高中生物 专题2 课题2 土壤中分解尿素的细菌的分离与计数练习 新人教版选修1

课题2土壤中分解尿素的细菌的分离与计数一、筛选菌株1原理人为提供有利于目的菌株生长的条件(包括营养、温度、pH等)，同时抑制或阻止其他微生物生长。2途径用选择培养基筛选。在微生物学中，将允许特定种类的微生物生长，同时抑制或阻止其他种类微生物生长的培养基，称为选择培养基。用其培养的目的是从众多微生物中分离所需要的微生物。二、统计菌落数目的方法和注意事项1常用方法：稀释涂布平板法(1)统计依据：当样品的稀释度足够高时，培养基表面生长的一个菌落，来源于样品稀释液中的一个活菌。通过统计平板上的菌落数来推测样品中大约含有的活菌数。(2)计算公式：每克样品中的菌株数(CV)M。C：代表某一稀释度下平板上生长的平均菌落数。V：代表涂布平板时所用的稀释液的体积。M：代表稀释倍数。(3)注意事项：一般选择菌落数在30300的平板进行计数。统计菌落数往往比活菌的实际数目低。统计结果一般用菌落数而不是用活菌数来表示。设置对照：目的是排除实验组中非测试因素对实验结果的影响，提高实验结果的可信度。2计数方法利用显微镜直接计数。三、实验设计1土壤取样从富含有机质、酸碱度接近中性的潮湿土壤中取样。取样时，一般要铲去表层土，在距地表的38 cm的土壤层取样。2样品的稀释样品的稀释度直接影响平板上生长的菌落数目，选用一定稀释范围的样品液进行培养，保证菌落数在30300之间，便于计数。3细菌的培养与观察将培养基平板倒置于3037 温室中培养12 d，每隔24_h统计一次菌落数目，最后选取数目稳定时的记录作为结果。4细菌的计数当菌落数目稳定时，选取菌落数在30300的平板进行计数。在同一稀释度下，至少对3个平板进行重复计数，然后求出平均值，并根据平板所对应的稀释度计算出样品中的细菌数目。 一、选择题1下列能选择出分解尿素的细菌的培养基是(A)AKH2PO4、Na2HPO4、MgSO47H2O、葡萄糖、尿素、琼脂、水BKH2PO4、Na2HPO4、MgSO47H2O、葡萄糖、琼脂、水CKH2PO4、Na2HPO4、MgSO47H2O、尿素、琼脂、水DKH2PO4、Na2HPO4、MgSO47H2O、牛肉膏、蛋白胨、琼脂、水解析：能选择出分解尿素的细菌的培养基必须是以尿素为唯一氮源，B、D不符合。C没有有机碳源，分解尿素的微生物不能正常生长。2从土壤中分离能分解尿素的细菌，可以利用选择培养基，其成分中一定有(A)尿素有机氮化物无机盐有机碳化物水无机碳化物A BC D解析：分离能分解尿素的细菌，故培养基中一定有尿素，一定没有有机氮化物；另外，水、无机盐和碳源、能源也是细菌生长所必不可少的。有机碳在这里既是碳源又是能源，因为分解尿素的细菌是异养微生物，不能利用无机碳化物。3关于土壤取样的叙述错误的是(C)A土壤取样，应选取肥沃、湿润的土壤B先铲去表层土3 cm左右，再取样C取样用的小铁铲和信封在使用前不用灭菌D应在火焰旁称取土壤4取少量酵母菌液放入血球计数板直接记数，测得的数目是(D)A活细胞数 B死细胞数C菌落数 D细胞总数解析：显微镜直接计数法的缺点就是不能区分活菌和死菌。5在做分离分解尿素的细菌实验时，A同学从对应106培养基上筛选出大约150个菌落，而其他同学只筛选出大约50个菌落。A同学的结果产生原因可能有(A)由于土样不同由于培养基被污染由于操作失误没有设置对照A B C D 6下列关于统计菌落数目的方法的叙述，不正确的是(C)A采用平板计数法获得的菌落数往往少于实际的活菌数B当样品的稀释度足够高时，一个活菌会形成一个菌落C为了保证结果准确，一般采用密度较大的平板进行计数D在某一浓度下涂布三个平板，若三个平板统计的菌落数差别不大，则应以它们的平均值作为统计结果解析：当两个或多个细胞连在一起时，平板上观察到的只是一个菌落，因此统计的菌落数往往比活菌的实际数目低。一般选择菌落数在30300的平板进行计数，密度过大会使计数结果偏小，影响结果的准确性。涂布三个平板，作为重复组，取其平均值作为统计结果能增强试验的说服力与准确性。7请选出分离土壤细菌的正确操作步骤(C) 土壤取样 称取10 g土壤，加入盛有90 mL无菌水的锥形瓶中 吸取0.1 mL进行平板涂布 依次稀释至101、102、103、104、105、106、107稀释度A B C D 解析：在分离土壤中某细菌时，应先选取土样(10 g)，然后加无菌水获得土壤浸出液，并进行不同倍数稀释，最后将稀释液涂布到培养基表面进行培养，并分离和计数。8下列有关土壤中微生物的分离与计数的说法中，错误的是 (D)A因为土壤中各类微生物的数量不同，所以，为获得不同类型的微生物要按不同的稀释倍数进行分离B测定土壤中细菌的总量和测定土壤中能分解尿素的细菌的数量，选用的稀释范围不同C如果得到了2个以上菌落数目在30300的平板，则说明稀释操作比较成功，并能够进行菌落的计数D牛肉膏蛋白胨培养基的菌落数目明显小于选择培养基的数目，说明选择培养基已筛选出一些细菌菌落解析：样品的稀释度直接影响平板上生长的菌落的数目。实际操作中，通常选用一定稀释范围的样品液进行培养，以保证获得菌落在30300之间适于计数的平板。测定土壤中细菌的数量，一般选用104、105和106倍的稀释液；测定放线菌的数量一般选用103、104和105倍的稀释液；测定真菌的数量一般选用102、103和104倍的稀释液。将菌液稀释相同的倍数，在牛肉膏蛋白胨培养基上生长的菌落数目应明显多于选择培养基上的数目，从而说明选择培养基的筛选作用。9“土壤中分解尿素的细菌的分离与计数”实验中以土壤中的细菌为研究对象，要达到的目的是(B)从土壤中分离出能够分解尿素的细菌从土壤中分离出能够分解氨的细菌统计每克土壤样品中究竟含有多少分解尿素的细菌统计所取土壤样品中究竟有多少分解尿素的细菌A B C D解析：该实验是为了分离出能分解尿素的细菌，根据活菌计数法，计算出的是每克土壤样品中的菌株数。10尿素是尿素分解菌的氮源，因此在配制培养基时(D)A葡萄糖在培养基中含量越多越好B尿素在培养基中含量越少越好C尿素分解菌有固氮能力，故培养基中尿素为无机氮D尿素分解菌无固氮能力，故培养基中的尿素为有机氮解析：葡萄糖是微生物最常用的碳源，但在培养基中不能加入过多，否则，会使细胞无法吸水而死亡；尿素在培养基中可以作为氮源，要适量加入而非越少越好；同时尿素是分解菌的有机氮源，而不是无机氮源，在分解过程中，尿素会被尿素分解菌分解为氨。二、非选择题11某化工厂的污水池中，含有一种有害的、难以降解的有机化合物A。研究人员用化合物A、磷酸盐、镁盐以及微量元素配制的培养基，成功地筛选到了能高效降解化合物A的细菌(“目的菌”)。请分析回答下列问题。(1)培养基中加入化合物A的目的是筛选_，这种培养基属于_培养基。(2)“目的菌”生长所需的氮源和碳源是来自培养基中的_，实验需要振荡培养，由此推测“目的菌”的代谢类型是_。(3)培养若干天后，应选择培养瓶中化合物A含量_的培养液，接入新的培养液中连续培养，使“目的菌”的数量_。(4)可采用_的方法将“目的菌”接种到固体培养基上，通过_法对“目的菌”的数量进行统计，通常需要对菌落数为_的平板进行计数。(5)实验结束时，使用过的培养基应该进行_处理后，才能倒掉。解析：(1)培养基中加入的磷酸盐、镁盐以及微量元素，不能作为碳源和氮源，可推测加入的化合物A提供微生物生存所需的碳源和氮源，这样可以筛选出能够降解化合物A的微生物，这种培养基为选择培养基。(2)化合物A提供氮源和碳源，振荡可以增加培养基中氧气的含量，说明该微生物的代谢类型为异养需氧型。(3)培养若干天应该向消耗化合物A的培养基中加入新的培养液连续培养，使“目的菌”的数量逐渐增多。(4)可采用稀释涂布平板法将“目的菌”接种到固体培养基上，通过计数平板中的菌落数推算出活菌的个数，通常应该对菌落数为30300的平板进行计数，然后求其平均值作为活菌数。(5)实验结束后对所使用的培养基应该进行灭菌处理，防止污染环境和感染操作者本身。答案：(1)“目的菌”选择(2)化合物A异养需氧型(3)减少增加(4)稀释涂布平板活菌计数30300(5)灭菌12某小组同学为了调查湖水中细菌的污染情况而进行了实验。实验包括制备培养基、灭菌、接种及培养、菌落观察计数，请回答与此实验相关的问题。(1)培养基中含有的蛋白胨、淀粉分别为细菌培养提供了_和_。除此之外，培养基还必须含有的基本成分是_和_。(2)对培养基进行灭菌，应该采用的方法是_。(3)为了尽快观察到细菌培养的实验结果，应将接种了湖水样品的平板置于恒温培养箱中培养，培养的温度设定在37 。要使该实验所得结果可靠，还应该同时在另一平板上接种_作为对照进行实验。(4)培养20 h后，观察到平板上有形态和颜色不同的菌落，这说明湖水样品中有_种细菌。一般说来，菌落总数越多，湖水遭受细菌污染的程度越_。(5)如果提高培养基中NaCl的浓度，可以用于筛选耐_细菌，这种培养基被称为_。答案：(1)氮源(碳源不作要求)碳源无机盐水(2)高压蒸汽灭菌(3)无菌水(4)多高(5)盐(或NaCl)选择培养基13为了调查某河流的水质状况，某研究小组测定了该河流水样中的细菌含量，并进行了细菌的分离等工作。回答下列问题：(1)该小组采用稀释涂布平板法检测水样中的细菌含量。在涂布接种前，随机取若干灭菌后的空平板先行培养了一段时间，这样做的目的是_；然后，将1 mL水样稀释100倍，在3个平板上用涂布法分别接入0.1 mL稀释液；经适当培养后，3个平板上的菌落数分别为39、38和37。据此可得出每升水样中的活菌数为_。(2)该小组采用平板划线法分离水样中的细菌。操作时，接种环通过_灭菌，在第二次及以后划线时，总是从上一次的末端开始划线。这样做的目的是_。(3)示意图A和B中，_表示的是用稀释涂布平板法接种培养后得到的结果。(4)该小组将得到的菌株接种到液体培养基中并混匀，一部分进行静置培养，另一部分进行振荡培养。结果发现：振荡培养的细菌比静置培养的细菌生长速度快。分析其原因是：振荡培养能提高培养液的_的含量，同时可以使菌体与培养液充分接触，提高_的利用率。解析：(1)为了确定培养基的灭菌是否合格，微生物学实验一般会设置空白对照：随机取若干灭菌后的空平板培养一段时间，观察培养基上是否有菌落生成；利用平板菌落计数法的计算公式估算水样中的活菌数：M100(2)接种时接种环需要灼烧灭