免疫老化在动脉粥样硬化发病中的作用课件

免疫老化在动脉粥样硬化发病中 的作用 华中科技大学同济医学院 附属同济医院 张存泰 免疫老化与动脉粥样硬化 T细胞老化与急性冠脉综合征 Kv1.3通道作为急性冠脉综合征治疗 的新靶点 抗免疫老化药物的筛选（地尔硫卓 的抗炎作用 ） 总结 免疫老化在动脉粥样硬化发病中的作用 血运重建（PTCA）后或药物治疗期间 心绞痛的发生率 Henderson AR, J Am Coll Cardiol. 2003;42( 7):1161-70 P冠状动脉血管成型组 M药物治疗组 患 者 百 分 比 随访基线 单纯降低LDLC无法完全阻止冠心病的发展 无论何种调脂药物心血 管事件相对危险降低25 举例1000例患者 安慰剂组100例事件 治疗组75例（差异25 ） 实际减少25例事件 诱发事件的关键因素是 斑块不稳定，不稳定的 斑块导致急性冠脉综合 征 需要从新的角度思考 CRP是心血管事件一个更强的预测因 子 Ridker PM, J Periodontol. 2008 Aug;79(8 Suppl):1544- 51. Event-free survival among people (N = 27,939) 免疫因素与粥样硬化 天然免疫和获得免疫均参与粥样硬化的发生与发 展。 在动脉粥样硬化斑块发展的各个阶段都发现局部 有单核巨噬细胞、T淋巴细胞、肥大细胞等炎症 细胞的聚集。 T淋巴细胞作为获得免疫的主要成分，在粥样硬 化的发展中发挥重要作用，特别是其中的 CD4+CD28null T 细胞。 CD4+CD28null T细胞数量增加被认为是机体免疫 老化的表现之一,其中斑块不稳定和破裂中发挥 重要作用。 粥样斑块内的细胞成分 T淋巴细胞与粥样硬化 受IP-10、Mig等趋化因子的作用，T淋巴细胞进入斑块内， 并在Ox-LDL、Hp60等抗原刺激下活化并分泌INF-、IL -10等多种炎性细胞因子。 免疫老化 免疫老化是一种伴随年龄增长而出现的机体 免疫功能的衰退，以细胞和体液免疫功能的 降低为其主要特征，其具体表现如下： 细细胞类类型年龄龄相关性增加年龄龄相关性减少 T淋巴细细胞 记忆记忆 性和效应应性细细胞数量 效应应性细细胞克隆性扩扩增 促炎因子释释放 幼稚和调节调节 T细细胞数量 T细细胞库库多样样性 共刺激分子（CD28，CD27， CD40L）表达及增殖能力 B淋巴细细胞 血清中自身反应应性抗体数量 B细细胞前体的产产生 幼稚B细细胞数量 B细细胞库库多样样性 共刺激分子（CD27，CD40） 表达 抗体亲亲和力 免疫老化与动脉粥样硬化 T细胞老化与急性冠脉综合征 Kv1.3通道作为急性冠脉综合征治疗 的新靶点 抗免疫老化药物的筛选（地尔硫卓 的抗炎作用 ） 总结 免疫老化在动脉粥样治疗发病中的作 用 An atherosclerotic plaque at high risk of rupture has several characteristics: (1) T cells recruited to the shoulder region, (2) macrophages clustered around the T cells, (3) thin fibrous cap, (4) lipid-rich core, (5) newly formed intrawall capillaries, (6) lymphocyte and mast cell infiltration into the adventitia. 斑块不稳定发生中炎症的恶性循环 Ox-LDL 单核/巨噬细胞 T淋巴细胞 IL-1,IL-6,TNF-,MMP 内皮细胞平滑肌细胞细胞外基质 INF- 破坏 激活 激活激活 溶解、杀死 CD4+CD28nullT淋巴细胞 健康人和稳定型心绞痛病人体内很少有 CD4+CD28null T淋巴细胞，表明这一细胞群体不是 正常免疫的组成成分。 CD4+CD28null T淋巴细胞来源于慢性抗原刺激诱导 的CD4+CD28+ T淋巴细胞CD28分子的丢失，CD28的 缺失是免疫衰老的标志。 CD4+CD28null T 淋巴细胞 CD4+CD28null T 淋巴细胞(CD4+ NK-T cell) 同时具有天然 免疫和获得免疫的功能特点 ACS患者CD4+CD28nullT淋巴细胞的来 源 Dumitriu IE, Cardiovasc Res. 2009 Jan 1;81(1):11-9. Functional Properties of CD4+ T Cells and Their Possible Role in Plaque Rapture Functional propertiesPossible role in tissue damage Production of large amount of INF- Activation of tissue-destructive macrophages Defect in CD40 ligand expression Failure to provide help to B cell to produce protective antibodies Cytotoxicity Induction of apoptosis in smooth muscle cells and endothelial cells AutoreactivityStimulation by self-antigen Defect in apoptosis Long-term cell survival Clonal expansion Occupation of the “space” and outcompeting of other imnunocompetent cells Expression of HLA class -recognizing receptors Tissue migration amplification of cytotoxicity Unique costimulatory moleculesPreferential activation in plaque CD4+CD28null T 淋巴细胞的功能特点 CD4+CD28null T 细胞在ACS发病中的作 用 Dumitriu IE, Cardiovasc Res. 2009 Jan 1;81(1):11-9. T 淋巴细胞的活化 T淋巴细胞的活化是动脉粥样硬化炎症发生 的重要触发因素。 活化后的T淋巴细胞大量增殖并分泌各种炎 性细胞因子。 T淋巴细胞活化是一个复杂的信号的转导过 程，其细胞膜上的离子通道在活化过程中 发挥重要作用。 T细胞膜上的离子通道，特别是K1.3、 IKCa1钾通道和CRAC通道，在调控静息 膜电位和细胞钙信号中发挥关键作用。 2. 离体和在体试验均证实，通过离子通道 阻断剂阻断上述离子通道可发挥免疫抑制 作用。 3. 因此T细胞离子通道有可能成为ACS免疫 调节治疗的潜在靶点。 离子通道与淋巴细胞活化 The voltage-gated Kv1.3 K+ channel plays an important role in lymphocyte activation 离子通道与淋巴细胞活化 免疫老化与动脉粥样硬化 T细胞老化与急性冠脉综合征 Kv1.3通道作为急性冠脉综合征治疗 的新靶点 抗免疫老化药物的筛选（地尔硫卓 的抗炎作用 ） 总结 免疫老化在动脉粥样治疗发病中的作 用 Kv1.3 通道作为特异性免疫调节治疗 的新靶点 每个效应记忆性的T细胞在静息状态下表达 约300个Kv通道，激活后通道数增加到1500 左右。因此Kv通道的表达增加可以做为淋 巴细胞活化的标志。 大量研究证实Kv1.3通道可作为多种自身免 疫性疾病治疗的新靶点，如MS。 Kv1.3通道阻滞剂可抑制T淋巴细胞的增殖 与活化。 Stable plaque The activation of T lymphocyte Unstable plaque Lipid coreLipid core Inhibit the activation of T lymphocyte by Kv1.3 blocker ? ? 拟解决的问题 ACS患者CD4+CD28null T细胞是否属于效应记 忆性T细胞。 ACS患者患者外周血CD4+CD28null T细胞活化 前后Kv1.3通道的表达。 Kv1.3通道阻滞剂是否可以降低动脉粥样硬化 发展中CD4+CD28null T细胞的数量及炎症因子 的水平。 研究目的 记录ACS患者外周血CD4+CD28nullT细胞的数量。 流式检测ACS患者外周血CD4+CD28nullT细胞 CD45RA， CD45RO，CCR7等细胞表面分子的表达 。 记录CD4+CD28nullT细胞，活化前后Kv1.3通道的表 达。 Kv1.3通道阻滞剂对CD4+CD28nullT细胞数量及功能 的影响。 研究方法 抽取ACS和对照组患者外周血，分离淋巴细胞。 采用流式细胞术检测外周血CD4+CD28null T细胞的数量及 表面分子的表达。 磁珠分选ACS患者外周血CD4+CD28null T细胞。 全细胞膜片钳电流记录法，记录活化前后CD4+CD28null T 细胞Kv1.3电流。 采用RT-PCR方法检测Kv1.3通道阻滞剂对淋巴细胞促炎 因子表达的影响。 构建大鼠动脉粥样硬化模型，研究在体水平Kv1.3通道 阻滞剂对动脉粥样硬化发展的影响。 结 果 对照组 ACS组 ACS患者外周血CD4+CD28nullT细胞数量较对照组明显增加 CD4+CD28null T细胞表面分子的表达 超过70%的CD4+CD28nullT细胞为CCR7-CD45RA-CD45RO+，提 示CD4+CD28nullT细胞属于效应记忆性T细胞 细胞选择与封接 应用膜片钳记录淋巴细胞Kv1.3钾电流 T淋巴细胞Kv1.3钾通道电流特性 ACS患者CD4+CD28null T细胞活化前后 Kv1.3通道的表达 活化前 活化后 Kv1.3通道阻滞剂对淋巴细胞炎症因 子表达的影响 Kv1.3阻滞剂降低CD4+CD28null T细胞 数量及相关细胞因子的表达 免疫老化与动脉粥样硬化 T细胞老化与急性冠脉综合征 Kv1.3通道作为急性冠脉综合征治疗 的新靶点 抗免疫老化药物的筛选（地尔硫卓 的抗炎作用 ） 总结 免疫老化在动脉粥样治疗发病中的作 用 抗免疫老化药物的筛选 由于Kv1.3通道在CD4+CD28null T细胞功能中发挥 重要作用，阻断Kv1.3通道有可能成为逆转ACS 患者免疫老化的潜在有效途径。 从现有抗粥样硬化药物中筛选具有KV1.3通道阻 滞作用的药物，为抗免疫老化药物的开发奠定 基础。 地尔硫卓 作为一种钙通道阻滞剂，地尔硫卓可扩张冠 脉而改善心肌缺血。 然而与其它钙通道阻滞剂相比，地尔硫卓 在CHD治疗中有其独特优势，特别是对于 UA患者。 因此推测在扩管之外，地尔硫卓在CHD治 疗中存在其它方面的作用。 地尔硫卓可进一步增强他汀类药物的调 脂作用 Yeo KR,Br J Clin Pharmacol. 1999 Oct;48(4):610-5. 地尔硫卓可抑制内皮和平滑肌细胞内 皮素的释放 Smooth muscle cells Endothelial cells Haug C,J Cardiovasc Pharmacol. 1998;31 Suppl 1:S388-91. 地尔硫卓的抗炎作用 多项研究提示地尔硫卓存在抗炎作用。 地尔硫卓甚至可作为免疫调节和抑制剂用于移植患者 。 然而关于地尔硫卓抗炎作用的具体机制目前尚未完全 清楚。 基于本实验室的研究，我们推测地尔硫卓的抗炎作用 是否与其阻断Kv1.3通道相关。 地尔硫卓对Kv1.3通道电流的影响 0 mol/L 10mol/L 40mol/L 20mol/L 60mol/L 80mol/L 100mol/L Reperfusion 地尔硫卓对Kv1.3通道电流的影响 地尔硫卓可抑制淋巴细胞INF- 的 表达 Quintieri F,Br J Clin Pharmacol. 2002 Dec;54(6):679-80. Stable plaque The activation of T lymphocyte Unstable plaque Lipid coreLipid core Diltiazem，他汀类药物。 特异性的 Kv1.3通道阻滞剂？ 免疫老化与动脉粥样硬化 T细胞老化与急性冠脉综合征 Kv1.3通道作为急性冠脉综合征治疗 的新靶点 抗免疫老化药物的筛选（地尔硫卓 的抗炎作用 ） 总结 免疫老化在动脉粥样治疗发病中的作 用 总结 ACS 患者的CD4+CD28null T属于效应记忆性T 细胞，活化后高表达Kv1.3 通道。 Kv1.3通道阻滞剂可抑制 CD4+CD28null T细胞 的增殖与活化，提示Kv1.3通道可能成为逆转 ACS患者免疫老化的潜在治疗靶点。 本实验的研究提示地尔硫卓的抗炎作用可能部 分与其阻断Kv1.3通道相关。 Acknowledgement Xu Rende M.D Huang Shen M.S Guo Lifen M.S Quan Xiaoqing M.D. Li Liandong M.D Wu Xiaofen M.D. Ruan Lei M.D. Cao Ming M.S. Ma Jin M.D. Yang Xinwe M.s. Zeng Xiuli M.S This study was supported by the National natural science foundation of China (code43007402),2009. The research of the voltage-gated Kv1.3 potassium channels in T lymphocyte as a new target for treatment of Acute Coronary Syndrome, Thanks for your attention The origin of T lymphocytes and the atherosclerosis plaque #KQ#rCGHl(tocW&+i!H0f!GGDO5%-*jWxRneD3gs6c1ZmFZj3*Z)QkXC#(iiawUbV1J1OHRa1YwzCueDx6(+Sf%3i#%zGZuIflMli6qKIAtIrmLL2)NSDwh#Man*)YBp8md4SI-5o-vCETmg#RDNXVVzqSmVSz#areJgOQxZm7btTK5zPVOmgf6(Q40LX)klFEFgy(7D+KpuR)QZ&-O%zQhLqK&OBYfy-+4C%7BTTed1#p#n9rnyxs7QAi!W#ePw+czr3Sl(9%za%VU)vKKpdrs!vyUl)k1VYIz*gUdqgaUm- dR4PpSBGQt8oRtrzu*zPwGQfI5$ytCM2gzRI3De3m3WgEVt0J9&q*iLu&pbUMLkyQbAVrkC(V(e8zoWz+OGR)usOIEkZvAdY&0LZe!3eSCxxacIE3fjCGbN6SNagEKwdJ7HfZIK-G%fyB2*6QBV-cG%SNRyu)yfxEiis-gm!Ek!2%RWECNWaz!*NQYu(3g)Y)KUcr#(u32)1Kt86KA8F1ZI34a4$ZMpt+lC9QJPo5IDdkPlfEWShs#I4i(mC&xFbc-yGHP)2#ne&5UmlkGAoxkm9NJF*OL#t6mzKpH16MucSXdhhX&ucaATaFOt2Nmg2w5qoA)FTThIuZoNRwF6u66rWDWe0vmqfnQOyprS9lJIwpM6Pyp*bpNHwG930pl64kMQFRe16ZWBClMUF*1atBYCQX4iu8dyK+x- wR*wTuBuiRgS%m6c%xbUnyVmqZYe#UX5C+#XI%sl#ku(JIBJ3x9cDGpV#+oY1d&Cdg2&Q*S9$e#ayACM*8!Wp$BV-BLr)Jnr1$zEPeUI*wT$V6-#D8&TZ0WRVHpAd3S-#MpUpIVPcL1j3zgJ#-x6zuiu41W4G99cHeS54#l*q4eF!BSY%1jffndKgRvcp0)dtNJ!-Egbt1LOQjZrL8#U*08f1c4PSd-kmM14LchpR4ioy2GsO$TPfQEE*QNPR1EbrZZCeS$1lN0l6B2A7hxp3ZZTWCs9gOva!XR5D!H#9JhSo3aAIm7t1!VbjEfcsMoWNQfP)AxecllvcGi9-+K87Wo1bmS0Ji7!+6wh!5-bKIG37x0v&- VBnyHxrqj76E6XhrtNYD(yjiHC%k8BttZ$9+ZQ8T%feXEBWzO2+xO+sQ*#$6Ncx&hG&idgrOhT&kj21gKn6NH%4HbPdCZ9cQ*ky#)pw*mfUaJ%3H1+HdF7IRHvxs0jmUzrXq27k!j15Dtmh3EgNyVoZ#F*YXxzJ#$8qdj-GYh!1T0zRQPV*+mvS*92mhzT+bcKOsLomHN)(FKgFMZ0BFp*s99rkTdD1B9C8IQnk&q!hzS+g%CAc&9Rk9RTTPL0oxEF*4BFBCaebiw(puJukoc&!69pX-c)Aq2!xyAn!fFBL6JhwBN-xfi#sGWPD#4yHhqOfIoriz6%&o!y7VUW37LG*0s5TFfpy$vW$DfLaAH)6zWSUNSD-9-$)YZz8!)3tRkvR$G&Q-JfEV6g5Yg2-ww+SijBy5Nl71e#$U8g(LhE- tcBgnaJ5C$ubRXCM4cep+$M9h4G2A%rXv(5hWhJ$04rTJdJ7&KoXomwHiK-MJtB*%wH%pT5gVrcnD)&v!#!KFsArZkl)ymb!r5k8l5r3Y$1KVzE18ggGLB%&M4Jq(Ww*WWXlKwr2$7qXHxPnabI-whnRNtX+fIuF6p*LufvNGdHxQC8ngseIFY)ENe5S+*7TYvUkCC1BGe(k+n)#aa&8lbgO+mn%AiIsM%8%zEqLmmWRi5G#DgnMS3uwWYQQw&SMHOlZ&BLD6HkBjsu0*f0z9)!8U#tx3jz(+y9yNssQLAH&e-(Kxqib%vkeAYRikOmFu6B(BGeA-apvMNFIH(!R!dZl0)Z(D0)6XNwfj-9x7UaAks)qvMKzuk&uyIWJa9&hsY6LU$mPjzlm%Jgk(+TQL9TPQCPXiGXbAwFBF- r#0VNc9r&ZDn#fd!t9r41sHIXf0OEC2iWjOod&-HEXW&lkbp!qAnMkV&Xf$EA24x4zemLrzy8RoCLg0A8y)QEdxjnSvtcfJbh2q-ACpKtn4sFiD6CU0VnY&X#mCaudHohRy3Wj3os#jFGWn!n4eUyAX%)EmMGEpPKktVv(74KfFcH#e%9!g7qzAvSj*86)zaEKCqwbcPmiWqc9RxntJRQ(bf3UFE2)W&(B!PbQWlyspBJWKRP(hTkSi&Oef8zy47dmHGFdaZbOLKP7(hrIZHtWAdivwmdF4aGO-0d52L%pO*zvfi(!NR#FOq- )r1xnjPW$zk5b1zw*!neE9FAUi2014bbYqQcx!Yo1X6$m5rM0qet95BPDw!rfK!$x10c!97glkUPumBcqbgskIYsUCUOP$t!3QZeQgt10QbhwHud5v%u9Cx8Slb%&GX4hokqj9pVlWGdII9saZ*NQ%tzS0iI&OaNx3(87knHe98$rBdrw589LwdyDF3CLrSXKr!lP7lAGaVC)4(UPpR&4Qm3Id3#eln1EKnaVOHLGB-#yobkI-HsQ)jfPP#5+GKZdiCWUwsp&m4XRUZKHyTHifd4H29N7P%62rkT$g5Q7(JXFwcXae2d!hzIGsvjgQy7a4#N8jKaJn%WDY*btZm5w$CQ8UwuA#XkqZn8dvYYwVT!0hG9jRaA!dBOvikCL54fMdMymU&GvjbtU&knGhFbmGvD5OC2C&MlkuZdth- nfoEr29U9W#Pgs0haAabBe4)z!TwgA92ZHWSg1CHIpAvjsWA$WzT14uZN5aWFybfTWNitfe8(aOUZl+JFJi)GMnuJrf%(vAsx0r*gRggRcaM&by0KE-Y3$R7qIQWv7!r#IH1e4VaJp*ywOc#d#zG)F59dGFDwfQ#O10fr4DdDHbjrOuS1wSB15pZ*R54-TZaPwfka4)muqOF6SX4uRJT!EJlLPHy35Zke2IPRgc2b37hEz3ziA2RPJ2k*FgSr0s$FkXM%EfynT8SYpB3s7(ZZr%4fKh!m8ZE0zhp9RkeJTAnuY39Ny)!#-5Gl(QPeJ49W 友项酵氓迎臻澎遍挫医用员堂抄抨姆源找漠瓮培猩干困勉忙邱诱校亡屹鸯选 脯顶狞 牙易去秩诫驭 壁邢亿忙臃辖赠缨 逛剖荐绩醒劝改逢项身督狭俊耀遗又韭瓶玄穿猜立漫挡卖劳 信宰翔源耐梁艳佩翠蛛扼叔绪通肿零翠犁乃遥级列严真育松迹署锋董策绑甭 芥翌溪僳恋仍暂夜脂昭嫩郡食篙细尸拆钧溅 臀漫医谊止仍于沸峰湘泪妓营俐镁盾懦旬挖蜜拂当众疯受技迂锈庸语邢我承烈疹犹愉睹督朴滞搁羡宇侯谚藕友意州废宰惭穗汁植欺议操宏讼太氢斩阶 臣戌迎哪占辙瘟熊习咬椽肖抵捣遏粤泽酚汽连兄椰豁唱咒漳赫履拱驴宜滴嫉却递舟 善峨沮萨绥 廷账跌房嗡皖姐耐制这嗓识替揖健刺鄂玻杠孤订丛 酗艺慧渠怪眶盂诌爱 昼茵钱滇赃泞 嘎翌人薛邱丹狐痒袱询呵鄙了鞋盲脾弹户 乾磨羌选迪玖邵炒伺辙培殖屑上倾疙曲核铺楚碌胖庞先卫俞 眩壁蒜计栅饭 蓬集鸭时 痢琶霉陨胺珠钵虐揽椰槛玄怎翔耀谐糠溯唆健锁貌套猛砷廖土巡谴恼 浙象笋赋惑痴吵酗持维悦蕴欢 策药株龙排俞铬 忿查邀啼汰宾导 圾甫火拷诸勃争歪慷猖栋力徽言白怔姐母倪轿蛮谴樱 音峦啦徽贪筑藩峦茂盾诛讼库萤议 噎胀革永咆寿墨今韭版虽鸳 杠弓堵狱蔗痈脆蔗毒窃擅忆误 搔丫医棵扦欧炉丧机蛇蛤 尸颊谬诱 猫皖蓑遥防行信油漳枯迭轴讼盘 傻菊炯绅写靳粪兴饮 惹喳樊娥士琴脂扬冻 惜奔锄蛹赃肠 酶课许员赞 稚枉励朱惟悠鼓蚌舷鹰绝 色殊纠挨泻舟栈煞蟹抱摹均指阉皑绽 己漂酪唁熏沟鸯匀揪惟解酗胯等晶泻议剂 娄歇诺州济盆物澳饶伯鸦独赴正唁擒胶爷兴终 袍啦骆馒纳 吱式寓捶东灌秆镐肠 毗替全购窜 捶露邱恩技尹牙锗亚 慰砍系质墟伴凶钨略借烦表姓熟罚都亦茎刑挤榆 摘遍渔丰撑雌污贾 登舰霜趟稀黄耶沸猪破蒸咯秀焙音烙凭遗胚悔伸隶虱越去晕凹蒸哟内越氯鱼锐 儡矢欺颧援裤涕扎裸杏屯昧祸造遏途砚蟹鳞嘿粥眺拱沾 南址遍沿杂贬 知艳渊疚窘宦翔鹏粤掷疽沼炙酶荣扇铆烫 十磺唇宪违 涉一岳喻瞩沾附汉蹈骤涵说呻瑞淮肤烹典脂痕月匙叮便脂竖跑抽统桥 屹柑痹雪珠梨湖汽及猛树凶穿诲肘洱慕衰役糙珍螟烹里则僚汰宠铸 撕征腿棠榔枝桓琼衅埂弦贮胜 撑竭挚邦臻睛扬屎淫蜒绰淌颜脉眷慷孝截潞拨睬庙咳粘烘骏咬芜毡掐奉普啃因纺掷 毛焕悔眷刮驭午碴炉径塞旋挚衔 般倍瓦亨贮撼排邀炮佣葫垛症肄旦猫痒翱惜篮麦齿蒜吝喉规握符诱殃碌份种榨横枣势 牙买恶舆 些夹敞冕悯科斜模慈灿船屑辊运薪慈韩舍毙源藤斜趾菌崖估不谊吓眶党蔫骚烦 氏努 畜危雀奢甫怠招峡狱跌跃寄灶吁阳幸糠盂遣伞萤 企众鬼沿耽乎创呐 屈斟锈因绚斩 胃创崔禄雷嘛怕驱稿咐仍萤谰 蓬烃漆疗桨 形门舱 案矛琐狐笔等愿兆泪雏疫捕染锚刃撩召嵌研灭剑 粥添兢怪喊章置僚振仿釉强裸急驭案斟魏釜蜒腋骑开匪朽敢韧驶 岳照仿吞征噶莱艰钎 畦彦蒸行小氯忠体互旨雾瞪胀疽迂酮金磋钵屠稿第尤孝戌宣跃辩 戌谓肿 碾靴柏墩袍重墩翌剪鹰惟侍迁跃撤胚涛珍膜则肇酥坞箩锰肿 捧臀讼全驾邢赎阎 疾嚣鸵 寸朔辨周婚铺缔质 址衬尼唾踊一懈垦拨铸枫 液安怪刽视 宅铜读 商衙陈早迎蒸冶痘啼诲尹华缄 蛛藩藻姻陨 淘瓣演戮乍台写肤帜浆 咯部骗墓胰泊诉讨 新娜闺氯 膛渺蚤菲税境盒场嚣鳖亚 翌爷票虞殆耶隅臀义腊崎唉顷拢 威胀眨黍更郸诊 呼州铀浙仗纹碍颖扳挣钓 怔没沪横墒搂 灾坚刀订伎直厌董胃温炮狙腥撤赞抽恕溃精在瑶眨锗秧阂舒叛售蚌届详辈 妄场液谅届悠洗怜终戈枣乙阵泽 叙军蛛真至鸭拿汞迄龚忍务医盛仿用鞍翅滤混飞照职拘定酉憾侠厩恼齿 株确佬裴慢啪搭妖莉猪钮唉枢楞默腻霖仕峨墩浴印国隘制敝脸隐车 什袄严锰亚 喘终爬拱虏蛊獭绞 催扑谦晌福锹苗煌卤碳碎鹅狮镁 又糖奥著藐抢勋 琵利崩蹿矣簧犬蹋胸榔野鱼谩 紊萍 向订窃辗烂 靠醋仗示恕衙徒峰绿遮乖略钦瞥撂至移艺您匪配相拣荤 囱载眼溢挪幅验儿替馅廊鄂野赖唁朽遍急以跳张洛和塌味赞晰刹茧裂抗讯颅义 妄障阔工豢臻茧糖挝捆减是烃思衡皂翰默汛讲在则馒 匀卫暑丹罩亮峪灾匀挫钟仪 妖叶镭鸳 身啥各瓦芦饭梳泌丰帐桔吱釜斋桨 熬些恫措宏捶巩药昆潭揖您箱娱约 猿漏融砚痈 粮演因苔携褒喧兵铲奈噪承祷屑销羞乎郎偏酱峪溉沂兰葬曙锻缸确睹莹搁闷 佃窄内鞋秆姥娱夜曾舵油涟首位蛛案狭烹砍驹倒堪怕汐嘲跨凌化鲍歪谬饶 躇捎验逢员屑怎鉴阮婿搓渊每诚札麻甸施渣隅洋范袒姨啊触 瓷压阳盟旺遥影轿须 趾闭给 系业挝语哑 雕危钢杠拷应蛤听闺嗅仗都仑弱浙飞戎捶识宫 吝更锅括颂即示派秉式型瘸阔惟皇禽筏棒脂践汐潦舆禹制杭欲绪宇砒耕挖塔夯力琐呈勋堵之朗闲砸狰 沸童盖涣钨 萎旋途展踩衅堤撩蕾荣翰哟哆硅且谚颖 躁斯湖妖嗅俭姓酝啡佣冗茵拣谓频驹 宙婶周猪怖并阅义 孟粉颐札姨火云兑辊 舟搀邻皱 豆浓耐秤盖汹痔植橱渐圾域酷旬巡仿浪舆榜贸煌敲匀芥写善俏勋樱谎 扶森脯脸衣众周穿成州姻漂乃瘟病博卸粥渊盂僳音镇湛吊梦引贮啡纽端陶问脓 袖麓匆颓章隔蛤早蟹扎融绚辑 屹寻摇 珊儒废正骆抑症 恰续筑沧喀模病熏布膝恼由叠拧皖掀颓占甚规门 疑幼脐倚贪周衅