级高效液相色谱法测定小儿速效感冒冲剂课件

用高效液相色谱法测定小儿速效感冒 冲剂中对乙酰氨基酚的含量 1 HPLC方法概述 2 仪器操作 3 数据处理 高效液相色谱实验室 * 【分离】 【定性】 【定量】 1 2 3 标准品 样品 Date n分离原理：基于试样中各组分在固定相和 流动相间平衡分配的差异而达到分离的目 的。 n定性依据：保留时间的相对性，通常相对 误差不能超过5。 n定量参数：常采用峰高、峰面积、相对峰 高、相对峰面积。 n定量的方法：（1）面积归一化法 （2） 内标法 （3）外标法 Date 外标法也称标准曲线法。配制一系 列对乙酰氨基酚标准溶液进行色谱 分析，在严格一致的条件下，由所 测定的峰面积对应浓度作图，得到 标准曲线，再根据试样中的对乙酰 氨基酚面积，由标准曲线算出其浓 度。 Date 高效液相色谱仪的结构一般可 分为4个主要部分： 高压输液系统， 进样系统， 分离系统, 检测系统。 此外还配有辅助装置：如梯度 淋洗，自动进样及数据处理等。 高效液相色谱仪 Date Date 高效液相色谱仪1 Date 高效液相色谱仪2 Date 高效液相色谱仪3 Date 高效液相色谱仪4 Date 1. 流动相（洗脱液） 2. 储液槽 3. UV230+紫外-可见检测器 4. P230/P230p高压恒流泵A 5. P230/P230p高压恒流泵B 6. 梯度混合器 7. 带泵控功能的色谱工作站 8. 高效液相色谱柱 9. Rheodyne7752i高压样品 进样阀 10. 在线脱气机 高效液相色谱仪5 Date 用高效液相色谱法测定小儿速效 感冒冲剂中对乙酰氨基酚的含量 高校液相色谱仪器操作实例 Date 【试剂】 甲醇(色谱纯) 水为高纯水 外标标准样，对乙酰氨基酚(中国药品生物制品检定所 )的甲醇溶液系列。配制方法：精密称取在105 干燥 至恒重的对乙酰氨基酚对照品25 mg ,置25 ml 量瓶中, 用甲醇溶解并稀释至刻度,摇匀,备用。 待测样品：小儿速效感冒冲剂，称取一定量的药品， 研细，精密称取适量(约相当于对乙酰氨基酚12 mg) , 置50 ml 量瓶中,加甲醇35 ml ,超声10 min ,取出,放置至 室温,用甲醇稀释至刻度,摇匀,滤过,再经0. 45m 微孔 滤膜滤过,即得。 Date 【实验条件】 色谱柱：20 cm4.6 mm I.D., C18H37 (ODS)，5m 流动相：甲醇-水(35+65) 流速：0.8 mLmin1 检测波长：249 nm，灵敏度0.08 进样量：15 L Date 【实验步骤】 准备流动相。将色谱纯甲醇和色谱纯水超声 波脱气后加入到仪器储液瓶中。 检查电路连接和液路连接正确以后，接通高 压泵、检测器和记录仪的电源。设定操作条 件为：流速0.8 mLmin1，压力上限2104 kPa (约3000 psi)，检测波长249 nm。 Date 【实验步骤】 进样：待基线平稳后（建议观察检测器的读 数显示），将进样阀手柄拨到“Load”的位置 ，使用专用的液相色谱微量注射器取15L 样品注入色谱仪进样口，然后将手柄拨到 “Inject”位置，同时按一下检测器的标记按 钮，同时计时，记录色谱图。 Date 【实验步骤】 重复（3）的实验，依次分别吸取15L的五个 标准溶液进样，记录各色谱数据。 吸取15L的试样溶液进样，记录色谱数据。 实验结束后，按要求关好仪器。 Date 关好仪器要求： 1、实验完毕及时关闭检测器（便于保护检测器， 甚至可延长检测器的寿命）； 2、冲洗进样阀：将进样针插入进样器，先用流动相或样品 的溶剂，35次，再用甲醇冲洗，35次；再旋动进样阀按上法冲 洗，35次；最后把进样器上的进样针拔掉，安上配备的冲洗头（ 白色的圆形配件）用甲醇冲洗35次，即可。将进样针插到进样器 上保存，盖好红色保护盖； 3 、冲洗色谱柱：先用流动相冲洗约1015分钟，再用含 5%甲醇的水冲洗1020分钟。最后用高浓度甲醇（含甲醇85%以 上）溶液或纯甲醇冲洗，时间约2030分钟； 4、关机，根据提示依次关闭桌面，最后关闭工作站、 恒流泵。 Date 【数据记录及处理】 1、记录实验条件 （1）色谱柱： （2）流动相：甲醇水(35+65) （3）流速：0.8 mLmin1 （4）检测波长：249 nm，灵敏度0.08 （5）进样量：20 L Date 2、处理色谱数据 浓浓度/mgmL-1进样进样 量/LtR/minA/mVs 标标准溶液1 标标准溶液2 标标准溶液3 标标准溶液4 标标准溶液5 小儿速效感冒冲剂剂 Date 3、绘制乙酰氨基酚峰面积-质量浓度标准 曲线，计算回归方程和相关系数。 4、根据试样溶液中的乙酰氨基酚面积值 ，由标准曲线计算出小儿速效感冒冲剂 中乙酰氨基酚的质量分数 Date 【思考题】 1. 流动相为什么要脱气？ 2. 试考虑若改变流动相的组成比，图谱有 何变化？ 3.为什么要对色谱分析中的