狂犬病疫苗质量评价唐建蓉课件

1 人用狂犬病疫苗质量评价及方法概述 唐建蓉 中国药品生物制品检定所 2 主要内容 1人用狂犬病疫苗国内市场概况 2质量标准对疫苗的安全与有效性评价 32010版药典对狂苗质量要求的突出点 4疫苗上市前临床试验在质量评价中的作用 5规模化生产的疫苗上市后质量评价 6非标准检验方法在质量评价中的作用 7继续性质量标准的研究工作 3 一. 人用狂犬病疫苗国内市场概况 n生产企业： 两家国外企业: 深圳赛诺菲巴斯德生物制品有限公司 Chiron Behring Vaccines Private Ltd.(德国和印度) 4 14家国内企业: 辽宁成大生物股份有限公司 (Vero细胞 ,生物反应器) 广州诺诚生物制品股份有限公司 (Vero细胞 ,生物反应器) 吉林迈丰生物药业有限公司 (Vero细胞 ,生物反应器) 辽宁依生生物制药有限公司 (Vero细胞 ,转瓶) 长春长生生物科技股份有限公司 (Vero细胞 ,转瓶) 江苏延申生物科技股份有限公司 (Vero细胞 ,转瓶) 宁波荣安生物药业有限公司 (Vero细胞 ,转瓶) 5 武汉生物制品研究所 (Vero细胞 , 转瓶) 兰州生物制品研究所 (原代地鼠肾细胞 ,转瓶) 河南普新生物工程有限公司 (原代地鼠肾细胞 ,转瓶) 吉林亚泰生物药业股份有限公司 (原代地鼠肾细胞 ,转瓶) 大连汉信生物制药有限公司 (原代地鼠肾细胞 ,转瓶) 福尔生物制药有限公司 (原代地鼠肾细胞 ,转瓶) 大连金港安迪生物制品有限公司 (Vero细胞 ,转瓶) 6 n疫苗毒株和细胞基质： aG株 : 原代地鼠肾细胞或Vero细胞 CTN-1株 : Vero细胞 PV株 : Vero细胞 PM株 : 人二倍体细胞或Vero细胞 Flury-LEP株 : 鸡胚细胞 7 n生产工艺：细胞工厂 (鸡胚细胞) 转瓶(地鼠肾细胞或Vero细胞) 生物反应器(Vero细胞 / 微载体) n剂 型： 液体或冻干 (0.5ml /剂，1ml/剂) n效 期: 液体苗1年效期 冻干苗有不同的批准效期 (1, 1.5或3年效期) 8 n Vero细胞和原代细胞所产狂苗的变化趋势 2006年 2007年 2008年 9 n 国内狂苗生产企业逐年递增趋势 10 n 国产狂苗年批数和总量递增趋势 11 二. 质量标准对疫苗的安全与有效性评价 n 现行有关质量标准： WHO人用狂犬病疫苗规程 中国药典 2005年版三部 企业注册标准 YBS xxxxxxxx 12 n主要的安全性评价指标： 病毒灭活验证 纯化原液蛋白质含量 牛血清白蛋白残留量 Vero细胞DNA残留量 无菌检查和异常毒性检查 细菌内毒素检查 硫柳汞含量和游离甲醛含量 13 n有效性评价指标： 疫苗的效价测定与热稳定性试验 免疫后中和抗体检测 上述三种评价的互补与不足 14 三. 2010版药典对狂苗质量要求的突出点 n抗生素的添加要求及检测 n防腐剂的添加要求及检测 n对疫苗生产细胞基质的宿主蛋白残留量检测 n细菌内毒素尤其是Vero细胞DNA残留量 15 四. 疫苗上市前临床试验在质量评价中的作用 n小量生产的精制疫苗 n临床试验中的安全性监测 n小鼠中和试验的血清学效果评价 n快速荧光灶抑制试验(RFFIT)的血清学效果评价 16 五. 规模化生产的疫苗上市后质量评价 n IV期临床试验 n 批签发制度 n 接种点对免疫后中和抗体的检测 n 国家管理当局定期监督检验 n 用户投诉 17 六. 非标准检验方法在质量评价中的作用 n非标准方法的建立及标准化 ELISA鉴别检测 ELISA狂犬病毒抗原含量检测 电泳法检测非法添加核酸类物质 其它方法 18 n 对标准技术的补充作用 n 应用意义(完善产品质量、净化市场、行业违规查处) n 非标准方法的应用实例 19 ELISA法检测狂犬病毒抗原理图 20 对不同时期或不同温度条件下 的狂犬病疫苗检测结果(cut off 0.23) 编号贮存时间和温度OD450nm 1 4C，过效期0.5年2.56 2 37C，2周2.73 3 56C，2 月2.71 4- 20C，7年2.76 5- 20C，10年2.61 6- 20C，17年2.51 7- 20C，20年2.61 21 对不同狂犬疫苗株的检测结果(cut off 0.23) 株名原液或成品OD450nm PV3 批均 2.38 PM7 批均 2.51 CTN7 批均 2.37 aG12 批均 2.16 Flury LEP2 批均 2.48 ERA1 批均 2.35 (兽用减毒活疫苗) 22 非常标准方法在监督抽样检测中揭示的问题 n上市后产品还在效期内就出现 效价不符合规定 n监督检验样品与中检所批签发 收检样品(同批号)之间的抗原含 量差异 n高效价疫苗中的抗原含量检测 23 n产品中添加具有“佐剂”作用的核酸物质及其定性分析 24 聚 肌 胞 的 分 子 结 构 示 意 图 肌苷酸肌苷酸 ( ( I I ) )Poly Poly I IPoly Poly I: I: C C 胞苷酸胞苷酸 ( ( C C )