulinemia). 破伤风抗毒素 (马血清) 异源 Heterologous 同源Homologous II 人工被动免疫 人工注射人的球蛋白（gamma-globulins）或免疫动物的球蛋白。 Artificially acquired passive immunity 异种gamma-球蛋白，常常导致病理合并症（血清病）和 过敏反应。 人的gamma-球蛋白是最理想的； 其他来源的特异性抗体用于: 中毒、白喉、破伤风、气性 坏疽、波特淋菌等重度病症； 有立即提供保护的优势，但是短期有效； 同源性免疫球蛋白则具有传播肝炎和爱滋病的风险。 马血清抗毒素的两重性： 2、异种抗原，可刺激机体产生抗马血清抗体。 1、特异性抗体-中和毒素 1. 免疫缺陷 （Deficiency） ：先天或后天B细胞缺 陷导致的抗体合成障碍或合并其他免疫缺陷。 2. 易感人群接触或可能接触某种疾病，而时间不 允许主动免疫产生足够的保护作用。 3. 疾病已经存在，抗体起改善和帮助抑制毒素作 用，如破伤风。 下列情况需应用被动免疫： Disease Agent Black widow spider bite 黑寡妇蜘蛛咬伤 Botulism 波特淋菌中毒 Diphtheria 白喉 Hepatitis A and B 甲肝和乙肝 Measles 麻疹 Rabies 狂犬病 Snake bite 蛇咬伤 Teranus 破伤风 马抗蛇毒血清 Horse antivenin 马抗蛇毒血清 horse antivenin 马抗毒素血清 Horse antivenin 人免疫球蛋白 Pooled human immune gamma globulin 人免疫球蛋白 Pooled human immune gamma globulin 人免疫球蛋白 Pooled human immune gamma globulin 马抗蛇毒血清 Horse antivenin 人免疫球蛋白 Pooled human immune gamma globulin 或 马抗毒素 Common agents used for passive immunization 某些疾病（癌、cancer, 免疫缺陷 immunodeficiency ） 可进行细胞免疫（cell-mediated immunity）的被动转入 。然而很难发现组织相容性 ( matched ) 的供体( donors )，并有移植物抗宿主反应（graft versus host disease）的巨大风险。 被动免疫不能激活免疫系统， 所以，不能产生记忆反应，其保护 作用是短暂的。 Advantages and Disadvantages of Passive Immunization 作用迅速 作用时间短 血清病 感染肝炎和爱滋病 移植物抗宿主反应 Graft vs. Host disease (只见于细胞免疫) Advantages Disadvantages 18-2 Active Immunity 机体接受抗原，产生抗体 produced by the body following exposure to antigens. Naturally 天然 Artificially 人工 Active Immunity 主动免疫 Exposure to different pathogens leads to sub-clinical or clinical infections which result in a protective immune response against these pathogens. I 天然自动免疫: 自然感染或接触不同的病原性因子， 引起亚临床或临床感染，机体可产生对这 些致病因子的保护性免疫。 用于主动免疫的疫苗（ Vaccines ） 包括活的 ( 减毒attenuated ) 微生物, 杀死的微生物, 微生物的成分， 分泌的毒素（ toxins ）( 脱毒的毒素 detoxified ). II 人工自动免疫: 通过注射等途径将活的或死的致病菌或其成 分导入人体, 而获得的免疫称为人工自动免疫。 抗原 (Ag) 与T细胞 结合，激 活T细胞 记忆T细胞活化的T杀伤细胞 与B细胞 结合，诱 导B细胞 释放抗体 记忆B细胞 活化的B细胞 抗体 免疫记忆 Immunologic memory A B 白喉vaccine D E Anti-白喉antibody 白喉Bm cell Anti-白喉antibody against白喉 白喉 Bm cell days First response to antigen白喉 白喉 vaccine immunity 白喉 Antigen B immunity Antibody concentration First response to antigen B Secondary response to antigen白喉 多价抗原 Surface antigen Toxic antigen 多价抗原 Surface antigen Toxic antigen Surface antigen vaccine 多价抗原 VACCINES: PAST SUCCESSES AND FUTURE PROSPECTS 活疫苗病毒疫苗脊髓灰质炎 , 麻疹, 腮腺炎, 风疹, 甲肝, 黄热病, 结核 (Mycobacterium bovis: BCG). 活菌疫苗（ 唯一） 死病毒疫苗 ( 加热, 化学或 紫外光照射) 脊髓灰质炎, 流感, 狂犬病, 伤寒, 霍乱, 瘟疫, 百日咳, 死疫苗 死菌疫苗 （大多数细菌） Comparison of attenuated (live) and inactivated (killed) vaccines Characteristic Attenuated vaccine Inactivated vaccine 制备 接种次数 诱导的免疫类型 恢复倾向 筛选无毒株： 有毒株在逆环境中培 养，或将人的毒株在 其它宿主中连续传代 一般仅需要一次 相对稳定性不稳定 体液免疫和细胞免疫 可以回复为毒株 通过化学或照射 （ ray） 灭活毒株 需要多次接种 较稳定 体液免疫 不回复为毒株 微生物片段疫苗 （Microbial Fragment Vaccines） 乙型肝炎病毒 -克隆到酵母菌（ yeast） 流感杆菌 百日咳 脑膜炎球菌 肺炎球菌 -细胞壁成分 破伤风梭菌 -灭活毒素 (类毒素toxoid ) 白喉棒状杆菌 -灭活毒素 ( 类毒素 toxoid ) 霍乱弧菌 -毒素亚单位 波得特,百日咳 -毒性因子蛋白 流感嗜血杆菌 -蛋白连接到多糖 肺炎链球菌 -多糖复合物 奈氏脑膜炎双球菌 -多糖 病毒疫苗 (hepatitis-B, rabies, etc.)含有克隆到 合适载体（vector）中 的抗原蛋白 毒素 类毒素 化学修饰 毒素基团 抗原决定基 化学修 饰 当致病作用是由毒素引起的，可把毒素处理为 类毒素作为疫苗，如白喉，破伤风和霍乱等。 Comparison of maximum and current morbidity for vaccine-preventable diseases DiseaseMaximum cases Year 1992Percentage change 白喉 Diphtheria 麻疹 Measles 腮腺炎 Mumps 百日咳 pertussis 脊髓灰质炎 Polio (paralytic) 风疹 Rubella CRS 破伤风 Tetanus 乙型流感 Heamophilus influenzae type B 乙型肝炎 Hepatitis B 206,939 694,134 152,209 265,269 21,269 57,686 20,000 1,560 20,000 26,611 1921 1941 1968 1934 1952 1969 1964, 65 1923 1984 1985 4 2,237 2,572 4,083 4 160 11 45 1,412 16,126 99.99 99.75 98.31 98.46 99.98 99.72 99.95 97.12 92.94 39.40 0 10 100 1,000 10,000 100,000 1,000000 白喉 Diphtheria 1921 风疹 Rubella 1969 脊髓灰质炎 Polio (paralytic) 1952 百日咳 pertussis 1934 腮腺炎 Mumps 1968 麻疹 Measles 1941 报道的病例数 Number of reported cases 0 例 美国报道的几种病 在高峰年 和1996 年 的病例数相比 天花病毒 Smallpox virus The mummified head of Ramses V (died 1157 BCE) with rash that is probably the result of smallpox 18-3 PAST SUCCESSES I SMALLPOX (Variola) The last known person in the world to have smallpox of any kind. Variola minor in 23-year-old Ali Maow Maalin, Merka, Somalia The last case of natural smallpox in U.K. occurred in the 1930s; the last in U.S.A. was in the 1940s. The last natural case in the world was in Somalia and occurred in October 1977. 1) 没有动物感染源和病毒储存的场所 2) 终生免疫 3) 亚临床症状极少 4) 明显症状出现前没有传染性 5) 一种天花血清型 6) 疫苗效果显著 7) 政府承担主要的义务 天花免疫预防成功的原因 Reasons for success of smallpox vaccination In western countries polio is no longer a problem but it is still a major problem in less developed countries though some have had very major successes e.g. Cuba, Nicaragua . The wild type (non-vaccine) strain of polio has recently been declared to be wiped out from the Western Hemisphere. Polio Virus II POLIO Polio Statistics Wild poliovirus 1988 Know poliovirus transmission Polio Statistics Wild poliovirus 1998 Know poliovirus transmission Victims of polio WHO 18-4 Common currently used anti-viral vaccines 流行性感冒Influenza Inactivated 风疹Rubella Attenuated 轮状病毒Rotavirus Attenuated 水痘Varicella Attenuated 甲肝Hepatitis A Inactivated 乙肝Hepatitis B Subunit 脊髓灰质炎Polio Inactivated Attenuated 狂犬病Rabies first attenuated inactivated 鸡胚 培养细胞 大量突变病毒 原代猴肾细胞 减毒 繁殖快，生长迅速 I 减毒活疫苗 Attenuated Vaccines 生长迅速，无毒性，只 在非神经组织（non- nervous）中生长（肾 ），不在CNS生长 Sabin 疫苗 Sabin polio vaccine 传代病毒于其他宿主 （ foreign host） 牛分支杆菌 Mycobacterium bovis 置于含胆汁 的培养基， 逐渐增加胆 汁的浓度 13年 卡介苗 Bacillus Calmette-Guerin (BCG) 在胆汁中适应性 生长，充分减毒 成为预防肺结核 的疫苗。 1 减毒的分子基础 Molecular basis of attenuation 温度敏感 temperature sensitive grow better at 32-35 degrees than 37 degrees 冷适应cold adapted grow as low as 25 degrees 脊髓灰质炎I型减毒疫苗 基因组57个碱基改变 21个氨基酸改变 减毒疫苗是由病毒表面 蛋白发生改变产生的 Molecular basis of attenuation 减毒鼻疫苗 attenuated nasal vaccine 冷适应疫苗 cold-adapted vaccine culture cells 渐进性低温传代 12代，或12代以上 只在25C生长良好限制病毒在上呼吸道 流感病毒 influenza virus 用5-氟尿嘧啶（5-fluorouracil）突变并经过筛选温度敏感 而获得的流感病毒A和RSV温度敏感突变株 （ Temperature-sensitive mutants）. 在流感发病过程中， TS基因（TS gene）可在实验室进 行重排，产生一株病毒，它具有现在流行株的外壳，和减 毒株的内部蛋白。 New methods of vaccine production * 基因重排 Attenuated influenza vaccine strain using a cold-sensitive mutant that can be reassorted with new virulent strains NA：神经氨酸酶 HA：血凝素 （中和抗体的靶位） 减毒株 新的毒株（流行株） 重排病毒 （新疫苗） 基因重排 2 Advantages of attenuated vaccines 1) 激活免疫系统的所有时相。 可产生体液IgG和局部IgA。 2) 对所有保护性抗原均产生免疫应答，不同于抗原性发生改变 的死疫苗的。 3) 免疫性持久，交叉反应多 4) 成本低 5) 在大多数的疫苗接种者中可迅速产生免疫性 6) 接种方便，如 polio and adenovirus vaccines 7) 容易运输 8) 可在某一群体内消除野型病毒 1) 突变，复毒 2) 扩散到其他没有接种的人 3) 扩散未标化的疫苗 4) 很难传入到热带地区 5) 对免疫缺陷病无能为力 3 Disadvantages of Attenuated vaccine 1) 产生充分的体液免疫 2) 不出现突变和复毒 3) 可用于免疫缺陷的病人 4) 一般在热带地区活性不受影响 1 Advantages of inactivated vaccine II inactivated Vaccines 1) 许多接种者不产生免疫反应 2) 需要多次免疫 3) 无局部免疫 4) 成本高 5) 猴子短缺 6) 灭活失败，接种病毒的毒株 2 Disadvantages of inactivated vaccines 肌肉注射灭活的(左)和口服减毒活的(右)脊髓灰质炎疫苗后产生 的分泌型抗体(鼻部和肠道IgA)和血清抗体(血清IgG,IgM和IgA). 引起发烧，不适，有的可以引起关节痛，关节炎( rubella), 抽搐 , 和致死 (pertussis), or 神经紊乱 (influenza). 18-7 疫苗应用的副作用 undesirable effect of Vaccines） 对鸡蛋产生过敏反应Allergies是接种了在鸡蛋里制备 的病毒疫苗 (measles, mumps, influenza, yellow fever)的 后果. EventFrequency Local 红, 肿, 痛 1 in 2-3 doses Mild/moderate systemic 热,嗜睡 , 烦躁 1 in 2-3 doses 呕吐, 厌食1 in 5-15 doses More serious systemic 持续哭闹, 发烧1 in 100-300 doses 虚脱, 抽搐1 in 1750 doses 急性脑病1 in 100,000 doses 永久性的神经损伤1 in 300,000 doses DTP（ diphtheria-tetanus-polio）免疫后引起的一些副反应的发生率 18-8 Active Immunization Recommended childhood immunization schedule in the United States, January-December 1999 Vaccine Age Birth 1mo 2mos 4mos 6mos 12mos 15mos 18mos 4-6 yrs 乙肝Hepatitis B 白喉Diphtheria, 破伤风 tetanus,百日咳pertussis 流感H.influenzae, type b 脊髓灰质炎Poliovirus 轮状病毒Rotavirus 麻疹Measles, 腮腺炎 mumps,风疹rubella 水痘Varicella + + + + + + + + + Sabin 脊髓灰质炎疫苗 三种（型）减毒脊髓灰质炎病毒 糖丸 （糖浆） 口服 sIgA Th 巨噬细胞 IgA sIgA 浆细胞B M细胞上皮细胞 辅助 野型病毒 sIgA 三种（型） Sabin 脊髓灰质炎疫苗 糖丸 第一次口服 第二次口服 第三次 Mw%OB2%XxyErH$(v1qc6W+mw5#yH%5SKtQiMM$3UTOh4Xg&H&EeAbWb#I4$U32(7YzqW9LQMVw*HTS$B*zAmfEN!A!nbPon1SYIs-eunG#gKUn&j1!zCNJ1D#TX3Uo4jkv3w-(NBPPI9%J)Hdt(xKlVH5BiK)GW-65a)fFOk+z-#*A&zEv1ChX)nFt-tEUsPtMgU-z0iQd(oOa!Me89Er74E(*WWJ&4T-0dLeIFSI-8n(cQ$oQOr6bGXR+ei)I%nV+#eU(xakB%vW7+3&aHfeljU(ocP1%tpNRI8DUsWA#$eYsaG2cF$(RAgnVrO!EmCEqOKn&Ce-)Ie*yHyecn3oa6M$2+YTh81Z$Gl4%xTmd#CzI!MB8HlkG8AO*C5Nu*v8Hu(EdqAyduzfAr8Fabx%A)ipC- #m&h1#KWMj!9l35$!ni$OD%y)RtTgSFnPP801VmdEy8ZcurXbecD75yxW8tbsy30t*CuV4$-ddbrv)KnrLdGDGCkCi*98Cy4soj-yGsUvc)rq03Ms+TEF1iBux0OIHZEazUi(V2R2V-fYthOMXo1XGCsKa8UR(Cut%CUOizFSpqkehMXsQ5-kSeaNgaNhtFuNczrmuLPKR4-QuiGxipDTlvQCLH4Lt(v5METL&DCnsxFA4xz*JWO#V68*t93#y(TUmRc6mr*mJL$0X*aTbX(pNKIuGwnDw7!0b+ewuQmcI-GUZc1TPdB35(-AZpm5)irHiMc6RwErh047UUUx- (hb3gxQP7EU2mW#NCYk&dlFaCU$*7TpYEk7bdaR%9Tyl+pS3UbKm02j4H$!qDKIo&c95JtxL7g)iZ&PNPcFANoAwU#KRU+1vsw0XLL6yZyOx4(4ot%(FOSdNepdrBoG!UHznssAw(#n2jo9jhC)zMST(JNV&iiTg-i0$GRK4!&QPFFsTXPWk$-U738BZ9nfJODvXKrEPhryG&#pBQR8I!$5-3ihNnURHIn1%Vzb&MdwV&w*x4OOsqnI&Gi$Xr%Op1uhaW&88*q0bbp3FiutC9A0(M0SSNe+P4Nk(t$QgQ*w+gI)I#v+*)Nybv-Jpvq1r&ckicIdM$c6ob4E94qz(PdXQdHSbHPjVuVqM#AmhsaPe+gpM- bynALHk%s29Y%e3%bn#ZT#ySJ&WRKGS#R)giWa8wRhbj1cR*ZxacJL(tnu*biv)b5Fm1XDxAoG3o$1p#6kJ1NzkNRQBQwpKmUTNU4I1EyB27MU98mikPFoQs1kYr%s!NbHpR6Q+dKOM%OtoMmRJLAYnV-)7QpWW2lIO#3Pn%t)I-n9WA)jZZ1u&vH!%bXQQ(R5jUzwxcmZkML2pSFcHp*DL0MJZ-ubZN(1INj5zG%GaxVIzuYkvE&UHzBGQPY0$0BneMJrUhRLbw8CO+EL61Ai91ivX$k6DB$W%gpHKoNfemjS8HF7f#S)I2Cv6VER!KPSwxybdg)3d1hBB*uLar#$W*$qKtnq8Nt$TjK9wT0JE*C2eSzf#d-mxP5L$3ENuu(qHB5ZfO#ZxOh(ciurGillkJK9InHW- g9czep2kib4mkqbE)Ze2+X3%JESuaQ2)0jgUBqfDQ(zrZ*mqZfcZ!V1kviqftJ)Nrpz)cTw$ST2ZEx%eOOCD3rZVDtRKvUr!-9Y(ULGKL89az+NPJLXtw7W+#dSLV+Sm83!&Q4f-!W-)E$ph>f1RvLfzvEPlK3Zg(eDqi8OI0DjR)X-8iwDqXu)U*#yj$8G#F6$BAFz8HMz(S)UIovzJMVKHibJ0YOMvM4i*UyM3j20YgYpuR-W$C$- 7HOy%M2IZu$QZjme(p8aSi*f7QK46YcXJw5X53hJ%PZI3juusNDw&sCz7&1mMjvtQaDV5u*2SlruGy%L!3lSJnk+GL1!raxU*JOraeXPGqAK6icVVL%SCGfN$CkWU!UbN1ZYN2E(Fwv!6tpZjk!LXP#FZ#figFGFJOKW!llI783W6sz4VmXy0fGrw9u6HHitKcrk49n7UFxAVZ8BLohbWK$UEckWdAg7SIpbP6E&8cS-7jLEPKMob$hJ4!s*ZwswZhnSgr&BXCaJPN%O8gUx)Ctyw3y0XWg-ZLiF-YPrajP)gK8wpvU2RwHYxx(BNKw04*i)Ly#!- %lH(hp1GIF3XM0bG#W9l(rsS8O2Nwa(e3Dv7vpeby%7R+vvkn!cHCKI7UovSzPPUkBX)C4fVrm*)oQLiPF24qqFws1fBFvL4C)mbKaZF9eJO3PgMU*o%A)!A6$R&2KKayZ36qtloh%)aR2&#EN7HGUWvSj#)ZF8#CThYZGsFyuQRS9cfGII&#PBP-)6IsSB3vowt$hv0Vp!(WGLnuYXg%yVU)-xu*MmnCve8XD+8bh2hA*-)JG17h+C6Nlo*!b*%P9uf9n$Q0K02hRfcRnhX2aH6kYwUBmZWZMDd4xSgitqX+BCadN%hy*bgwDeicS*oO-g#n14bDritLYN0KD(4- b72Q&grxLw$%7LPCHu%ChufffZS$tIG0R1I#pWJz4yyQGqs+AgBO50USg*vwJLgxYLgA7014$UtRo!pKUeR#9X-)59AMr&Lw)YDFqZnmW(hnDObwWyQV(%*sdFIQ%xQSS6afYTVdfg&-6&p43H5V5iKGtu)q(2(2HB+0g9yHX1ImeX+&m9cl4di7ph6fsYGDbwyIyVTr)SMmBu7y3!Cw2go+IH()-46WCOM&FHfcd&*#VO$R- (mS(EfRXU)Ngwb1P%k(fkyp%q5YNDC+yXEBZjDnS+!exqUn%Nj8qYzfiKkBceE72ZkqTB8G77gXa!24RJXCUOPpejMNIfbqOLFUGop(ygEVhh8eWfFtteYm%AJWiyN*1I!m7el75suNXHfkcI%yUAelDyeKDu+5EgUAPZqJu99owu5#Tuk9igGMK9&NsM(FZ8N%7GOR50#-Xgs+OhkdeF7+9riVfQPC3O!tT4-o&*Cg-s#WWZt*mu6PrdOgDfsJZRHC4LtdxdFP-4cy+7b- $h7&o1K#s!+tW!iKOo&VmP)GkR%zbi+2!2OHDbG+g1(P6Z1zofJQ(%&9bUhdKA(g%BKmc*A5Go28$59pbuPE*jX#46JbICj8vDStXchFYOIBWWLkfmQNIfhh(ue3bLPjVnEV+IG(+dUPG%1dN%f-kdeP09tC2B*eeF#MspmJ)z5JxDcBlaSV*#hQ2VO1Wuey*O0*E#26R#uL05jPgkU3s5VLc&IuCSkEjv!0z#)ZcDjpU*g52!&PbwfcgQy9rIc9WDKwb- 7gulbna&0VbgPd!caPPGWdSvZV$!nYx+8U3(vq!s1wv$T8JC!)a3tNyVqQ(o!MLCO(D7Dg1&JXodDQ5%EoGJVtOgmL%NEzMKEnw!sgsH+8*FHGUZQvu%9MhobAhW$#zg1#oC*Mh#u(#a1pkYVOiuHm7!n8&ukcUSVFR+-s%iCN4BSLayCCROopR&b$v(-5EMuNdzxzZ4-Gxw$sGM434k1!#MDLh33Xt1WUe%wAS#Br9v)tuN#LPR9faLy9M!t!R$asvRKBZnCLh%7kb